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鸡巨噬细胞HD11不同转染方法的比较分析被引量：1: 2017年; 以鸡巨噬细胞HD11作为研究对象,分别采用5种不同的脂质体试剂转染和电转方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入HD11细胞中,然后通过比较并筛选出适合鸡巨噬细胞HD11的最佳转染方法。结果显示:Lipofectamine 2000 Reagent、Attractene Transfection Reagent和Trans IT-2020 Transfection Reagent几种常见的脂质体转染试剂并不适用于HD11细胞转染。而Coming Transfection Reagent、Lip2000 Transfection Reagent脂质体转染试剂和电转可用于HD11细胞转染;其中,Lip2000 Transfection Reagent转染试剂效果最好。在此基础上,通过进一步优化得出:当DNA(μg)和Lip2000(μL)的比例为1∶1.5时转染效率最高。本研究成功筛选出一种有效的鸡巨噬细胞HD11转染方法,为鸡巨噬细胞的转染及其相关研究提供了实验依据。; 韩笑胡序明袁君婷吕贝孙振陈世豪耿拓宇崔恒宓; 关键词：转染效率电穿孔法脂质体法

反义RNA与肝癌的研究进展被引量：1: 2017年; 反义RNA是一类能与特异性mRNA互补并从翻译、转录或转录后水平上高度特异地抑制靶基因表达的RNA分子。肝癌是全球最常见且致命的恶性肿瘤。肝癌组织的无限增殖、侵袭转移、放化疗耐受等能力成为其无法治愈并不断恶化的重要原因。反义RNA在肝癌肿瘤中异常表达,肿瘤的恶性表型维持需要众多反义RNA的参与。近年来,利用反义RNA技术治疗恶性肿瘤已经成为了一个新的研究方向,本文对这一技术治疗肝癌进行了综述。; 吕贝李华玲崔恒宓; 关键词：肝癌反义RNA

二甲双胍对鸡巨噬细胞HD11天然免疫相关基因表达影响及其抗禽白血病病毒能力分析: 2019年; 本研究旨在探讨二甲双胍(metformin)处理对鸡巨噬细胞HD11天然免疫相关基因表达及禽白血病病毒(Avian leukosisvirus,ALV)复制水平的影响。用2mmol/L二甲双胍处理鸡巨噬细胞HD11,处理48h后收集细胞,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测天然免疫基因和内源性反转录病毒的表达。另外,将J亚群禽白血病病毒(J subgroup Avian leukosis virus,ALV-J)(MOI=5)接种于细胞板中,病毒感染细胞24 h后进行二甲双胍处理, 48 h后收集HD11细胞和上清分别进行RT-qPCR检测和ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)检测。结果表明,二甲双胍显著上调HD11细胞天然免疫相关基因TLR3(P<0.01)、IFIH1(P<0.01)、IRF7(P<0.01)、STAT1(P<0.05)、IFN-α(P<0.01)、IFN-β(P<0.01)表达水平,并激活了鸡内源性反转录病毒的表达,抑制ALV-J复制水平。综上,二甲双胍可激活鸡巨噬细胞的天然免疫反应,从而提高鸡抗禽白血病病毒的能力。本研究在体外实验中验证二甲双胍具有抑制ALV增殖的作用,对家禽业的疾病防控有一定的应用价值。; 豆春峰王芳王芳欧阳娟胡序明贾崇信薛松磊陈世豪齐田羽耿拓宇薛松磊; 关键词：二甲双胍天然免疫巨噬细胞

禽内源性反转录病毒ALVE1在鸡基因组上下游序列鉴定被引量：1: 2017年; 已知鸡基因组中含有禽内源性反转录病毒ALVE1序列,而ALVE1在鸡基因组中的上游和下游区域位置在参考基因组中并未成功鉴定。本研究成功鉴定出ALVE1所在鸡基因组中的上、下游序列,并通过提取CEF细胞和DF-1细胞基因组反过来验证了ALVE1的位置信息。与参考基因组不同的是,我们发现ALVE1序列包含3'LTR序列,在鸡1号染色体上的插入位置为chr1:65,995,534~65,993,540。本研究不仅提供了ALVE1在鸡基因组中的完整信息,也为进一步研究ALVE1的功能奠定了基础。; 戴振清胡序明胡序明王芳王芳豆春峰陈世豪崔恒宓

内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA的功能: 2016年; 长非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是一类转录本长度超过200 nt、不编码蛋白质的RNA分子,以RNA的形式参与多层次调控,包括表观遗传学调控、转录调控以及转录后调控等。大量研究结果表明,许多长非编码RNA分子衍生于数百万年前＂入侵＂人类基因组的内源性反转录病毒（endogenous retrovirus,ERV）序列。内源性反转录病毒是基因组重要成分,约占基因组的5%~8%,多以＂前病毒＂形式存在,功能很大程度上未知。就内源性反转录病毒衍生的lncRNA在天然免疫、抗病毒和肿瘤等方面的最新研究进展进行综述。; 胡序明崔恒宓; 关键词：天然免疫表观遗传

利用CRISPR/Cas9技术敲除RNA甲基化酶TRDMT1基因及其功能初探被引量：1: 2018年; 为构建TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系,利用CRISPR/Cas9系统在TRDMT1基因第1个外显子前插入BGH Ploy(A)转录终止序列,终止TRDMT1基因表达。利用重叠PCR方法合成sgRNA序列,构建TRDMT1-gRNA载体及含不同抗生素基因的同源重组载体TRDMT1-LOXN-Puro和TRDMT1-LOXP-Neo;将同源重组载体TRDMT1-LOXN-Puro、TRDMT1-LOXP-Neo及TRDMT1-gRNA、Cas9表达载体MLM3613共转染HEK293细胞;利用Puromycin和Neomycin抗生素筛选细胞,通过RT-qPCR检测TRDMT1基因转录终止效率。通过细胞生长曲线和划痕试验检测TRDMT1基因敲除对HEK293细胞增殖和迁移能力的影响。结果表明:成功构建了TRDMT1-gRNA载体及TRDMT1-LOXN-Puro、TRDMT1-LOXP-Neo同源重组载体;与正常HEK293细胞相比,试验组TRDMT1表达量仅为1%;TRDMT1基因敲除后显著影响HEK293细胞增殖和迁移。这一研究通过CRISPR/Cas9技术成功构建了TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系(HEK293-TKO),为RNA甲基化研究提供了一种有效的工具;TRDMT1基因可能与细胞的增殖和迁移有关。; 徐慧孙振薛松磊豆春峰胡序明崔恒宓

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国家自然科学基金(81372237)