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我国小型猪内源性反转录病毒的相关研究: 随着移植医学和免疫学研究的进展,也由于人源供体器官的短缺,猪被选定为最合适的异种移植供体。现今,猪心脏瓣膜已成功地移植入人体内,猪皮肤已作为烧伤病人的暂时覆盖物,猪胰岛细胞已被植入糖尿病人体内,猪→人异种移植已展现出十分...; 马玉媛吕茂民吴建敏丁芳徐述阳玉彪郭艳茹田克恭章金刚; 文献传递

用RACE技术快速扩增五指山猪来源的猪内源性反转录病毒3'LTR被引量：1: 2004年; 测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3'LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3'端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3'LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。; 吕茂民谢放吴健敏章金刚; 关键词：五指山猪猪内源性反转录病毒同源性分析

中国巴马小型猪内源性反转录病毒的检测被引量：8: 2003年; 目的 :对我国特有巴马小型猪内源性反转录病毒 ( porcine endogenous retrovirus,PERV)的存在与 m RNA的表达情况进行检测 ,了解巴马小型猪内源性反转录病毒的携带情况。方法 :根据以往建立的 PCR、RT-PCR检测方法 ,对来自于巴马小型猪外周血淋巴细胞的 DNA和RNA样品进行 PERV核心蛋白基因 ( gag)、多聚酶基因 ( pol)及囊膜基因 ( env)的存在与表达进行检测 ;同时 ,根据目前通用的 env基因分型方法检测 PERV env-A、env-B、env-C的存在与表达。结果 :在 1 2个被检的 DNA样品中均检出了PERV特异性 DNA的存在 ;同样 ,在 1 2个被检的 RNA样品中均有 PERV特异性 RNA的表达 ,且所表达的 PERV均为 A型和 B型 ;其中有9个 DNA样品检测出 PERV-C型的存在 ,所有样品中均未检出 C型 PERV的表达。结论 :检测结果表明 1 2个被检巴马小型猪基因组中存在着内源性反转录病毒序列 ,且能以 m RNA的形式表达 ,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础。; 徐斯日古楞吕茂民吴健敏章金刚; 关键词：巴马小型猪

猪内源性反转录病毒感染HEK293细胞模型的建立被引量：10: 2003年; 目的　建立猪内源性反转录病毒感染HEK2 93细胞的模型 ,验证PERV在体外对人源细胞的感染性 ,并进一步研究PERV的生物学特性。方法　将G4 18抗性的HEK2 93细胞与猪源PK 15细胞共培养 ,6周后 ,用含有6 0 0 μg mlG4 18的选择性培养基对共培养细胞进行加压筛选 ,用以除去共培养体系中的PK 15细胞 ;然后应用PCR及RT PCR的方法对所制备的感染细胞模型进行系统鉴定。结果　经 6周共培养及 3周加压筛选后 ,细胞的形态、生长速度及折光性均未见明显变化 ;PCR及RT PCR鉴定表明 ,筛选后的共培养体系中已没有PK 15细胞的存在 ;PERV特异性检测方法检测显示 ,该细胞模型的DNA中已有PERV的整合且有PERV特异性mRNA的表达。结论　本实验成功建立了PERV感染HEK2 93细胞的模型 ,证实了PERV在体外对人源细胞具有感染性 ;; 吕茂民贾莉玮斯日古愣杨文斌杨姝章金刚; 关键词：细胞模型病毒安全性异种移植

五指山猪内源性反转录病毒5’端非编码区的RACE扩增及其结构和调控元件分析: 目的获得五指山猪内源性反转录病毒5’端非编码区(5’UTR)cDNA,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础。方法采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆来源于五指山猪的内源...; 吴健敏阳玉彪吕茂民谢放郭艳茹章金刚; 关键词：克隆顺式作用元件; 文献传递

猪内源性反转录病毒在中国实验小型猪中的存在与表达被引量：4: 2003年; 目的　对中国实验小型猪中内源性反转录病毒的存在与mRNA的表达进行检测 ,摸清中国实验小型猪中内源性反转录病毒的携带情况。方法　根据已发表的PERV的序列设计并合成了三对引物 ,分别用于检测PERV核心蛋白基因 (gag)、多聚酶基因 (pol)及囊膜基因 (env)的存在与表达 ;同时 ,根据目前通用的env基因分型方法合成了三对用于分型检测的引物env A、env B、env C。应用PCR、RT PCR扩增的方法 ,对来自于中国实验小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行了检测。结果　在 6个被检DNA样品中均检出了PERV特异性DNA的存在 ;同样 ,在被检RNA样品中均有PERV特异性RNA的表达 ,且所表达的PERV均为A型和B型 ,在所有样品中均未检出C型PERV的表达。结论　初步表明中国实验小型猪中存在内源性反转录病毒序列 ,且能以mRNA的形式表达 ,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础。; 吕茂民贾莉玮杨文斌杨姝熊景峰丁壮陈华谢忠忱章金刚; 关键词：内源性逆转录病毒聚合酶链反应

猪内源性反转录病毒5′端非编码区的克隆及结构分析被引量：4: 2005年; 通过五指山猪内源性反转录病毒5′端非编码区(5′UTR)cDNA的克隆,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础。本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得全长约1035bp的PERV 5′UTR。通过NCBI公共数据库BLASTn序列进行同源性分析,并应用KEGG数据库对该转录调控区进行顺式作用元件定位分析,结果发现PERV 5′UTR与GenBank公布的部分PERV 5′UTR相比较,同源性在82.6~94.8%之间。一级结构分析发现PERV 5′UTR由U3、R、U5区、引物结合区(PBS)及前导序列组成,可能的核心启动子序列与具有增强子作用的39bp重复序列分别位于U3区的-67^+1与-97^-59区段。在5′UTR转录调控区(-428^+507)鉴定出31个有效的顺式作用元件位点,其中NF-Y、TBP、Oct-1、HSF、GATA-1和GATA-2等与PERV的转录、调控密切相关。; 吴健敏阳玉彪吕茂民谢放郭艳茹章金刚; 关键词：五指山猪顺式作用元件

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北京市自然科学基金(5032015)