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实验用猪胰腺和小肠组织总RNA提取及鉴定被引量：11: 2005年; 目的:探讨提取猪胰腺和小肠组织总RNA并尽量减少RNA降解的方法,为胰腺和小肠组织高质量RNA的提取和进一步研究奠定基础。方法:取新鲜猪胰腺和小肠组织,RNA提取采用酸性一步法。结果:RNA琼脂糖凝胶电泳显示RNA没有明显降解。结论:胰腺和小肠组织RNA酶含量丰富,极易降解RNA。操作速度、RNA提取试剂盒的质量和防止RNA污染的综合措施是成功制备高质量RNA的关键。; 白纪刚吕毅王浩华禄韶英; 关键词：胰腺小肠黏膜总RNA提取小肠组织猪胰腺琼脂糖凝胶电泳

重组质粒pIRES2-EGFP/CCK的构建及其在仓鼠体内及COS-7细胞中的表达(英文): 2006年; 目的:构建猪源性CCK基因重组真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK(CCKpDNA),研究其在哺乳动物细胞和仓鼠体内的表达。方法:以限制性内切酶法从中介载体pMD18-T/CCK中切取目的片段CCK,将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,以脂质体法转染COS-7细胞,同时采用直接肌肉注射法免疫仓鼠,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果:用CCKpDNA转染COS-7细胞后24,48,72 h均可检测到绿色荧光蛋白的表达,其中72 h组荧光强度达到最强。用CCKpDNA免疫仓鼠后,第4天注射部位可检测到绿色荧光蛋白的表达,第14天荧光强度明显增强,第42天荧光强度进一步增强,正常对照组始终未检测到绿色荧光蛋白的表达。结论:成功构建了猪源性CCK基因真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,并成功地在哺乳动物细胞和仓鼠体内进行了表达,为仓鼠胰腺癌的交叉免疫治疗奠定了基础。; 吕毅白纪刚王浩华; 关键词：胆囊收缩素细胞转染 COS-7细胞

仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性被引量：6: 2005年; 目的建立仓鼠胰腺癌原位模型,并研究其生物学特性.方法将仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM-1接种于仓鼠胰腺背膜下,分别于第7,14,21,28日各剖杀10只,肉眼及光学显微镜下观察原位肿瘤的生长、淋巴结转移及肝转移,同时观测腹水量.结果仓鼠胰腺癌原位模型成活率达95%,生长迅速.接种后第7,14,21,28日原位肿瘤大小分别为(16±6),(173±44),(369±87),(974±226)mm3.第21日,毛细淋巴管内可见癌细胞团,部分淋巴结有癌细胞转移,可见少量淡血性腹水.第28日,淋巴结阳性率进一步增加,可见血性腹水,量明显增多;部分仓鼠发生了肝转移.结论仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM-1原位模型建立方法简便,易复制,而且肿瘤保持了胰腺癌的生物学特性,是理想的胰腺癌研究模型.; 白纪刚吕毅王浩华; 关键词：胰腺肿瘤金仓鼠

pIRES2-EGFP/CCK质粒的构建及其在仓鼠体内表达: 2005年; 目的　胆囊收缩素 (Cholecystokinin,CCK)在胰腺癌的发生发展中起着很重要得作用 ,本实验的目的是构建猪源性 CCK基因真核表达质粒 p IRES2 - EGFP/ CCK,并在哺乳动物细胞 COS- 7中和仓鼠体内进行表达。方法　从含 CCK的中介载体 p MD18- T/ CCK中 ,以限制性内切酶方法获取目的片段 ,将其克隆入真核表达载体 p IRES2 - EGFP中 ,以脂质体法转染COS- 7细胞 ,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达 ,同时采用肌肉注射法免疫仓鼠 ,了解重组质粒 p IRES2 - EGFP/ CCK的体内表达。结果　构建了猪 CCK基因的重组真核表达质粒 p IRES2 - EGFP/ CCK,用其转染 COS- 7细胞后 2 4 h、4 8h、72 h均可检测到绿色荧光蛋白的表达 ,其中 72 h组荧光强度达到最强。用 p IRES2 - EGFP/ CCK免疫仓鼠后 ,第 4天注射部位可以检测到绿色荧光蛋白的表达 ,第 14天荧光强度明显增强 ,第 4 2天荧光强度进一步增强 ,正常对照组始终未检测到绿色荧光蛋白的表达。结论　成功构建了猪源性 CCK基因真核表达质粒 p IRES2 - EGFP/ CCK,并成功地在哺乳动物细胞 COS- 7中和仓鼠体内进行了表达。; 吕毅白纪刚王浩华禄韶英; 关键词：胆囊收缩素细胞转染 COS-7细胞

重组质粒pIRES2-EGFP/CCK的构建及其在体内外的表达: 2005年; 目的构建猪源性胆囊收缩素(CCK)基因真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,并在哺乳动物细胞COS-7中和仓鼠体内进行表达。方法从含CCK的中介载体pMD18-T/CCK中,以限制性内切酶方法获取目的片段,将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,以脂质体法转染COS-7细胞,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,同时采用肌肉注射法免疫仓鼠,了解重组质粒pIRES2-EGFP/CCK的体内表达。结果构建了猪CCK基因的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,用其转染COS-7细胞后24h、48h、72h均可检测到绿色荧光蛋白的表达,其中72h组荧光强度达到最强。用pIRES2-EGFP/CCK免疫仓鼠后,第4d注射部位可以检测到绿色荧光蛋白的表达,第14d荧光强度明显增强,第42d荧光强度进一步增强,正常对照组始终未检测到绿色荧光蛋白的表达。结论成功构建了猪源性CCK基因真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,并成功地在哺乳动物细胞COS-7中和仓鼠体内进行了表达,为仓鼠胰腺癌的交叉免疫治疗奠定了基础。; 白纪刚吕毅王浩华禄韶英史源; 关键词：细胞转染 COS-7细胞重组质粒 CCK

胆汁酸对人胰腺癌细胞的毒性作用被引量：5: 2003年; 目的 :通过研究人胆汁中胆汁酸对人胰腺癌PANC 1和MIAPaCa 2细胞株体外增殖和超微结构的影响 ,探讨胆汁酸对人胰腺癌细胞生长抑制作用 .方法 :选用人胰腺癌PANC 1和MIAPaCa 2细胞在不加或添加 1 0mL·L-1 、2 0mL·L-1 、4 0mL·L-1 胆汁的RPMI 1 6 4 0培养液中经过 2 ,4 ,6 ,8d培养后 ,用MTT方法测定胆汁对细胞增殖抑制率 .PANC 1细胞培养 2 4h和 4 8h以后用扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部超微结构变化 .结果 :PANC 1和MIAPaCa 2细胞在添加胆汁的培养液中增殖受明显抑制 (P <0 .0 1 ) ,其对PANC 1的抑制率为 (2 4 .0 9± 5 .0 5 ) % -(89.6 1± 2 .2 8) % ,对MIAPaCa 2的抑制率为 (1 6 .71±1 0 .5 1 ) % - (78.5 5± 6 .5 9) % .PANC 1细胞在含胆汁培养液中培养后 ,细胞表面微绒毛变短变疏 ,细胞内线粒体、粗面内质网发生空泡变性 .结论 :胆汁中的胆酸对人胰腺癌细胞增殖有抑制作用。; 刘昌吕毅王浩华张晓刚; 关键词：胆汁酸细胞毒性胰腺癌超微结构毒性作用

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国家自然科学基金(30170917)