陕西省卫生厅科学研究基金(2010D40)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：王晓侠姚小宝朱宏亮张少强陈菁华更多>>
- 相关机构：解放军451医院西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：陕西省卫生厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰环氧化酶-2抑制人表皮样喉癌细胞系增殖和侵袭的研究
- 2013年
- 目的构建沉默环氧化酶-2(COX-2)基因重组慢病毒,观察其体外侵袭的抑制作用,从而探讨干扰COX-2抑制喉癌细胞增殖的作用机理,为喉癌的治疗提供新的思路。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2基因在人表皮样喉癌细胞(Hep-2)中的表达情况。利用上海吉凯公司RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体系统,构建针对COX-2基因慢病毒RNAi表达载体。转染Hep-2细胞,干扰COX-2基因的表达,实时定量PCR检测干扰前后基因表达变化。利用生长曲线测定干扰载体转染前后细胞生长速度变化。流式细胞仪检测细胞的生长周期。Boyden侵袭小室法测定体外侵袭力。结果成功构建了COX-2慢病毒RNAi表达载体,并建立了干扰COX-2基因的Hep-2细胞系。实时定量PCR检测COX-2基因在Hep-2细胞系中过表达被显著抑制。生长曲线测定,COX-2基因干扰后细胞增殖明显变慢。流式细胞仪检测细胞的生长周期可见干扰组诱导Hep-2细胞凋亡,转染G0～G1期细胞数量明显上升,S期细胞减少,表明siRNA干扰Hep-2细胞后,细胞由G0～G1期进入到S期受到阻滞,细胞增殖速度下降。体外侵袭实验中,Hep-2-AS侵袭细胞数(31.0±1.8)显著低于Hep-2细胞(104.0±2.6)及Hep-2-P细胞(99.0±2.7),差异有统计学意义(P<0.05)。结论喉癌中过表达的COX-2基因被干扰后表达明显降低并显著抑制细胞的生长速度和侵袭能力。同时验证了COX-2基因RNA干扰在进行抗肿瘤的治疗中潜在的应用前景。
- 王晓侠姚小宝张少强
- 关键词：喉癌环氧化酶-2基因慢病毒
- EGFL7基因过度表达与喉癌分化、转移及预后的关系被引量：1
- 2011年
- 目的探讨喉癌组织中EGFL7基因mRNA表达与喉癌分化、转移及临床预后的关系。方法收集2008年5—11月共42例行喉癌手术患者的切除标本。用免疫组织化学法检测EGFL7蛋白在42例喉癌组织和配对癌旁组织中的表达情况,提取肿瘤及癌旁组织配对标本的总RNA,用逆转录(RT)-PCR方法测定EGFL7基因表达,蛋白质印迹法测定EGFL7蛋白的表达,并结合临床资料,对EGFL7基因差异表达与喉癌患者临床表现的相关性进行分析研究。结果对42例配对标本分别进行EGFL7mRNA荧光检测比较,30例标本的肿瘤组织中EGFL7基因mRNA表达明显高于癌旁正常喉组织。22例标本的肿瘤组织中EGFL7蛋白表达明显高于癌旁正常喉组织。EGFL7mRNA的表达与喉癌淋巴结转移和浸润深度密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、吸烟、肿瘤分化程度等无关(P>0.05)。结论 EGFL7基因在喉癌组织中表达状态与喉癌的生长和浸润转移关系密切,EGFL7基因可望作为喉癌病情发展及指导临床治疗的标记物之一。
- 王晓侠姚小宝嵇宪生陈菁华李蕾朱宏亮
- 关键词：喉癌EGFL7肿瘤转移预后
- Bmi-1基因RNAi对喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响被引量：3
- 2012年
- 目的:构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对喉癌细胞Hep-2增殖、侵袭能力的影响。方法:利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL2GFP,构建Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1。实时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测稳定转染vshRNA-Bmi-1后喉癌细胞中Bmi-1mRNA及蛋白的表达;克隆形成实验及小室侵袭实验检测喉癌细胞增殖和侵袭能力的变化。结果:稳定转染vshRNA-Bmi-1后Hep-2细胞Bmi-1mRNA表达均明显下降,Hep-2细胞中Bmi-1蛋白表达明显下降。抑制率分别为79%及88%。Bmi-1干扰后Hep-2细胞增殖减慢、侵袭能力减弱。结论:成功构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1mRNA和蛋白在喉癌细胞Hep-2中的表达。Bmi-1基因的RNAi能抑制喉癌细胞Hep-2的增殖和侵袭能力。
- 姚小宝王晓侠张少强朱宏亮
- 关键词：喉肿瘤小分子干扰肿瘤浸润
- EGFL7基因RNAi重组慢病毒的构建及其对喉癌细胞侵袭的抑制被引量：1
- 2011年
- 目的:构建类表皮生长因子域7(EGFL7)基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒,观察其对喉癌体外侵袭的抑制作用。方法:筛选确定的EGFL7基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的pLV载体连接产生LV-sh EGFL7慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用重组慢病毒体外转导喉癌细胞,Western blot法检测喉癌细胞EGFL7蛋白表达。Boyden侵袭小室法实验观察转导shRNA后的喉癌细胞侵袭能力的变化。利用克隆形成实验检测EGFL7基因沉默对Hep-2细胞集落形成能力的影响。结果:成功构建EGFL7的慢病毒载体LV-sh EGFL7,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×108 TU/L。转导siRNA的喉癌细胞EGFL7蛋白表达阴性。EGFL7siRNA转导后喉癌胞体外侵袭能力下降。EGFL7基因沉默组细胞克隆集落形成率与Hep-2组细胞及空载体组细胞比较,细胞克隆集落形成率显著减低。结论:成功构建人EGFL7基因RNAi慢病毒载体,EGFL7基因沉默对喉癌细胞体外侵袭有明显的抑制作用。沉默EGFL7后,Hep-2细胞集落形成能力显著减低,即下调EGFL7基因表达可在一定程度上抑制喉癌细胞的锚着不依赖性增殖能力。
- 王晓侠姚小宝嵇宪生陈菁华李蕾朱宏亮
- 关键词：EGFL7喉肿瘤慢病毒属
