国家科技支撑计划(2006BAD06A07)
- 作品数：30 被引量：245H指数：10
- 相关作者：刘长明危艳武黄立平陆月华张朝霞更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
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- 实时定量PCR对猪圆环病毒2型感染猪体内病毒分布规律的研究
- 根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-GreenⅠ嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107-101范围内具...
- 危艳武刘长明袁婧黄立平张朝霞
- 关键词：猪圆环病毒2型实时定量PCR
- 文献传递
- 检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用
- 利用抗PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种阻断ELISA方法,用于检测猪血清中PCV2中和抗体。该方法将PCV2多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,以辣根过氧化物酶标记的单抗为指示抗体,通过测定该酶标...
- 黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军
- 关键词：猪圆环病毒2型单克隆抗体阻断ELISA
- 文献传递
- 猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用
- 本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2...
- 黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华
- 关键词：猪圆环病毒1型抗体检测
- 文献传递
- 致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定
- 从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育一株细胞培养适应毒,命名为PRV-J...
- 张超范刘长明危艳武刘霓虹
- 关键词：猪伪狂犬病病毒强毒株
- 文献传递
- 高致病性PRRSV HuN4株Nsp4的原核表达及其抗体水平检测被引量：2
- 2011年
- 为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western blot试验显示,Nsp4在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并且具有良好的反应活性。利用该蛋白建立ELISA方法,检测PRRSV HuN4株感染仔猪的不同时间内的血清,并比较抗Nsp4,囊膜蛋白和M蛋白,N蛋白的抗体水平,结果表明Nsp4抗体升高的时间晚于囊膜蛋白和M蛋白、N蛋白出现的时间,同时抗体水平也低于其他蛋白。
- 董建国刘永刚石文达武嘉男王刚刘鹤徐明明荣福龙李丽琴田志军蔡雪辉
- 关键词：NSP4原核表达抗原性
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定被引量：15
- 2010年
- 【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原,其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,起保护性抗原作用,对其进行抗原表位鉴定十分必要。【方法】本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免疫原制备5株单克隆抗体,通过原核表达系统对ORF2基因进行了截短表达,先行对Cap蛋白抗原表位进行宽幅定位,然后利用合成多肽对Cap抗原表位做精确扫描定位。【结果】5株单抗中有4株针对同一抗原表位,坐落在Cap蛋白N末端核定位信号区,经多肽扫描证实,核心序列为26RPWLVHPRHRY36;另1株单抗(1D2)仅与重组Cap蛋白产生免疫活性反应,对4个分段截短表达的Cap蛋白无免疫活性反应,鉴于该单抗具有中和病毒活性,针对的可能是构象表位。【结论】本研究首次鉴定出位于Cap蛋白核定位信号区的一个抗原表位,为以后Cap蛋白功能及核定位机理的研究奠定基础。
- 郭龙军陆月华黄立平危艳武刘长明
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白抗原表位核定位信号
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GD3株的分离鉴定及其分子特征被引量：1
- 2009年
- 2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3株的6条基因大片段,扩增产物克隆于pMD18-T载体鉴定后测序,同时应用RACE技术对GD3株的5'末端进行扩增和测序。结果表明GD3株基因组全长15425nt,包含个9开放阅读框,5'UTR长189nt,3'UTR长150nt。序列分析结果表明,GD3株在分子遗传演化上介于PRRSV变异毒株(HuN4株、JXA1株)和CH-1a之间,与HuN4和JXA1之间的相似性为97.1%和97.2%;与CH-1a的核苷酸相似性为94.9%。
- 马平蔡雪辉刘永刚石文达王淑杰王洪峰李成君张琪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用
- 本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2...
- 黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华
- 关键词：猪圆环病毒1型抗体检测
- 文献传递
- 高致病性PRRS VORF3基因在昆虫细胞中的表达与免疫原性研究被引量：2
- 2010年
- 为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3的结构、功能和免疫学特性,本研究根据GenBank登录的高致病性PRRSV变异株(HP-PRRSV) HuN4株ORF3基因序列,经序列分析去除其N端的一部分疏水性区域(1aa～49aa),设计合成引物。将扩增的基因连接于pFastBac HTb杆状病毒载体中,构建重组质粒pF-ORF3,转化至感受态DH10Bac中,获得重组杆粒rBac-ORF3。再将其转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rAc-ORF3。用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)分析表明GP3在昆虫细胞Sf9中获得正确表达,而且具有良好的反应活性。用纯化的GP3免疫小鼠,制备抗GP3多克隆抗血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其效价。本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达了重组GP3,经GP3免疫的小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体,证明表达的GP3具有特异的免疫原性。
- 徐明明蔡雪辉刘永刚王淑杰王洪峰石文达李丽琴荣福龙
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3杆状病毒表达免疫原性
- 高致病性猪蓝耳病直接免疫荧光诊断方法的建立及其应用被引量：10
- 2009年
- 以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(FA),用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16h可检测到抗原阳性细胞,接种后60h～72h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。IFA为PRRS的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感、特异的检测方法。
- 袁婧刘长明魏萍危艳武张朝霞
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征直接免疫荧光
