吉林省科技厅科研基金(200705274)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：杨海山李长锋张斌王芳更多>>
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- 靶向存活素基因的RNAi联合X线照射对肺腺癌A549细胞凋亡的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:构建靶向存活素(survivin)基因的RNA干扰(RNAi)载体,观察其联合X射线照射对肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:根据GenBank中survivin的cDNA序列设计干扰序列,构建重组干扰质粒pGenesil2-survivin。酶切、测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞;实验设正常组、空载体组、pGenesil2-survivin组、5 Gy照射组和pGenesil2-survivin+5 Gy照射组。流式细胞术与TUNEL检测细胞凋亡的变化,Western blotting检测survivin及caspase-3蛋白表达。结果:KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,得到大小为389 bp和4 206 bp的两个片段,与预期结果一致;测序结果与寡核苷酸链经DNAssist2.0软件进行比对,二者完全一致,说明载体构建正确;质粒pGenesil2-survivin转染肺腺癌A549细胞48 h,pGenesil2-survivin与5 Gy X射线照射都能诱导细胞凋亡百分率增加(P<0.05),二者共同作用凋亡百分率增加更明显;Westernblotting结果显示,pGenesil2-survivin组中survivin蛋白与-βactin蛋白灰度比值较正常组明显降低(P<0.01);而caspase-3蛋白与-βactin蛋白灰度比值较正常组明显增强,且pGenesil2-survivin+5 Gy照射组增加更明显(P<0.01)。结论:靶向存活素基因的RNAi能够明显抑制survivin蛋白表达,增强caspase-3蛋白表达,促进凋亡;联合5 Gy X射线照射,增强促凋亡作用。
- 李长锋张斌王芳杨海山
- 关键词：存活素流式细胞术细胞凋亡
