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鸡IBDV在微载体微型反应器DF-1细胞系上繁殖特性研究被引量：5: 2013年; 对IBDV在微型生物反应器转管DF-1细胞系上繁殖特性进行了较为系统的研究，转管中接种DF-1细胞3×10’个左右，培养6d细胞增至2．4～2．5×10^8个，确定培养6d为最佳接毒时间；病毒的最佳接种剂量为0．78TCID50／细胞（即0．78MOI），最佳收毒时间为接毒后的28h；上清和全悬液毒价呈平行关系，但后者更高，可达10^9.5TClD5.0／mL以上。细胞数增长与糖耗间呈明显平行关系，在细胞生长期内（6d）平均每个细胞耗糖量为6．5×10μg／24h，可根据糖耗量的多少推测细胞生长状态和数量；接毒后糖耗速率的高峰要先于病毒滴度高峰，在糖耗高峰出现后下降至趋于零的瞬间收获，可获得较高毒价的病毒液。在毒价高峰时收获1／2毒液后9h，收获1／3毒液后18h可再次获得最高毒价的毒液，这可能与高密度培养中及时补充新的培养液有关。本试验为IBDVHQ株在生物反应器上大规模培养提供了参考依据。; 杨霞周欣陈陆王永生赵军王川庆王泽霖; 关键词：传染性法氏囊病毒

4株IBDV的分离鉴定及VP2基因序列分析被引量：6: 2013年; 通过接种鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)、DF-1细胞和琼脂扩散试验,对2010～2012年间收集于河南地区疑似鸡传染性法氏囊病病料,进行鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的分离、鉴定,得到4株IBDV;应用RT-PCR对分离株VP2基因进行扩增、克隆和序列测定后,分析比较4个分离株与参考毒株的VP2序列。结果表明:LY株属于超强毒株,与已发表的vvIBDV D6948株、OKYM株、UK661株、GZ/96株亲缘关系较近,核苷酸同源性达97.9%～98.2%;ZZ株属于强毒株,与标准强毒株52/70株亲缘关系较近,核苷酸同源性为97.8%;AY、XC株不仅具有弱毒株的特征,同时又具有变异毒株的特征,属于变异弱毒株,与标准弱毒株CU1的亲缘关系最近,核苷酸同源性达99.0%～99.3%。证明河南区域同时存在着不同毒力的IBDV毒株,病毒变异呈多态性。; 王帅涛常洪涛李欢李伟豪燕贺王川庆姚惠霞刘红英王新卫; 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒株 VP2基因

鸡传染性支气管炎病毒ck/CH/HN/1205株的分离鉴定及S1基因的分子特征被引量：1: 2013年; 2012年3月从河南省某疑似患鸡传染性支气管炎鸡场中分离到1株鸡传染性支气管炎病毒,通过鸡胚矮小化试验、鸡红细胞凝集试验、干扰新城疫病毒增殖试验、动物回归试验和RT-PCR试验对该毒株进行了鉴定,并对分离株的S1基因进行序列分析。结果显示:该毒株能使鸡胚形成典型的"侏儒胚";病毒尿囊液经胰酶处理后可凝集鸡红细胞,效价达28;病毒能够显著干扰鸡新城疫病毒LaSota株在鸡胚中的增殖;病毒可致使15日龄SPF雏鸡出现典型的鸡传染性支气管炎病变。其S1基因全长为1 620 bp,与GenBank中已经发表的部分国内外毒株S1基因的核苷酸同源性在75.6%～99.1%之间;系统进化分析显示,分离株属于QX-like基因型,与疫苗株H120、W93的核苷酸序列同源性仅为78.5%和78.3%,亲缘关系较远。; 李伟豪王帅涛常洪涛刘红英王川庆赵军王新卫; 关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因遗传进化分析

猪圆环病毒2型在转管微载体培养PK-15细胞中增殖动态被引量：3: 2015年; 为提高猪圆环病毒2型（PCV2）的增殖规模及单位体积内的病毒滴度,本研究利用转管微型反应器,采用荧光定量PCR检测方法,对PCV2在PK-15细胞中复制特性和增殖动态进行了系统研究。结果显示,转管（内置0.6 g纸片载体）中接种约2.98×10^7个DF-1细胞,培养7 d细胞增至1.93×10^8～2.0×10^8个,并确定培养7 d时为最佳接毒时间;病毒的最佳接种剂量为120.8 MOI,最佳收毒时间为接毒后的100 h,可达5.53E＋06以上。细胞数增长与糖耗间呈明显平行关系,在细胞生长期内（168 h）平均每个细胞耗糖量为3.09×10^-8g/24 h,可以根据糖耗量的多少推测细胞生长状态和数量。相同培养液中利用转管微型反应器培养PK-15细胞生产PCV2最终获得的病毒液毒价比转瓶培养毒价提高1.65倍。本实验为PCV2在生物反应器中大规模培养提供了参考依据。; 杨霞高金良陈陆赵军常洪涛王新卫刘红英姚惠霞王川庆王永强; 关键词：微载体猪圆环病毒2型 PK-15细胞

鸡传染性法氏囊病毒实时qRT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：3: 2012年; 根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表明,其Ct值与标准品模板在4.03×101～109拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,对IBDV核酸的最低检出量为40拷贝/μL,灵敏度是常规RT-PCR检测方法的1 000倍;该方法不与其它禽源病毒发生交叉反应,批内变异系数小于0.5%。应用本方法对DF-1细胞中IBDV的增殖滴度进行了测定,并与经典的TCID50测定方法进行了比较。结果显示两种方法测定的IBDV在微载体悬浮培养和方瓶静态培养条件下DF-1细胞上的增殖曲线都具有一定的平行关系,且qRT-PCR方法比TCID50方法更加快速和敏感,更适合于对IBDV增殖滴度的实时快速测定。; 周欣杨霞赵军常洪涛王新卫陈陆王川庆; 关键词：鸡传染性法氏囊病毒 QRT-PCR TCID50

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