国家自然科学基金(30700756)
- 作品数：6 被引量：17H指数：2
- 相关作者：于飞陈卫民许庆安刘薇谭忠荣更多>>
- 相关机构：华中科技大学武汉大学附属口腔医院华中农业大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因的克隆及表达纯化被引量：1
- 2009年
- 目的克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因并使其在大肠杆菌中正确表达。方法利用PCR方法克隆牙龈卟啉单胞菌fimA基因,构建其原核表达质粒pT-BAD/fimA,获得其在大肠杆菌中的表达,基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定重组蛋白。以不同质量浓度咪唑缓冲液(250、200、150、100、50μmol·L-1)洗脱结合在His-tag纯化柱的目的蛋白,选择最佳洗脱质量浓度。结果克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列呈现99.9%同源性;诱导表达后可观察到相对分子量3.8×104的融合蛋白,经MALDI-TOF-MS检测进一步证实为FimA蛋白。100μmol·L-1咪唑缓冲液洗脱得到的蛋白质纯度最高,其纯度为95%。结论本实验成功克隆了fimA基因,并获得在大肠杆菌中的正确表达,同时得到纯度较高的FimA蛋白,为后续研制增强免疫应答的高效牙周炎真核表达质粒奠定了基础。
- 刘薇于飞陈卫民何伟
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌蛋白表达
- 靶向牙周炎DNA疫苗免疫原性及免疫效能的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的:检测树突状细胞靶向牙周炎DNA疫苗pCTLA4-FimA的免疫反应性,并评价其免疫保护能力。方法:BALB/c小鼠随机分为3组:pCTLA4-FimA鼻黏膜免疫组,非靶向牙周炎DNA疫苗pFimA鼻黏膜免疫组,pCI载体鼻黏膜免疫组。酶联免疫吸附实验检测血清及唾液中特异性抗FimA抗体水平。小鼠鼻黏膜途径免疫pCTLA4-Fi-mA、pFImA或pCI质粒,口腔接种Porphyromonas gingivalis,建立小鼠牙周炎模型,检测牙槽骨水平吸收程度。结果:与pFimA免疫组相比,pCTLA4-FimA免疫组诱导了显著增强的血清特异性IgG抗体和唾液特异性IgA抗体水平(P<0.01)。与免疫前相比,三组小鼠牙槽骨均有吸收,其中pCTLA4-FimA免疫组牙槽骨水平吸收程度最低。结论:靶向牙周炎DNA疫苗pCTLA4-FimA能有效诱导机体产生特异性抗体免疫反应,并抑制牙周炎的发展,效果优于非靶向牙周炎DNA疫苗pFimA。
- 于飞朱光勋陈卫民
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌疫苗DNA
- 靶向牙周炎DNA疫苗的构建及体外表达研究被引量：4
- 2010年
- 目的:构建以人细胞毒性T淋巴细胞抗原4(Cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4,CTLA4)为引导的抗牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA的靶向牙周炎DNA疫苗,并检测其在体外真核细胞中的表达。方法:采用基因重组技术构建携带CTLA4-Ig基因和牙龈卟啉单胞菌fimA基因的重组质粒pCTLA4-FimA,转染COS7细胞,蛋白免疫印记和间接免疫荧光法检测重组质粒的蛋白表达。结果:重组质粒pCTLA4-FimA携带CTLA4-Ig和fimA基因片断。pCTLA4-FimA表达的抗原可与特异性抗FimA抗体发生免疫反应。pCTLA4-FimA转染的COS7细胞中可检测到目的蛋白的表达。结论:成功构建了靶向牙周炎DNA疫苗pCTLA4-FimA,并可在真核细胞中正确表达。
- 于飞许庆安陈卫民
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌
- 靶向牙周炎DNA疫苗免疫原性及免疫效能的实验研究
- 2010年
- 目的:检测靶向牙周炎DNA疫苗pCTLA4-FimA的免疫反应性,并评价其免疫保护能力。方法:分3组免疫BALB/c小鼠:pCTLA4-FimA鼻黏膜免疫组,非靶向牙周炎DNA疫苗pFimA鼻黏膜免疫组,pCI载体鼻黏膜免疫组。酶联免疫吸附实验检测血清及唾液中特异性抗体水平。建立小鼠牙周炎模型,检测牙槽骨水平吸收程度。结果:与pFimA免疫组相比,pCTLA4-FimA免疫组诱导了显著增强的血清特异性IgG抗体和唾液特异性IgA抗体水平(P<0.01)。与免疫前相比,3实验组牙槽骨均有吸收,其中pCTLA4-FimA免疫组牙槽骨水平吸收程度最低。结论:靶向牙周炎DNA疫苗pCTLA4-FimA能有效诱导机体的免疫反应,并抑制牙周炎的发展,效果优于非靶向牙周炎DNA疫苗pFimA。
- 于飞许庆安陈卫民
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌
- 糖尿病与牙周炎基础治疗的相互关系被引量：10
- 2016年
- 目的探讨糖尿病与牙周炎基础治疗之间的相互关系。方法选取80例糖尿病合并牙周炎患者为研究对象,随机分为两组,对照组仅给予血糖控制治疗,观察组在对照组的基础上给予牙周基础治疗,两组均观察3个月。比较两组3个月后的牙周状态,肿瘤坏死因子(TNF)-α、血糖和血脂水平的变化。结果两组在治疗前牙龈出血指数(BI)、牙周袋深度(PD)、菌斑指数(PLI),龈沟液和血清中的TNF-α,空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)组间差异均无统计学意义(P<0.05)。观察组治疗1个月、3个月后的BI、PD、PLI、龈沟液TNF-α、FPG、Hb A1c、TC均低于治疗前(P<0.05),同时以上指标均优于同期对照组(P<0.05)。对照组以上指标治疗前后均无明显变化(P>0.05)。结论牙周基础治疗对糖尿病的治疗有正性影响,不仅改变了患者的牙周状态而且可调节糖尿病的基础代谢。
- 谭忠荣于飞张春辉
- 关键词：糖尿病牙周基础治疗血糖血脂炎症
- 牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因在大肠杆菌的融合表达被引量：1
- 2009年
- 目的:克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白fimA基因,并使其在大肠杆菌中融合表达。方法:利用PCR方法克隆fimA,并用基因重组融合表达技术获得在大肠杆菌中的表达。结果:克隆基因测序结果与GenBank数据库中的序列呈现99.9%同源性;经诱导表达后可观察到Mr 38kDa的融合蛋白。结论:成功克隆了fimA基因,并在大肠杆菌中表达了FimA蛋白,为后续研究奠定了基础。
- 刘薇于飞陈卫民
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌大肠杆菌
