国家教育部博士点基金(20020335039)
- 作品数：4 被引量：35H指数：3
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- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院更多>>
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- 腺病毒介导反义c-myc增强骨肉瘤细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的构建表达反义cmyc的重组腺病毒,探讨重组腺病毒介导反义cmyc转染的人骨肉瘤MG63细胞对顺铂化疗敏感性的影响。方法应用基因重组技术,将约720bp的人cmyccDNA反向克隆到腺病毒载体,经重组、扩增、病毒包装后构建表达反义cmyc的重组腺病毒(AdAscmyc),并在体外转染骨肉瘤MG63细胞,采用瑞士染色、吖啶橙染色、蛋白免疫印迹(WesternBlot)、细胞体外增殖抑制试验(MTT)、流式细胞仪(FCM)等观察细胞形态、检测cmyc蛋白表达、瘤细胞体外增殖抑制、凋亡及细胞周期,分析AdAscmyc体外转染的骨肉瘤MG63细胞对顺铂化疗敏感性。结果成功构建AdAscmyc,滴度可达2×109pfu/ml,体外转染MG63细胞48h后,可降低cmyc蛋白表达,并与浓度为2.0、5.0μg/ml的顺铂作用2h后,可抑制MG63细胞的体外增殖,抑制率分为33.4%、54.2%,与对照腺病毒(AdLacZ)转染组相比差异有统计学意义(P<0.05),FCM检测证实AdAscmyc的转染可诱导骨肉瘤细胞凋亡,且顺铂治疗后凋亡比例增加,细胞周期分析显示AdAscmyc转染的骨肉瘤细胞出现G2/M期阻滞。结论腺病毒介导反义cmyc能诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡并增加MG63细胞对顺铂化疗敏感性。
- 杨迪生解先宽叶招明陶惠民
- 关键词：骨肉瘤细胞介导反义G2/M期阻滞细胞周期分析吖啶橙染色
- 反义c-myc重组腺病毒的构建及其抗骨肉瘤细胞的作用被引量：28
- 2005年
- 背景与目的:c-myc原癌基因在细胞的增殖调节中发挥重要作用,研究表明c-myc在骨肉瘤中常常扩增和过表达,而且具有促进细胞转化和诱导转移的特性。本文构建表达反义c-myc的重组腺病毒,并探讨其对不同p53基因型的骨肉瘤细胞系MG-63(P53缺失型)、U2OS(p53野生型)的影响。方法:应用基因重组技术构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-As-c-myc),并在体外转染MG-63、U2OS细胞,采用蛋白免疫印迹(Westernblot)、吖啶橙染色、RT-PCR、流式细胞仪(FCM)等方法检测或观察其对细胞c-mycmRNA表达、瘤细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果:成功构建Ad-As-c-myc,滴度可达2×109pfu/ml,体外转染MG-63、U2OS细胞后可明显抑制细胞的体外增殖,而且对携带野生型p53的U2OS更敏感。Ad-As-c-myc转染48h后可降低c-mycmRNA表达。吖啶橙染色及FCM检测证实,转染Ad-As-c-myc可诱导骨肉瘤细胞凋亡,细胞周期分析显示转染Ad-As-c-myc的MG-63细胞出现G2/M期阻滞,而U2OS细胞出现G1期阻滞。结论:腺病毒介导反义的c-myc能以p53依赖或非依赖性途径诱导骨肉瘤细胞凋亡,并抑制骨肉瘤细胞的增殖。
- 解先宽杨迪生叶招明陶惠民
- 关键词：骨肉瘤C-MYC基因腺病毒
- 反义c-myc对增强顺铂引起骨肉瘤细胞凋亡作用的实验研究被引量：6
- 2005年
- 目的:通过反义基因治疗降低人骨肉瘤MG-63细胞c-myc的表达,并探讨顺铂对c-myc低表达的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用的影响。方法:以腺病毒为载体,构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-Asc-myc),并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞,降低MG-63细胞c-myc的表达,与不同浓度的顺铂作用后,采用MTT、蛋白免疫印迹(Westernblot)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪(FCM)、透射电镜等检测顺铂对骨肉瘤MG-63细胞体外增殖抑制、凋亡相关基因的表达和凋亡作用。结果:构建的Ad-Asc-myc体外转染MG-63细胞48h后,可明显降低c-Myc蛋白表达,并与浓度为2.0mg/L的顺铂作用2h后,对MG-63细胞的体外增殖抑制率可达38.0%;转染的细胞Bcl-2表达降低,Bax表达增加,而E2F-1的表达无变化;FCM、电镜等显示Ad-Asc-myc转染后可诱导骨肉瘤细胞凋亡,并增加顺铂对骨肉瘤细胞的凋亡作用。结论:降低c-myc表达能诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡并增加顺铂对MG-63细胞的促凋亡作用。
- 解先宽杨迪生叶招明陶惠民
- 关键词：基因,C-MYC骨肉瘤顺铂
- 腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因在骨肉瘤化疗中增效作用的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:构建重组反义c-myc腺病毒并探讨其与咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。方法:应用基因重组技术,将约750bp的人c-myccDNA反向克隆到腺病毒载体,构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-Asc-myc),与咖啡因、顺铂单独或联合体外作用于人骨肉瘤MG-63细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blotting)、MTT、流式细胞仪(FCM)、透射电镜等检测c-Myc蛋白、bcl-2、bax、E2F-1等基因表达、瘤细胞体外增殖抑制、凋亡及细胞周期,分析Ad-Asc-Myc、咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。结果:成功构建Ad-Asc-myc,滴度可达2×1012pfu/L,体外转染MG-63细胞48h后,可降低c-Myc蛋白表达,并抑制其体外增殖;Ad-Asc-myc、2.0mol/L咖啡因分别与浓度为2.0、5.0mg/L顺铂共同作用后,可增加顺铂对MG-63细胞的体外增殖抑制率;Ad-Asc-myc联合2.0mol/L咖啡因能明显加强顺铂的体外抗肿瘤作用,凋亡相关基因bcl-2基因表达下降,bax表达上升,而E2F-1表达无明显变化;FCM检测显示Ad-Asc-myc的转染可诱导骨肉瘤细胞凋亡,并增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用;单独咖啡因不能诱导瘤细胞凋亡,但能增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用;Ad-Asc-myc联合2.0mol/L咖啡因能明显加强顺铂诱导瘤细胞凋亡作用。细胞周期分析显示顺铂作用后瘤细胞出现S期阻滞,而咖啡因则能逆转这种阻滞;Ad-Asc-myc转染的骨肉瘤细胞出现G2/M期阻滞。结论:腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因能明显增强顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞的诱导凋亡及化疗作用。
- 解先宽杨迪生叶招明陶惠民
- 关键词：骨肉瘤C-MYC咖啡因腺病毒
