国家自然科学基金(30571748)
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
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- 相关机构：第三军医大学大坪医院广州军区广州总医院川北医学院附属医院更多>>
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- 过敏毒素C5a通过Calpain途径致VEC凋亡损伤被引量：3
- 2009年
- 目的探索C5a是否与LPS、毒源性大肠杆菌O157产生的外毒素—V毒素(verotoxin)具有相似的可以导致血管内皮细胞(VEC)凋亡的作用。方法流式细胞仪检测细胞凋亡发生率,首先探讨rhC5a刺激的质量浓度,分别为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL和1.5μg/mL刺激12 h检测VEC凋亡发生率;在rhC5a质量浓度均为1μg/mL条件下,时间分别为2 h、6 h、12 h、18 h和24 h,检测VEC凋亡发生率。Western blot方法检测凋亡相关蛋白。结果在rhC5a质量浓度为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL和1.5μg/mL刺激12 h诱导的凋亡发生率分别为4.58%、7.87%、17.94%和19.03%。在确定rhC5a质量浓度1μg/mL的条件下,VEC发生凋亡呈时间依赖关系,在2 h、6 h、12 h、18 h和24 h的时相,细胞凋亡发生率分别为4.58%、12.78%、18.12%、19.08%和19.96%。rhC5a刺激VEC细胞,calpain-2蛋白表达呈时间依赖性,而calpain-1蛋白的表达为浓度依赖性。结论C5a可以导致VEC细胞发生凋亡,calpain参与了这类细胞的凋亡进程。
- 胡厚祥李保胜刘利陈彩宇吕凤林
- 关键词：内皮细胞凋亡CALPAIN
- 人新型C5a受体C5L2结合域的信息学及其结合力的初步研究被引量：1
- 2007年
- 目的通过生物信息学分析人C5L2受体的配体结构域,并进一步利用生物分子相互作用测定技术(biomo-lecular interaction analysis,BIA)研究其与配体C5a分子间的相互作用。方法以人C5L2蛋白的氨基酸序列为基础,利用网络分析软件以及Goldkey计算机分析软件对人C5L2蛋白二级结构及亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、表位等参数进行综合分析,确定可能与rhC5a结合的区域肽段序列,Fmoc方法固相多肽合成候选的结合位多肽,采用IAsysPlus生物传感器系统,以rhC5a为固定相,分别以这些候选结合位多肽为流动相,测定与rhC5a的结合力。结果合成多肽N2(第12～22位)、C3(第265～275位)可与C5a发生特异性结合,结合率分别为53%和23%。结论人C5L2分子第3～22、179～183、190～195、265～275位等区域满足各项指标,最可能是其配体C5a的结合域。
- 宋蓉李元朝吕凤林吴玉章胡承香陈月
- 关键词：CSA配体结合域生物分子相互作用生物传感器
- C5a对内皮细胞表达血栓调节蛋白的影响被引量：3
- 2009年
- 目的探讨补体C5a对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血栓调节蛋白（TM）表达的影响。方法体外培养HUVECs，以终浓度200μg／L重组人C5a刺激HUVECs8、12、16、20h以及以终浓度100、200、300μg／L的C5a刺激HUVECs 12h，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）、蛋白质免疫印迹法（Western blotting）分别检测TM的mRNA及蛋白表达变化；观察C5a对其表达TM的时－效和量－效关系。结果C5a抑制了HUVECs在TM的mRNA和细胞膜表面蛋白水平表达。同时，C5a对TM表达的抑制作用存在时一效关系[8、12、16、20h时蛋白为（93．11±1．57）×10^-2、（71．05±3．39）×10^-2、（65．48±4．28）×10^-2、（62．69±4．03）×10^-2，mRNA为（301．71±80．40）×10^-6（38．29±20．24）×10^-6、（8．82±2．66）×10^-6、（7．05±0．80）×10^-6]，且均于12h后降低程度明显减缓（P均〈0．05）；并存在量-效关系（C5a100、200、300mg／L时蛋白为（113．25±3．97）×10、（80．18±2．56）×10、（73．22±4．36）X10，mRNA为（401．77±20．46）×10、（31．12±3．51）×10^-6、（18．19±1．46）×10^-6]，TM蛋白在C5a300μg／L、mRNA在C5a200μg／L时刺激12h降低程度明显减缓（P均〈0．05）。结论C5a通过抑制TM的结构基因表达，进而减弱TM的蛋白翻译，从而参与了脓毒症时凝血亢进、炎症损害的病理生理过程。
- 房巍郭振辉张保全吴晓凤李平吕凤林苏磊
- 关键词：C5A内皮细胞血栓调节蛋白
- C5L2不再是孤儿受体——进展与展望被引量：2
- 2007年
- C5a Like Receptor2——C5L2,又称G蛋白偶联受体77(GPR77),是C5aR(CD88)亚家族成员,在氨基酸序列上与C5aR(CD88)有35%的同源性。广泛分布于全身各组织细胞,在粒细胞和未成熟树突状细胞(immature dendritic)及脾脏中有大量的表达。由于长期以来未发现其生理性配体而被称为孤儿受体(orphan receptor)。当前大量研究表明C5L2能与C5a,C3a,C4a,去精C5a(C5a des-Arg74)和去精C3a(C3a des-Arg77)结合,且与C5a des-Arg74结合能力比CD88与C5a des-Arg74高10倍。在结构、功能等方面与CD88也有很多相似之处。与CD88不同的是由于C5L2第三跨膜片断末端的DRY序列上精氨酸被亮氨酸替代,有一个更短的胞内第三环,缺乏丝氨酸/苏氨酸残基,所以不能强有力地与G蛋白偶联,和C5a结合后仅诱导转染细胞发生微弱的磷酸化,不引起细胞内钙的流动及转染细胞脱颗粒;C5L2与配体结合后不发生内化,并具有与配体缓慢的结合与解离的特性。作为过敏毒素受体,C5L2在过敏毒素C5a参与的相关疾病,如脓毒症(sepsis)、急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)等的发生、发展以及对G蛋白偶联受体的研究都具有重要的意义。
- 宋蓉陈月吕凤林
- 关键词：C5A相互作用
- Calpain裂解Atg5决定中性粒细胞发生自噬还是凋亡，以及C5a在其中的可能作用被引量：4
- 2008年
- 通过阐明C5a、calpain和Atg5相互作用,为开展新的研究寻找方向.中性粒细胞凋亡控制炎症反应及其强度,多种疾病和中性粒细胞凋亡失调有关,但其发生机制尚未阐明.C5a为补体片段,有多种功能,如诱导中性粒细胞趋化、呼吸爆发、增强吞噬、颗粒酶释放和延迟凋亡.已知calpain涉及中性粒细胞功能及凋亡调节并对该凋亡发生具有特异性.不同刺激因素可通过不同路径调节不同calpain亚型的活性.已有报道C5a可以通过调节calpain亚型活性而调节中性粒细胞的趋化反应.另外,自噬是真核细胞中广泛存在的生物过程,具有细胞保护作用,Atg5对于自噬体形成必不可少.Calpain可裂解Atg5为24kutAtg5,使其失去形成自噬体的功能并介导凋亡.Atg5参与了自噬和凋亡的转换.
- 张保全郭振辉房巍吕凤林
- 关键词：中性粒细胞凋亡自噬CALPAINC5A
