国家重点基础研究发展计划(2010CB126304)
- 作品数：9 被引量：46H指数：5
- 相关作者：尤锋吴志昊张培军徐冬冬文爱韵更多>>
- 相关机构：中国科学院上海海洋大学中国科学院研究生院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学天文地球更多>>
- 斑马鱼ciarta基因启动子低温诱导核心区域的鉴定
- 2016年
- 之前研究表明在低温胁迫下斑马鱼多个组织中,circadian associated repressor of transcription a(ciarta,也称为c1orf51)基因被广泛诱导表达。为了鉴定ciarta启动子中受低温响应的最敏调控区域,克隆5个不同长度的截短片段(-1 992^+100 bp,-1 354^+100 bp,-881^+100 bp,-634^+100 bp和-247^+100 bp),插入到荧光素酶报告载体p GL4.10中,随后将载体转染到斑马鱼来源的ZF4细胞中,研究这5个截短片段低温诱导基因表达的能力。结果表明,低温条件下,5个截短片段都能显著诱导下游基因的表达,其中-881^+100 bp截短片段表现出最高的启动子活性(达5.61±0.53倍)。通过对启动子中转录因子结合位点的预测结果进行分析发现,与-634^+100 bp截短片段相比,-881^+100 bp截短片段含有一个已知的低温调控元件(BCL6的结合位点),进一步证实BCL6的结合位点具有低温诱导基因表达的能力。实验鉴定出的ciarta启动子低温诱导核心区域可以作为一个工具来诱导基因在低温下的表达,为相关研究提供帮助。
- 张东胡鹏陈良标
- 关键词：斑马鱼启动子BCL6基因表达
- 牙鲆dmrt1基因的克隆及其与P450arom基因的组织表达分析被引量：13
- 2010年
- 通过基因组步移和3’RACE获得了牙鲆(Paralichthys olivaceus)dmrt1的cDNA全序列,该基因开放阅读框全长909bp,其编码的蛋白具有高度保守的DM结构域,5’UTR区含有性别相关转录因子Sox9和Sox5的结合位点。牙鲆dmrt1基因只在牙鲆的性腺中表达,且在精巢中的表达明显高于卵巢,表明牙鲆的dmrt1可能是一种性别相关基因。同时,对牙鲆的另一性别相关基因P450arom在成体各组织的表达分析结果表明,该基因除在牙鲆的性腺中有表达外,在肾脏、脾脏、鳃和脑等其他组织中也有不同程度的表达。牙鲆P450arom基因在性腺中的表达也存在两性差异,其表达模式与dmrt1的正好相反,在卵巢中的表达量明显高于精巢。
- 文爱韵尤锋孙鹏徐冬冬吴志昊马得友李军张培军
- 关键词：DMRT1P450AROM
- 牙鲆sox9基因的克隆与表达研究被引量：5
- 2011年
- 通过Genome walking方法克隆得到了牙鲆(Paralichthys olivaceus)sox9的基因组全长序列,对其在成鱼各组织的差异表达进行了RT-PCR分析。结果显示:牙鲆sox9基因全长3 573 bp,包含3个外显子和2个内含子,编码的蛋白全长478 aa,含有高度保守的HMG结构域;sox9基因在性腺的表达具有两性差异,精巢中的表达明显强于卵巢中的表达,属1个性别相关基因,但其在肝脏、心脏、鳃、脑、眼和胃等多种组织中也有不同程度的表达。据此进一步分析和讨论等sox9基因在牙鲆性腺发育中的作用。
- 文爱韵尤锋孙鹏徐冬冬吴志昊马得友李军张培军
- 关键词：SOX9基因克隆
- 牙鲆GH基因第1外显子区微卫星标记与幼鱼生长性状的相关分析被引量：6
- 2011年
- 以牙鲆(Paralichthys olivaceus)一个养殖群体中的100个个体为研究材料,分析了其GH基因第1外显子区域中微卫星座位的多态性,同时对各基因型与其体重、体长等生长性状进行了关联性分析。结果表明,该外显子微卫星座位具有一定的多态性,共检测到3个等位基因(A、B、C)、5种基因型,这3个等位基因的频率分别为0.339、0.609和0.517;该座位的观测杂合度及预期杂合度分别是0.540 3和0.511 2,多态信息含量及有效等位基因数分别是0.423 8和2.045 8。One-way ANOVA统计结果显示,基因型为AC的个体体重、头长和体高明显大于其他基因型个体(P<0.05),C是一个对体重、头长和体高有利的等位基因。
- 倪静尤锋刘思思吴志昊徐冬冬文爱韵徐永立张培军
- 关键词：牙鲆幼鱼微卫星遗传多态性
- 养殖牙鲆性类固醇激素的周年变化被引量：1
- 2013年
- 通过放射性免疫方法测定和比较了养殖牙鲆(Paralichthys olivaceus)成鱼血清中两种重要的性类固醇激素—睾酮(T)和雌二醇(E2)的周年变化规律。在雄性个体中,从4月份开始,随着水温的升高及繁殖期的开始,T和E2含量显著上升并在6月份达到最高峰;之后,T和E2含量逐渐下降并在第二年3月左右降低至最低水平。雌性牙鲆个体的E2含量于3月份开始慢慢增高,于6月份达到最高峰;随后,E2的含量逐渐降低并在1月份达到最小值;而雌性个体中的T的含量在2月和6月份出现两次高峰。结果表明,T和E2对牙鲆的性腺发育具有十分重要的作用,在雌雄个体中T和E2均呈现出周期性的变化。
- 孙鹏吴志昊尤锋李军
- 关键词：牙鲆性腺发育睾酮
- 斑马鱼GSTM单核苷酸多态性与低温耐受性的相关分析被引量：5
- 2015年
- 为分析谷胱甘肽硫-转移酶M基因(glutathione S-transferases M,GSTM)与鱼类低温耐受性的相关性,本实验运用PCR-SSCP技术研究了130尾斑马鱼(Danio rerio)GSTM基因5?UTR、3?UTR和第一内含子序列的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs),同时分析了筛选到的基因型与其低温耐受性状的关联性。结果显示,在其5UTR区域检测到AB、BC、AC 3种基因型个体,共A、B、C 3个等位基因,其观测杂合度和期望杂合度分别是1.000和0.570,多态信息含量为0.472,所检测群体在该座位偏离了Hardy-Weinberg平衡;第1内含子中检测到DD、DE和EE 3种基因型个体,共D、E两个等位基因,其观测杂合度和期望杂合度分别为0.408和0.477,多态信息含量为0.362,群体在该座位符合Hardy-Weinberg平衡。3'UTR区域中没有发现多态性。上述2个SNP座位与斑马鱼低温耐受性状的关联分析结果表明,5'UTR区3种基因型与低温耐受性状均没有显著相关性(χ2=4.029,P>0.05)。而第1内含子3种基因型与低温耐受性状显著相关(χ2=8.498,P<0.05):DD基因型在耐低温群体中占优势(50.00%),并表现为对受低温胁迫斑马鱼的保护性因素(OR=0.520,95%CI=0.255–1.061),而DE基因型在不耐低温群体中占优势(51.31%),表现为低温胁迫下斑马鱼的危险因素(OR=3.012,95%CI=1.413–6.419)。研究结果为GSTM基因SNPs位点与斑马鱼低温耐受性能关联分析提供了依据,也将为海水经济鱼类抗寒标记筛选育种提供参考。
- 王倩尤锋辛梦娇胡金伟谭训刚
- 关键词：SNPS
- 牙鲆耐寒相关基因CIRP、HMGB1的克隆及表达特征分析被引量：7
- 2015年
- 为鲆鲽鱼耐低温标记辅助育种研究和应用提供候选基因，并了解耐寒相关基因在低温下的表达图示，作者通过同源克隆以及5￠/3￠RACE 的方法扩增得到了牙鲆（Paralichthys olivaceus）CIRP 和HMGB1基因。组织表达谱分析显示，这两个基因在脑、鳃、心脏、肌肉、肝脏、肠等组织均有表达，但HMGB1基因在鳃中表达较弱。低温胁迫后，两基因随着胁迫时间的延长其表达量在肌肉中都出现先上升后下降的趋势：在0~12 h逐渐上升并达到最大值，然后下降恢复至最初水平。但在肝脏和脑组织中的变化趋势却不同，低温胁迫后0~2 h HMGB1基因在脑中的表达量上升至最高，然后下降至最初水平，在肝脏中变化不大。而CIRP基因在低温胁迫后0~2 h在肝脏中表达量处于上升趋势，然后下降至初始水平，在脑中变化不大。由此推测，这两个基因在低温条件下都参与了机体对外界的抵抗，特别是在抵抗外界寒冷的主要组织—肌肉中发挥作用，可能共同参与了机体的免疫反应，对低温胁迫环境下的鱼体进行保护，可以作为鱼类耐低温标记筛选的候选基因。
- 胡金伟尤锋王倩王丽娟翁申达辛梦娇
- 关键词：低温胁迫RT-PCR
- 低温胁迫对鱼类PI3K/AKT/GSK-3β信号通路的影响被引量：9
- 2016年
- 为探讨PI3K/AKT/GSK-3β信号通路在鱼类低温胁迫中的分子机制,利用3种抗寒能力不同的鱼类:斑马鱼(Danio rerio)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)和草鱼(Ctenopharyngodon idellus),对其进行低温胁迫(8℃),监测这3种鱼鱼鳃中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中蛋白表达情况。结果表明:1)在相同低温胁迫下,3种鱼运动能力为:草鱼>斑马鱼>罗非鱼;2)Western blot结果表明:在罗非鱼中,低温抑制了p-PTEN蛋白的表达;诱导了AKT、p-AKT(Ser 473)和p-GSK-3β(Ser 9)蛋白的表达。在斑马鱼和草鱼中,低温都抑制了AKT和p-AKT(Ser473)蛋白的表达;诱导了p-GSK-3β(Ser 9)蛋白的表达。尽管低温一致性诱导p-GSK-3β(Ser 9)在3种鱼中的表达,但其呈现不同的变化倍数:罗非鱼中p-GSK-3β蛋白的上升倍数显著高于其他两种鱼。低温诱导了PI3K/AKT/GSK-3β信号通路,在不同低温耐受能力的鱼中呈现出不同的表达模式,这些物种特异性的表达模式可能会影响鱼类低温下不同的耐受能力。
- 王金凤胡鹏牛虹博陈良标
- 关键词：低温胁迫AKTGSK-3Β信号通路
- 鳞头犬牙南极鱼atp6v0c基因在HeLa细胞中抗寒功能的研究被引量：3
- 2016年
- 为探求南极鱼ATP酶类在低温适应下的作用,从鳞头犬牙南极鱼Dissostichus mawsoni的c DNA文库中克隆atp6v0c基因(dmatp6v0c),并转染到He La细胞中,通过流式细胞仪检测细胞在低温胁迫下(10℃)的死亡率,获得了dmatp6v0c基因的全部编码序列,其长度为462 bp,并将其插入到真核表达载体pc DNA3.1(-)上用于体外表达。结果表明,与对照组相比,在低温胁迫下,过表达dmatp6v0c基因的He La细胞死亡率从(19.23±1.87)%显著降低到(8.13±0.04)%(P<0.05)。研究表明,在低温胁迫下dmatp6v0c基因过表达能显著降低He La细胞的死亡率,试验结果可为dmatp6v0c基因作为鱼类耐寒育种的候选基因提供理论依据。
- 刘明丽王金凤张东陈良标
- 关键词：低温胁迫HELA细胞
