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人免疫重建NOD/SCID小鼠模型的建立被引量：1: 2011年; 目的探讨NOD/SCID(nonobese diabetic/severe combined immunodeficien)t小鼠人免疫重建模型的建立方法和免疫特性.方法 16只NOD/SCID小鼠随机分成实验组和对照组,每组8只.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),通过腹腔注射移植给实验组小鼠,空白对照组小鼠每只腹腔注射无菌PBS,第4、8和12周时,流式细胞术检测小鼠外周血中人的CD3+T、CD19+B淋巴细胞,ELISA法测定小鼠血清中人IgG含量,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏和肝脏中人CD3+T、CD19+B淋巴细胞浸润情况.结果移植PBMC 4周后,实验组NOD/SCID小鼠外周血中人CD3+T、CD19+B的细胞分别为85.6%、76.7%,并且在小鼠脾脏组织中也可以检测到人CD3 T、CD19 B淋巴细胞.移植4、8及12周后小鼠血清中人IgG含量分别达到(863±12.5)μg/mL、(1217±16.7)μg/mL、(958±13.1)μg/mL.结论用人外周血PBMC经腹腔注射可以成功建立人免疫重建NOD/SCID小鼠模型,方法简便可靠.; 颜汝平李翀周海滨王剑松袁国红赵献; 关键词：NOD/SCID小鼠动物模型人外周血单核细胞

肿瘤相关抗原在不同病理分级膀胱尿路上皮癌中的表达: 2011年; 目的利用免疫组化法检测组织芯片中不同病理分级人膀胱尿路上皮癌组织中肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen,TAA)的表达。方法含不同病理分级的人膀胱尿路上皮癌组织芯片两张,免疫组化(Elivision)法检测膀胱尿路上皮癌组织中TAA的表达,并对不同病理分级膀胱尿路上皮癌组织中TAA表达程度、阳性表达率进行比较。结果膀胱尿路上皮癌TAA的阳性染色主要位于细胞膜,116块人膀胱尿路上皮癌组织中TAA的总阳性表达率为56.9%(66/116)。不同病理分级的膀胱尿路上皮癌组织中TAA的表达程度比较,差异无统计学意义(P>0.05);TAA的阳性表达率分别是:G1 50.0%(7/14)、G2 53.6%(22/41),G3 60.7%(37/61),不同病理分级TAA阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论膀胱尿路上皮癌组织中TAA的表达程度及阳性表达率与肿瘤的病理分级无关,组织芯片技术检测膀胱癌TAA的表达高效、快捷。; 颜汝平王剑松李翀左毅刚柯昌兴詹辉王伟; 关键词：膀胱癌组织芯片免疫组织化学

负载肿瘤抗原的DC疫苗体外诱导的特异性抗膀胱癌效应研究被引量：3: 2012年; 目的探讨负载膀胱癌抗原成分树突状细胞(dendritic cells,DC)疫苗的制备和体外诱导T淋巴细胞特异性杀伤膀胱癌细胞的作用。方法冻融法制备EJ细胞裂解物抗原成分,体外培养的人外周血单个核细胞(hu-PBMC)在rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α诱导下分化出DC,负载EJ细胞裂解物抗原后制备膀胱癌DC疫苗;免疫磁珠分离法从人免疫重建Balb/c裸小鼠脾脏组织中分离CD3+T淋巴细胞,3H-TdR掺入试验测定DC疫苗刺激自体T淋巴细胞增殖的能力,51Cr释放试验检测DC疫苗诱导的T细胞对EJ细胞的杀伤作用。结果 Hu-PBMC在细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α的刺激下分化为成熟DC,负载EJ抗原的DC疫苗体外可使同源T淋巴细胞活化,增殖指数增加,活化的T淋巴细胞对EJ细胞的杀伤率为(62.58±6.13)%,和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论负载膀胱癌冻融抗原的DC疫苗体外可诱导人T淋巴细胞活化增殖,对EJ细胞有明显的杀伤作用。; 颜汝平王剑松李翀周海滨赵献; 关键词：癌症疫苗树突细胞

人外周血树突状细胞体外诱导培养及表型鉴定被引量：3: 2010年; 目的从健康人外周血中分离单个核细胞(peripheral blood mononuclearcell,PBMC),经体外诱导培养获取成熟树突状细胞(dendritic cell,DC).方法取健康人新鲜外周血,经密度梯度离心法分离,获得单个核细胞,在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养.置37℃、5%CO2培养箱内静置培养2 h后除去悬浮细胞.培养液中加入rhGM-CSF和rhIL-4继续培养贴壁细胞5 d,然后加入TNF-α促进其分化成熟.倒置显微镜下观察DC形态,流式细胞仪(flowcytometer,FCM)对其进行表型鉴定.结果显微镜下观察DC细胞形态不规则,表面有大量的毛刺状突起;成熟DC细胞表面CD83、CD80分子表达明显增高.结论用rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合培养可以从健康人外周血诱导培养出成熟的树突状细胞.; 颜汝平周海滨李翀王剑松王伟赵献; 关键词：树突状细胞人外周血细胞培养

DC疫苗对人免疫重建荷人膀胱癌NOD／SCID小鼠的抑瘤作用被引量：1: 2011年; 目的探讨DC疫苗对人免疫重建荷人膀胱癌NOD／SCID小鼠的抑瘤作用。方法从健康人外周血中分离单个核细胞（peripheral blood mononuclearcell，PBMC），经体外诱导培养获取树突状细胞（dendritic cell，Dc），并负载人膀胱癌EJ细胞裂解物中提取的肿瘤抗原制备DC疫苗。20只NOD／SCID小鼠腹腔注射人PBMC、皮下接种EJ细胞建立人免疫重建荷人膀胱癌动物模型，随机分为实验组（DC—EJ组）和对照组（DC组）；DC—EJ组腹腔注射DC疫苗，DC组腹腔注射DC，观察肿瘤生长和小鼠存活情况，检测荷瘤小鼠血清中人IFN-γ的含量，移植瘤组织中人T细胞、Dc的浸润情况。结果Dc—EJ组小鼠移植瘤生长缓慢，小鼠生存时间延长。实验组小鼠血清中人IFN-γ分泌显著高于对照组（P〈0．05），肿瘤组织中均见CD3、CD4、CD8T细胞和成熟DC浸润。结论负载人膀胱肿瘤抗原的DC疫苗能有效抑制人免疫重建NOD／SCID小鼠体内移植瘤的生长，为膀胱癌的免疫治疗提供了实验依据。; 颜汝平李翀周海滨王剑松王伟赵献石永福; 关键词：膀胱癌免疫疗法 NOD/SCID小鼠

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云南省自然科学基金(2009CD168)