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RNA干涉抑制存活素表达并诱导HeLa S3细胞凋亡的研究被引量：2: 2005年; 选择3个(S1,S2,S3)靶向存活素基因的siRNA序列,构建相应的RNA干涉载体pTet-U6-S1,pTet-U6-S2,pTet-U6-S3,将它们分别转染HeLa S3细胞,采用RT-PCR和W estern印迹检测分析转染对HeLa S3细胞内源存活素表达的影响,结果表明,针对存活素3’端非编码区序列的干涉载体pTet-U6-S3转染细胞后,存活素的mRNA水平和蛋白水平均明显下调,抑制水平高于S1序列.与对照相比,S1,S2和S3片段对存活素mRNA的抑制率分别是20%,12.5%和40%,对存活素蛋白的抑制率分别是39.2%,17.0%和58.6%.流式细胞术检测结果表明,抑制存活素表达后,HeLa S3细胞凋亡比例显著提高.; 王瑞瑛梅柱中董燕钱俊杰赵国伟田宝磊董申罗贵民孙志贤; 关键词：存活素 RNA干涉凋亡 HELA

人外周血活化淋巴细胞中Survivin蛋白表达的分子机制研究被引量：2: 2008年; 目的:探讨活化淋巴细胞中Survivin蛋白诱导表达的信号转导通路、分子级联反应和生物效应,揭示Survivin蛋白表达调控的分子机制。方法:用PHA和rhIL-2刺激培养人外周血单个核细胞,附加JAK抑制剂—AG490的处理,以Western blot检测Survivin和相关蛋白的表达;以流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞分裂增殖。结果:刺激培养的细胞按照时序先后出现的分子和细胞学反应为:Stat3和Stat5磷酸化→CyclinD3、CyclinE蛋白水平上调→细胞进入S期及Survivin蛋白起始表达→细胞有丝分裂及Survivin蛋白表达水平增加。AG490对于上述反应均呈现明显的抑制作用,但对周期抑制蛋白P21和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平没有影响。结论:Survivin蛋白的表达依赖JAK-Stat信号转导通路的早期活化,通过上调CyclinD3和CyclinE周期蛋白水平,启动细胞周期的运行,诱导Survivin蛋白的周期时相依赖性表达,参与细胞有丝分裂与增殖。; 董燕梅柱中钱俊杰宋宜田宝磊刘斌孙志贤; 关键词：SURVIVIN蛋白活化淋巴细胞信号转导

抑制端粒酶催化亚基的表达促进Survivin蛋白的降解被引量：9: 2005年; 背景与目的:研究表明,在肿瘤细胞中端粒酶催化亚基(hum antelom erase reverse transcriptase,hTERT)与存活素(Survivin)的表达具有相关性,本研究拟探索肿瘤细胞中hTERT与Survivin在功能上是否存在相互调控作用。方法:采用反义核酸分别抑制survivin与hTERT在H eLa S3细胞中的表达,端粒重复扩增法检测细胞中端粒酶活性的变化,并分别采用W estern印迹与RT-PCR分析细胞中Survivin蛋白水平与m RNA水平的变化,M TT法检测H eLa S3细胞的增殖变化。结果:采用反义核酸抑制H eLa S3细胞中survivin的表达对端粒酶的活性没有影响,但是采用反义核酸No.14抑制hTERT的表达可以显著降低细胞中Survivin蛋白水平,而m RNA水平未受影响。而且当反义核酸No.14的浓度在200～1000nm ol/L范围内时,Survivin蛋白水平的下降与反义寡核苷酸的浓度呈正相关,这种下降可以被泛素化蛋白酶抑制剂lactacystin和M G132所抑制。此外,在H eLa S3细胞中同时抑制hTERT与survivin的表达可以协同性地抑制细胞增殖。结论:抑制H eLa S3细胞中hTERT的表达可以促使Survivin蛋白通过泛素蛋白酶体途径降解。; 梅柱中郑晓飞董燕宋宜刘斌孙国敬孙志贤; 关键词：端粒酶存活素反义寡核苷酸

人外周血活化淋巴细胞survivin基因的转录激活和表达相关的信号转导通路研究被引量：5: 2004年; Survivin是与细胞增殖和细胞凋亡调控密切相关的重要功能蛋白质 ,也是肿瘤临床诊断的分子标志物及治疗研究的理想靶标 .由于发现人外周血活化淋巴细胞存在Survivin蛋白的显著表达 ,故以植物血凝素 (PHA)和IL 2共刺激培养的正常人外周血单个核细胞为实验材料 ,采用RT PCR、蛋白质印迹以及细胞周期分析等实验方法 ,观察淋巴细胞活化与Survivin蛋白表达之间的相互关系 ,并利用 3种激酶抑制剂探索了淋巴细胞活化所致Survivin蛋白表达相关的信号转导通路 .实验结果表明 :人外周血单个核细胞在刺激培养 36h前后出现survivin基因的明显转录激活和蛋白质的起始表达 ,表达产物的水平随培养时间的延长而增加 ,且具有明显的细胞周期和周期时相依赖性 .JAK2的抑制剂AG4 90阻断细胞周期的运行 ,且强烈抑制survivin基因的转录激活和蛋白质表达 ,PI3K和MEK的抑制剂Wortmannin和PD980 5 9也有一定程度的抑制作用 .所得实验结论是 :survivin基因的转录激活和蛋白质表达与淋巴细胞活化相关联 ,代表细胞处在增殖状态 .JAK2介导的JAK STAT信号通路是淋巴细胞活化 ,Survivin蛋白表达必需和最重要的信号转导通路 ,PI3K和MEK介导的信号通路也具有一定的影响作用 .; 董燕梅柱中宋宜孙国敬钱俊杰刘斌刘华孙志贤; 关键词：SURVIVIN 活化淋巴细胞信号转导细胞增殖

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国家自然科学基金(30300416)

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