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海南动物基因资源的保护及其利用被引量：3: 2008年; 动物基因资源是21世纪的一种极其重要的战略资源.基于海南的省情,对我省丰富的动物基因资源进行保护和利用具有重大意义.目前,海南动物基因资源保护的现状非常严峻,海南黄牛、海南坡鹿等具有海南特色的动物品种均面临着基因资源(决定诸多优良性状)可能丢失的窘境.建立基因资源库,既可以保护海南动物基因资源,又可以通过对海南动物的种质资源进行系统收集、整理、评价、开发、利用和创新,为品种种质资源的保存和品种改良提供遗传学资料和良好的原始材料,实现品种保护和品种改良的有机结合,最终达到高效开发和利用海南热带特色动物基因资源,提升我国热带地区优势生物资源竞争力的目的.; 杜丽王凤阳吴科榜林杰才满初

海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库的构建被引量：18: 2008年; 目的:构建海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库。方法:采用RNAiso Reagent(TAKARA)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA。利用SMART(Switching Mechanismat5’end of RNA Transcript)技术,用PowerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,SfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分级分离后,500bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coliDH5α,建成原始文库。然后扩增文库并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小。结果:经鉴定,库容量达到1.9×106克隆,原始文库滴度为1.59×1010cfu/mL,重组率接近100%,扩增后的文库滴度为7.4×1012cfu/mL。插入片段大小分布为0.5～2.0kb,平均长度约为1.0kb。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础。; 申明霞刘涛杜丽王凤阳成鹰许世英吴科榜李治深符运南林贤梅满初日嘎祁超; 关键词：海南坡鹿外周血白细胞 CDNA文库 SMART技术

五指山小型猪APEX1基因cDNA的克隆及生物信息学分析被引量：1: 2009年; [目的]对五指山小型猪脱嘌呤嘧啶核酸内切酶cDNA进行克隆和生物信息学分析。[方法]以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法,克隆得到APEX1基因全长cDNA,并运用生物信息学软件对该基因核苷酸序列及其编码蛋白的理化性质及二级结构等进行分析和预测。[结果]生物信息学分析表明,该cDNA全长1392bp,5′非翻译区长132bp,3′非翻译区长303bp,含有一个957bp的完整开放阅读框,编码318个氨基酸。该蛋白的分子量为35kD,等电点为8.05。比对分析表明,五指山小型猪APEX1基因的核酸序列及其氨基酸序列与人、小鼠、黑猩猩等哺乳动物具有较高的相似性。[结论]成功克隆了五指山小型猪A-PEX1基因cDNA,为进一步研究APEX1在动物体内的作用机制奠定了基础。; 李治深杜丽刘涛申明霞王凤阳成鹰陈品林林杰材满初日嘎祁超; 关键词：五指山小型猪 CDNA文库克隆

海南坡鹿HSF1cDNA的克隆与表达被引量：3: 2009年; 采用RT-PCR和RACE方法扩增海南坡鹿热休克转录调节因子1(Heat shock transcription factor1,HSF1)cDNA全长,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析;构建pET28a-hdHSF1表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,海南坡鹿HSF1cDNA全长为2036bp,含有1个1578bp的开放阅读框,编码525个氨基酸。经生物信息学分析,HSF1是一个等电点为4.93的亲水性蛋白。经IPTG诱导表达后,得到一个带组氨酸标签的约62kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约62kD特异性抗体结合带,表明海南坡鹿HSF1原核表达载体成功构建并表达。; 成鹰杜丽王凤阳刘涛李治深许世英符运南林贤梅吴科榜林杰材满初日嘎; 关键词：海南坡鹿克隆

五指山小型猪PMSA6基因cDNA克隆及生物信息学分析被引量：3: 2009年; 为了对海南五指山小型猪蛋白酶体亚基α型6(proteasome subunit alpha type 6,PMSA6)cDNA基因进行克隆和生物信息学分析,笔者以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法,克隆得到PMSA6全长cDNA,并向GenBank递交了该序列(登录号:FJ358606).同时运用生物信息学软件对该基因核苷酸序列进行了分析,并预测了其编码蛋白的理化性质及二级结构等.生物信息学分析表明:该cDNA全长1029 bp,5′非翻译区长96 bp,3′非翻译区长192 bp,含有一个741 bp完整的开放阅读框,编码246个氨基酸.该蛋白的分子量为37.680 kD,等电点为8.76.进一步比对分析发现,五指山小型猪PMSA6基因的核酸序列及其氨基酸序列与人、牛等哺乳动物具有很高的相似性.本研究成功克隆了海南五指山小型猪PM-SA6基因cDNA,并进行了相关生物信息学分析,为进一步研究PMSA6在动物体内的作用机理奠定了基础.; 刘涛申明霞杜丽程立生王凤阳成鹰李治深; 关键词：五指山小型猪 CDNA文库克隆生物信息学分析

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海南省自然科学基金(30509)