国家自然科学基金(30700716)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：戴迎春张绪富胡贵方向文龙宋灿磊更多>>
- 相关机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 江门株诺如病毒重组鉴定及分析被引量：6
- 2010年
- 目的:对诺如病毒(norovirus,NoV)NoV/Jiangmen056/2006/china和NoV/Jiangmen380/2006/china株进行重组鉴定分析。方法:用JV12Y/JV13I、COG2F/GⅡSKR、JV12Y/GⅡSKR三对引物对NoV基因组不同区域分别进行RT-PCR,PCR产物纯化回收、测序,利用ClustalX、MEGA4.1、SimPlot3.5.1软件分析其基因序列。结果:NoV/Jiangmen056/2006/china株由Lordsdal株的RdRp区和Mexico株的capsid区重组而成,而NoV/Jiangmen380/2006/china株由NLV/VannesL169/2000株的RdRp区和SaKaeo-53株的capsid区重组而成。结论:NoV/Jiangmen056/2006/china和NoV/Jiangmen380/2006/china是两种不同型别NoV重组株,而后者是国内首次检出的新型GⅡ.bNoV重组株,上述结果丰富了我国重组NoV的研究资料。
- 宋灿磊戴迎春胡贵方向文龙聂军
- 关键词：诺罗病毒衣壳开放阅读框架
- GⅡ.4型诺如病毒GZ121株P蛋白的表达及其结合HBGA受体特征被引量：1
- 2013年
- 目的建立我国流行优势株GⅡ-4型诺如病毒（GZ121）P蛋白（包括P颗粒和P二聚体）的原核表达系统，并明确其结合HBGAs受体的能力和方式。方法从GⅡ．4型诺如病毒GZ121株基因组中克隆P区域基因片段，通过构建P区域氨基酸序列进化树，确定其基因簇。构建含铰链Hinge-P和不含铰链P-CDCRGDCFC的pGEX-4T-1原核表达质粒，将构建的原核表达载体导入大肠杆菌（Ecoli）BL21，用0．6mmol／LIPTG（isoProPyhhio-β-D-galaetoside）过夜诱导P颗粒（不含铰链）和P二聚体（含铰链）在B1221中表达。目的重组蛋白经溶血酶酶切和FPLC鉴定分析，用EIA法检测P颗粒和P二聚体与HBGAs的结合特征。结果GZl21株诺如病毒为GⅡ．4基因型2004簇（GⅡ．4／2004cluster）。SDS．PAGE分析确定P颗粒和P二聚体相对分子质量（Mr）约为36×10^3，大小与报道相符。重组P颗粒经FPLC证实，其在M，约为830×10^3处形成特异的P颗粒波峰，Westernblot技术证实了重组P蛋白的特异性。EIA分析结果表明，GZ121株P蛋白与A、B、O型唾液均能结合，与非分泌型唾液不结合，而P颗粒结合HBGAs受体能力是P二聚体的80～100倍，与96簇VA387P颗粒相比，其结合O型能力增强，而结合A型能力稍弱。结论我国优势流行株GII．4型诺如病毒P蛋白的表达成功及其与HBGAs受体结合模型的建立，为今后研究我国诺如病毒的流行进化规律及疫苗的开发研究奠定了实验基础。
- 张绪富吴娴波戴迎春
- 关键词：诺如病毒原核表达系统
- 诺如病毒病毒样颗粒的表达及其与HBGAs受体的结合研究被引量：5
- 2011年
- 目的:以杆状病毒为载体,在昆虫细胞sf9中表达GⅡ-4型野生株诺如病毒(Noroviruses,NoV)GZ121的衣壳蛋白ORF2,并验证其与组织血型抗原(Histoblood group antigen,HBGAs)受体的结合活性。方法:双酶切质粒PMD18-T-GZ121 ORF2酶切,连接入线性化载体PFastBacTM1,获得重组转座载体pFastBac-GZ121 ORF2,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得重组杆状病毒,将其转染昆虫sf9细胞进行蛋白表达,用蔗糖超离方法纯化以及免疫印迹、透射电镜等方法鉴定表达产物,用EIA法检测NoV-VLP与HBGAs的结合特性。结果:成功表达了分子量约为58 kD的NoV衣壳蛋白,大小约30 nm与预期相符,NoV-VLP与A、B、O型均能结合,与非分泌型唾液不结合,结合方式与rVA387相一致。结论:我国优势流行株GⅡ4型NoV病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP)的表达成功及NoV-VLP和HBGAs受体结合模型的建立,为我国NoV疫苗的开发和防治药物的研究奠定了基础。
- 张绪富戴迎春宋灿磊周迎春
- 关键词：诺如病毒杆状病毒表达系统病毒样颗粒
