湖南省自然科学基金(11JJ3040)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 皱边石杉内生真菌ISSR-PCR反应条件的优化被引量：3
- 2012年
- 以从皱边石杉中分离纯化出的99株内生真菌DNA为材料,优选出10条ISSR引物(UBC842、UBC848、UBC850、UBC856、UBC861、UBC864、UBC868、UBC873、UBC880、UBC887)的最适退火温度,并对其进行ISSR–PCR反应体系单因素试验及正交试验优化,建立皱边石杉内生真菌ISSR–PCR的优化反应体系,即25μL反应体系中,10×PCR Buffer(Mg2+浓度为2.0 mmol/L)2.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.6μL,引物(10 pmol/μL)2.0μL,Taq E(1 U/μL)1.5μL,DNA模板(10 ng/μL)3μL,无菌ddH2O 15.4μL。以UBC873引物对99株内生真菌基因组DNA进行PCR扩增,初步获知皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性非常丰富。
- 史云峰禹利君刘仲华黄璜胥锦桦朱楠楠
- 关键词：内生真菌正交试验
- 皱边石杉内生真菌资源遗传多样性的ISSR分析被引量：1
- 2012年
- 目的采用ISSR标记技术从分子水平探讨皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性,建立皱边石杉内生真菌资源遗传分化指纹图谱,为筛选可产石杉碱甲的目标菌株提供快捷的判别依据。方法以从皱边石杉中分离的100株内生真菌为材料,建立其ISSR优化反应体系并分析其遗传多样性;TLC、HPLC检测发酵产物。结果优化筛选的10条ISSR引物对皱边石杉内生真菌进行遗传多样性分析,共扩增出3 975条清晰条带,多态性条带占100%。遗传相似系数为0.59～0.96,在0.64水平,皱边石杉内生真菌可分为11类;在0.67水平,第I类又可分为5个亚类。采用引物UBC868对13号菌株及皱边石杉基因组DNA扩增,在500、200 bp均具有清晰的扩增条带,发酵产物经TLC和HPLC检测,发现13号菌株与宿主植物皱边石杉同样可产生石杉碱甲。结论皱边石杉内生真菌资源遗传多样性高,遗传距离较远,遗传基础较宽,与13号菌株同属一类的内生真菌可作为石杉碱甲生产的潜力菌株进行重点筛选和诱变。
- 史云峰禹利君黄璜胥锦桦朱楠楠
- 关键词：内生真菌ISSR标记石杉碱甲
