艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008ZX10203)
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
- 相关作者：李新艳张继明刘红艳佘会元翁心华更多>>
- 相关机构：上海市第七人民医院复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用滚环扩增技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究被引量：5
- 2010年
- 目的 应用滚环扩增（RCA）技术检测HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）,观察该方法的特异性和敏感性.方法 以HBV全基因质粒为模板,经酶切、连接、浓缩、胶回收纯化等步骤,构建和制备HBV cccDNA标准品.抽提7例慢性乙型肝炎患者肝组织总DNA,进行滚环扩增.用HBV cccDNA标准品、3.2 kb线性HBV DNA、健康肝组织总DNA及15例慢性乙型肝炎患者血清总DNA作为对照,验证此方法的特异性.将HBV cccDNA标准品进行系列稀释,了解该方法的敏感性.结果 成功构建了HBV cccDNA,并可用RCA方法进行扩增.RCA方法可从2 mg的慢性乙型肝炎患者肝组织中检测到HBV cccDNA,并可检测低至1×102拷贝/μL的HBV cccDNA.RCA方法不能检测3.2 kb线性HBV DNA,在健康肝组织及15例慢性乙型肝炎患者血清中亦检测不到HBV cccDNA.结论 RCA方法操作较方便,具有很高的特异性和敏感性.
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