湖南省卫生厅重点课题(A03-006)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
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- 肺炎衣原体ompA基因VD2-VD3区重组蛋白在血清学诊断中的初步应用被引量：8
- 2007年
- 应用聚合酶联反应(PCR)技术,从肺炎衣原体Chlamydia pneumoniae的主要外膜蛋白(Major Outer Membrane Protein,MOMP)编码基因(ompA)上扩增出抗原优势表位VD2-VD3区基因,构建原核表达系统并诱导表达重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化表达产物。间接酶联免疫吸附试验(Enzyme link immunosorbent assay,ELISA)检测人血清中特异性IgG抗体。试验表明,转化入BL21大肠杆菌的重组质粒,能表达并纯化出相对分子质量(Mr)为24KD的重组蛋白。Western blot证实重组蛋白只与Cpn MOMP mAb发生特异性反应;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测Cpn阴阳性参比血清,特异性和灵敏度均为100%;对126位冠心病患者血清进行的检测中,该间接ELISA法与晶美公司Cpn IgG ELISA诊断试剂盒的检测结果相比,符合率达到96.3%。结果证实,制备的重组蛋白MOMPVD2-VD3具有良好的免疫活性,在Cpn血清学诊断的应用中具有较大的利用价值。
- 周洲吴移谋刘劼陈超群杨玲
- 关键词：肺炎衣原体主要外膜蛋白血清学试验酶联免疫吸附试验
- 肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白基因片段在大肠杆菌中的表达与鉴定
- 2008年
- 表达肺炎嗜衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)主要外膜蛋白(MOMP)的可变区VD2-VD3区,纯化产物并进行免疫活性分析,为探索重组蛋白在肺炎嗜衣原体血清学诊断中的应用提供资料.应用聚合酶联反应(PCR)技术,从肺炎嗜衣原体标准株AR-39的MOMP上扩增出抗原优势表位VD2-VD3区,将目的片段定向插入pET-30a载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并以Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物并行western-blot鉴定.成功构建了pET-30a-MOMPVD2-VD3的原核表达系统,表达并纯化出相对分子质量(Mr)为24×103Da的重组蛋白.Western-blot证实重组蛋白能与Cpn MOMP多克隆抗体发生特异性反应.肺炎嗜衣原体的MOMPVD2-VD3基因可以在大肠杆菌中得到表达,其表达产物能与相应的抗体结合,为肺炎嗜衣原体诊断候选抗原的研究奠定了基础.图4,参9.
- 周洲游晓星胡旃陈洪亮
- 关键词：肺炎嗜衣原体基因表达
