国家重点基础研究发展计划(G1998051008)
- 作品数：13 被引量：94H指数：6
- 相关作者：李桂源张必成李小玲张小慧王洁如更多>>
- 相关机构：中南大学上海第二医科大学附属瑞金医院中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用EST策略鉴定人类新基因UBAP1的数字化差异表达图谱被引量：13
- 2002年
- 背景与目的:UBAP1(ubiquitinassociatedprotein1)基因是我们先前在人类染色体9p21-22鼻咽癌杂合性丢失(lossofheterozygosity,LOH)高频区所获得的一个鼻咽癌相关新基因。进一步地,我们应用EST策略鉴定UBAP1基因在多种肿瘤组织中的差异表达谱。方法:采用基于生物信息学的电子杂交方法,即以UBAP1基因的全长cDNA为“探针”,利用计算机对人类表达序列标签(expressedsequencetag,EST)和Unigene等数据库中代表UBAP1的EST在各类肿瘤及相应正常组织cDNA文库中的分布进行综合分析,研究UBAP1基因的数字化差异表达图谱。同时采用差异RT-PCR方法对UBAP1在3种肿瘤活检组织中的差异表达进行验证。结果:电子杂交结果表明UBAP1基因不仅在42种人类正常组织中广泛表达,而且在11种肿瘤组织中存在可能的表达差异,尤其是在脑瘤、乳腺癌、结肠癌、皮肤癌、睾丸癌和宫颈癌等肿瘤组织中表达显著下调(P<0.05),而在肾癌、胰腺癌中高表达(P<0.05)。进一步采用差异RT-PCR方法发现UBAP1基因在64%的脑膜瘤和72%的结直肠癌活检组织中具有明显表达缺失/下调。结论:UBAP1基因有可能与多种肿瘤的发生发展密切相关,有必要深入研究UBAP1基因的表达异常参与肿瘤发生发展的分子机制。
- 钱骏张晓梅李小玲王洁如李伟芳王蓉李桂源
- 关键词：表达序列标签基因表达数字化鼻咽癌
- 鼻咽癌细胞中表达上调的新基因NAG23(FBXO30)的克隆与分析被引量：9
- 2001年
- 目的:分离位于6号染色体长臂鼻咽癌高频等位基因不平衡位点D6S1581(6q25.3-27)附近与鼻咽癌相关的新基因。方法:运用差异RT-PCR检测定位于D6S1581附近的11个表达序列标签(expressedsequencetags,EST)在正常人鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞系中的表达水平,并对其中一个表达上调的EST在鼻咽癌组织和正常鼻咽组织中的表达情况进行分析。用Northern杂交验证其表达差异并检测其在多脏器中的表达及其所代表基因的转录本大小。利用生物信息学资源克隆并获得其全长cDNA,对该序列进行初步分析。结果:获得了一个位于6q25.3-27的在鼻咽癌中表达上调的新基因,命名为NAG23(FBXO30)(GenBank收录编号:AF248640)。该基因在68.9%的鼻咽癌活检组织中表达上调,cDNA全长3301bp,预测其开放阅读框编码一个含390个氨基酸的胞浆蛋白,该蛋白含一个F-box基序。结论:NAG23基因是一个在鼻咽癌中表达上调的新基因,很可能编码一新的F-box蛋白。NAG23可能参与了鼻咽癌的发生发展。
- 李忠花曹利向娟娟张必成向秋唐珂周鸣李小玲李伟芳李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤基因克隆F-BOX蛋白
- 人鼻咽组织特异性表达基因NASG编码产物在细胞中的融合表达被引量：3
- 2003年
- 采用PCR技术从人鼻咽上皮组织cDNA文库扩增出人鼻咽组织特异性表达基因NASG基因的编码序列,用XhoI和SalI酶切NASG基因编码序列的PCR产物及pEGFP C2载体,产生匹配的粘末端.将回收的pEGFP C2载体分别与NASG基因编码区酶切片段连接,构建了其编码产物的融合蛋白表达载体pEGFP C2 NASG,通过脂质体介导分别转染非洲绿猴肾永生化细胞系COS7和鼻咽癌细胞系HNE1,瞬时表达后荧光显微镜观察NASG编码蛋白的活细胞定位,结果表明,NASG编码蛋白在COS7细胞和HNE1细胞的胞浆和胞核中均有表达.
- 张必成吕红斌周后德肖炳燚周鸣王洁如李小玲李桂源
- 关键词：鼻咽上皮绿色荧光蛋白
- 一个有假基因特点的鼻咽癌相关基因的分离和克隆(英文)被引量：4
- 2002年
- 用定位候选克隆法克隆了一个与鼻咽癌相关的基因 ,命名为NAG73基因 .结构分析显示NAG73的基因序列无内含子 ,无典型的启动子序列 ,polyA尾 .与人类生长激素促分泌因子基因的第 4个外显子和 3′端非翻译区同源 .说明NAG73可能是人类生长激素促分泌因子基因的假基因 .同时 ,实验证明NAG73在一些细胞和组织中活跃表达 .在正常鼻咽上皮细胞 ,鼻咽癌上皮细胞和鼻咽癌活检组织 ,NAG73有表达差异 .序列分析显示NAG73有编码翻译产物的可能 .NAG73可能可编码产物 .该产物在鼻咽癌的发病发展中发挥作用 .
- 向娟娟余鹰王洁如朱诗国张必成李忠花李桂源
- 关键词：假基因鼻咽癌相关基因基因克隆染色体3P
- BRD7交互作用蛋白基因BRD2、BRD3在鼻咽癌组织中的表达被引量：5
- 2003年
- 背景与目的:BRD7基因是通过cDNA代表性差异分析获得的一个鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)密切相关基因。采用酵母双杂交技术,已从人胎脑的cDNA文库中筛选到了两个与BRD7蛋白存在交互作用且包含溴区结构域(bromodomain)的蛋白BRD2、BRD3。本研究的目的在于进一步证实BRD7蛋白与BRD2、BRD3蛋白之间的交互作用,探讨BRD2、BRD3基因在鼻咽癌中的表达和作用模式。方法:将BRD2、BRD3基因分别与BRD7基因共转化酵母Y187后将菌落影印到尼龙膜,X-Gal检测酵母中报告基因LacZ的表达,推断BRD2、BRD3与BRD7蛋白之间的交互作用。RT-PCR方法检测BRD2、BRD3基因在正常鼻咽上皮组织和鼻咽癌活检组织中的差异表达以及在BRD7基因稳定转染的鼻咽癌细胞株(HNE1)中,BRD7基因的重表达对BRD2、BRD3基因表达水平的影响。结果:通过特异性酵母双杂交技术,发现酵母转化子的颜色呈蓝色,进一步证实BRD2、BRD3蛋白能分别与BRD7蛋白发生交互作用。RT-PCR结果显示,在鼻咽癌组织中,BRD2和BRD3基因表达下调或缺失;在BRD7基因稳定转染的HNE1细胞株中,随着BRD7基因表达的增强,BRD2、BRD3基因的表达也存在明显的上调。结论:BRD7蛋白能分别与BRD2、BRD3蛋白发生交互作用,且在mRNA水平存在一定程度的协同表达作用。
- 周鸣彭聪聂新民张必成朱诗国余鹰李小玲李桂源
- 关键词：鼻咽癌酵母双杂交技术发病机制
- NGX6基因转染对鼻咽癌细胞基因表达谱的影响被引量：11
- 2002年
- 鼻咽癌是我国南方的常见肿瘤 .NGX6是新近克隆的定位于 9p2 1 2 2 ,在鼻咽癌组织中表达下调的基因 .初步的研究结果显示 ,NGX6基因转染鼻咽癌细胞HNE1能够延缓其生长速度 ,使肿瘤细胞更多地停留在G0 G1期 .为探索NGX6基因在鼻咽癌发病机制中的作用 ,建立了高表达NGX6的鼻咽癌细胞系 .利用包含 14 0 0 0个基因的cDNA微阵列分析了NGX6基因转染对HNE1细胞基因表达谱的影响 ,发现NGX6基因的转染能够上调p2 9、APC7、NEU1、RNasek6、αE catenin和TFⅡEα等基因的表达 ;同时也下调properdinP因子、G0S2、BAZ2B、ZHX1,OS4和PBX3等基因的表达 .研究结果提示 ,NGX6基因对鼻咽癌细胞的生物学行为的影响可能与它对一些细胞周期调控因子和转录调控因子的影响相关 .作为一种高通量的分析技术 。
- 马健周洁李小玲龚佳蕾何显锋唐珂阳剑波胡赓熙李桂源
- 关键词：NGX6基因转染鼻咽癌细胞基因表达谱CDNA微阵列细胞周期
- NAG14基因结构域蛋白的原核表达被引量：1
- 2002年
- 董利王洁如钱骏张小慧谭琛聂新民李桂源
- 关键词：基因表达融合蛋白
- 比较基因组杂交研究鼻咽癌遗传变异被引量：34
- 2001年
- 目的 了解鼻咽癌遗传学改变的特征。方法 应用比较基因组杂交检测 2 0例鼻咽癌基因组的不平衡即DNA的丢失或扩增。结果 鼻咽癌常见的扩增的染色体是 1q、2、3q、7q、8q、12 ;常见的缺失的染色体为 3p、9p、11q、16 q。结论 鼻咽癌细胞中存在多条染色体拷贝数的改变 ,由此引起相应瘤基因的扩增和抑癌基因的丢失可能参与了鼻咽癌的发生。
- 李忠花王璐张小慧张丽君张必成余鹰曾朝阳周鸣黄薇陈竺陈赛娟李桂源
- 关键词：鼻咽癌比较基因组杂交抑瘤基因瘤基因
- 多聚赖氨酸-硅纳米颗粒的生物相容性研究被引量：11
- 2003年
- 背景与目的:多聚赖氨酸-硅纳米颗粒是一种新型的非病毒纳米颗粒基因传递载体。本研究主要阐述其生物相容性,为其进一步的体内应用提供实验依据。方法:细胞转染和流式细胞仪分析在含血清培养基中多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导质粒DNA和反义寡核苷酸的转染能力,随后通过血浆蛋白反应滤过试验和红细胞聚集试验进一步评价其生物相容性。结果:在含血清培养基中,多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导质粒DNA和反义寡核苷酸传递的能力显著下降。多聚赖氨酸-硅纳米颗粒/DNA(/ODN)复合物可与小鼠血浆蛋白成分结合,并可引起红细胞聚集。结论:多聚赖氨酸-硅纳米颗粒可能与含血清培养基中的血浆蛋白相互作用,影响体外细胞转染效率。多聚赖氨酸-硅纳米颗粒可能与体内外周血血浆蛋白和外周血红细胞反应而影响其体内基因传递能力,其生物相容性还有待于进一步提高。
- 朱诗国甘凯李征沈守荣向娟娟李小玲范松青吕红斌曾朝阳李桂源
- 关键词：多聚赖氨酸生物相容性基因传递反义寡核苷酸非病毒载体
- F-Box蛋白家族新成员FBXO30基因的融合表达被引量：2
- 2001年
- 采用非定向克隆技术将FBXO3 0 (F boxonlyprotein 3 0 )基因编码区cDNA序列克隆到哺乳类融合表达载体pEGFP C2中 ,通过脂质体转染 ,将pEGFP C2 /FBX0 3 0导入NIH 3T3细胞株 ,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。采用定向克隆技术将FBXO3 0基因编码区cDNA序列克隆到表达载体pGEX 4T 2中 ,转化大肠杆菌。结果显示FBXO3 0蛋白主要存在于胞浆中。十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹均检测到一条约 6 5 5kD左右的新增蛋白泳带。此外 ,还用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析柱获得了纯化的该融合表达产物。FBXO3 0蛋白为胞浆蛋白 ,以可溶性的形式存在 ,它能在原核表达体系中稳定表达 。
- 李忠花张小慧李桂源
- 关键词：F-BOX蛋白基因
