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狐貉源犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆及序列分析: 2004-2006年从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV F基因序列设计了1...; 张莉华育平曾祥伟刘澜澜; 文献传递

水貂阿留申病发病机理的研究进展被引量：4: 2005年; 水貂阿留申病是由阿留申病病毒引起的一种可对水貂养殖业造成严重损失的传染病。该病困扰动物医学界多年 ,始终未得到攻克。近年来随着分子生物学技术的发展 ,国内外学者对该病分子水平的发病机理有了更多的认识 ,研究内容主要集中在与水貂阿留申病发病密切相关的抗病毒抗体、病毒核酸的晚启动子P3 6及其顺式作用元件(cis acting)、结构蛋白VP2等方面。文章对以上研究进展进行了详细的归纳总结与分析 ,并在此基础上提出了尝试使用反义RNA或干扰RNA对该病进行预防、治疗的设想 ,以期今后对阿留申病的继续深入研究能有所帮助。; 马建华育平; 关键词：水貂阿留申病发病机理结构蛋白VP2

阿留申病毒大连株非结构蛋白基因的克隆与序列分析被引量：6: 2007年; 根据Genbank上发表的水貂阿留申病毒基因序列数据，设计了3对引物，采用PCR的方法分别对ADV—DL1、ADV—DL2株非结构蛋白基因进行扩增，将各片断克隆至pMD18-T载体，经PCR鉴定后进行了序列测定和分析。结果显示，ADV—DL1、ADV—DL2与GenBank上公布的ADV毒株相比，核苷酸序列同源率NS1为85．9％-90．0％．Ns2为85．1％-92．7％．NS3为83．0％～95．1％。ADV—DL1与ADV—DL2同源率NS1为93．7％，NS2为95．6％，NS3为98．5％。氨基酸同源率NS1为82．8％-85．8％，NS2为80．7％～92．1％，Ns3为72．9％～95．4％。ADV—DL1与ADV—DL2同源率NS1为90．3％，NS2为92．1％，NS3为95．4％。; 李杨曾祥伟马建华育平; 关键词：阿留申病毒非结构蛋白克隆

犬瘟热病毒H基因原核表达载体的构建被引量：1: 2008年; 利用本实验以前构建的含有犬瘟热病毒H基因的pMD18-T质粒,根据pMD18-T-H序列设计带有XbalI和HindIII酶切位点的引物,对H基因进行PCR扩增,得到约1800bp左右的片段。该片段被克隆到pMD18-Tsimple载体上,用XbalI和HindIII进行单、双酶切鉴定,筛选阳性克隆。将阳性克隆再用XbalI和HindIII进行双酶切,纯化回收CDVH基因片段。将原核表达载体pPROEXTMHTa、pet-30b用同样的方法酶切,回收载体片段。将CDVH基因片段分别用T4连接酶连接到回收的pPROEXTMHTa、pet-30b载体上,构建原核表达载体质粒pPROEXTMHTa-H和pet-30b-H。再用XbalI和HindIII进行单、双酶切鉴定阳性载体。本实验为下一步H蛋白表达、纯化并作为CDV诊断用抗原及CD的免疫预防奠定了基础。; 王亚君华育平; 关键词：犬瘟热病毒 H基因

水貂阿留申病毒VP2蛋白主要抗原表位基因原核表达及其检测应用被引量：13: 2007年; 将构建好的重组质粒pMD-VP2a、pMD-VP2b分别经双酶切获得基因片段VP2a、VP2b,分别将其定向插入到原核表达载体pMAL-c2中,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,经IPTG诱导,两段基因均获得表达;Westernblot分析表明表达蛋白具有良好的抗原性。用KCI染色后,切胶回收的方法对表达蛋白进行纯化,以纯化的目的蛋白作为诊断抗原初步建立了水貂阿留申的VP2-CIEP诊断方法。结果表明该方法具有较高的灵敏性和特异性,与传统的CIEP方法的检出符合率达94.3%。; 曾祥伟华育平梁冬莹; 关键词：水貂阿留申病毒原核表达

狐貉源犬瘟热病毒融合蛋白基因的同源性分析被引量：3: 2008年; 2004—2006年,从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV F基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR方法分别对6个分离株F基因进行克隆、测序,并推导其氨基酸序列,绘制出F基因的遗传进化树。结果表明:6个CDV分离株F基因的开放阅读框架(ORF)均为1 989 bp,编码663个氨基酸,蛋白结构中的13个Cys残基位点和4个潜在的糖基化位点均高度保守,其裂解位点的氨基酸序列为220R-R-Q-R-224R。遗传进化分析表明:6个分离株与CDV代表强毒株A75/17属于同一谱系,均为强毒株。其中,HL01株与海豹瘟热病毒2型(PDV-2)亲缘关系较近,与其它5个分离株关系相对较远。; 张莉华育平曾祥伟刘澜澜; 关键词：犬瘟热病毒 F基因基因克隆同源性分析

狐貉源犬瘟热病毒核蛋白基因的克隆及序列比较分析被引量：2: 2007年; 参照已发表的犬瘟热病毒(CDV)核蛋白基因(N)序列设计合成了1对引物,用RT-PCR方法对从发病狐、貉中分离的MS01、SC01、ZD01三株CDV的N基因进行扩增,并分别将其PCR产物进行克隆和测序。测序结果表明:3病毒分离株N基因阅读框架全长均为1572bp,编码523个氨基酸。利用DNAstar的MegAlign生物软件,将3病毒分离株与Genbank数据库中现有的CDV毒株的N基因序列及推导出的氨基酸序列进行了同源性比较和系统进化树分析,结果发现:3病毒分离株与强毒参考株A75/17等野毒株高度同源,核苷酸同源为96.2%～99.1%,氨基酸同源为96.0%～99.8%,而与疫苗株Onderstepoor相对较远,核苷酸同源为93.6%～94.0%。N基因的系统进化关系分析显示:3病毒分离株均归为强毒株,并且与中国新疆的TN株、中国台湾的Kaohsiung株基因型最近,表现出一定的地理位置相关性。; 刘澜澜华育平曾祥伟张莉; 关键词：犬瘟热病毒核蛋白基因

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