国家自然科学基金(30170433)
- 作品数：11 被引量：41H指数：4
- 相关作者：王恒进王笑云毛慧娟应旭旻沈霞更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院南京医科大学南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
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- 人肾近端小管上皮细胞的原代培养、传代及鉴定方法研究被引量：18
- 2004年
- 目的:创建一种重复性好、细胞量多的人肾近端小管细胞(PTC)培养方法.方法:取新鲜正常人肾组织分离纯化,用含10%新生牛血清等营养充分的DMEM/F12(1:1)液进行近端小管细胞的原代培养及传代,并以免疫组化、酶化学染色、透射电镜鉴定.结果:培养5～6天后融合成单层细胞,形态呈鹅卵石样,可传代7～9代,鉴定确定为人肾近端小管细胞,重复培养10次,均能稳定获得同样细胞,每克肾皮质可分离培养出(6～12)×106个PTC.结论:此培养方法可在7天内获得人肾近端小管细胞,且重复性好,细胞数量多,为进行肾小管细胞治疗提供必需的细胞,也为研究肾小管病变提供实验平台.
- 毛慧娟王笑云徐昌芬程宝庚
- 关键词：近端肾小管上皮细胞原代培养
- 生物人工肾小管对多器官功能障碍猪血压、细胞因子水平及生存时间的影响
- 2004年
- 目的观察人肾近曲小管细胞构建的生物人工肾小管辅助装置(bioartificialrenaltubuleassistdevice,RAD)对急性尿毒症并重症腹腔感染致多器官障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS)/多器官衰竭(multipleorganfailure,MOF)猪血压、白细胞介素、生存时间的影响。方法原代培养人肾近曲小管细胞并构建RAD,急性肾衰竭并MODS/MOF猪模型按随机数字表法分为3组RAD组(n=5),将RAD与血滤器连接,行连续静-静脉血液滤过(continuousvenovenoushemofiltration,CVVH)治疗24h;假RAD组(n=5),将RAD换为无细胞的假RAD,余同RAD组;未治疗组(n=5)不接受血液净化治疗。观察生命体征,肝肾功能,电解质、血气,血清白细胞介素10(IL-10)和生存时间变化。结果①改善血压RAD组、假RAD组在治疗开始后2h内平均动脉血压均偏低(P>0.05),但2h后RAD组逐步上升,至24h上升,显著高于同时间点的假RAD组(63.5±11.8)mmHg和未治疗组(53.5±2.5)mmHg(t=5.34,P<0.01)。②生存时间延长RAD组平均生存时间[(118.7±13.7)h]明显长于假RAD组、未治疗组[(81.2±11.8),(75.0±23.0)h](t=4.654,P<0.01),生存期延长46.20%,58.39%。③RAD组血清IL-10的峰值明显高于假RAD组和未治疗组(t=6.49,P<0.01)。④RAD组和假RAD组血丙氨酸氨基转移酶、尿素氮。
- 毛慧娟王笑云应旭旻王恒进沈霞
- 关键词：生物人工肾小管多器官功能障碍血压细胞因子
- 猪急性肾衰竭并多器官功能障碍模型建立及病理观察被引量：2
- 2008年
- 目的:建立一个重症感染后多器官功能障碍综合征(MODS)并急性肾衰竭(ARF)复合的猪模型。方法:16只健康杂交家猪随机分成模型组和假手术对照组。模型组行盲肠结扎和穿孔(CLP),加作肾动脉夹闭(CRA)制作腹腔感染致MODS并ARF模型,对照组行盲肠和双肾探查术。观察生命体征及主要器官功能(MODS相关指标)变化。结果:模型组术后24～72h出现器官功能障碍:(1)ARF:血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)分别从(92.70±11.05)μmol/L、(4.16±1.02)mmol/L升至(986.37±132.61)μmol/L、(48.13±2.68)mmol/L。(2)肝功能:血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)均超过对照值的2倍;(3)凝血功能:血小板数<80%对照值,且皮肤可见弥漫或散在的出血点;(4)心功能:平均动脉压(MAP)持续≤70%对照值,且呈进行性下降;心率≥130次/min;(5)肺功能:动脉血二氧化碳分压(PaO2)下降,低于69.75mmHg;呼吸频率增快,均值超过照值的2倍;(6)胃肠功能障碍;(7)肾、肝、脾、肺及小肠等器官组织病理上均有不同程度的实质性改变。模型组动物6d内全部死亡,平均存活时间(69.81±22.59)h;对照组全部存活,且器官功能无明显变化。结论:采用CLP+CRA方法,可以成功地复制出MODS并ARF复合模型,并可见最终均发展为多器官衰竭。
- 王恒进张苗孙琤
- 关键词：多器官功能障碍综合征急性肾衰竭猪模型
- 生物人工肾小管治疗急性尿毒症伴重症感染致多器官衰竭猪的研究被引量：1
- 2005年
- 目的观察人肾近曲小管细胞构建的生物人工肾小管辅助装置(RAD)对急性尿毒症伴重症腹腔感染致多器官障碍综合征(MODS)/多器官衰竭(MOF)猪的疗效。方法原代培养人肾近曲小管细胞并构建RAD,将急性肾功能衰竭(ARF)伴MODS/MOF猪模型随机分为3组:①RAD组(A组,n=5):将RAD与血滤器连接,行连续静-静脉血液滤过(CVVH)治疗24h;②假RAD组(B组,n=5):将RAD换为无细胞的假RAD,余同A组;③未治疗组(C组,n=6)。观察生命体征、肝和肾功能、电解质、血气分析、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和生存时间。结果A组治疗至24h时,平均动脉血压(MAP)为(88.13±7.62)mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),显著高于同时间点的B组[(63.50±11.82)mm Hg]和C组[(53.50±2.52)mm Hg,P值均<0.01]。A、B两组血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、血钾(K+)、动脉血氧分压(PaO2)、碳酸氢根(HCO3-)值均较C组明显改善,但两组间无明显差异(P>0.05)。A组治疗至24h时,血清TNF-α为(394.42±35.62)pg/ml,明显低于B组[(531.76±30.23)pg/ml]和C组[(552.89±27.81)pg/ml,P<0.05],B、C两组治疗前、后无明显变化(P>0.05)。A组生存时间为(118.73±8.48)h,明显长于B组的(81.20±11.76)h和C组的(74.96±23.00)h(P<0.01),分别延长46.20%、58.39%。结论应用人肾近曲小管细胞构建的RAD治疗MODS/MOF猪,能显著改善低血压,降低血TNF-α,延长生存时间。
- 毛慧娟王笑云应旭旻王恒进沈霞
- 关键词：生物人工肾小管多器官功能障碍综合征急性肾衰竭多器官衰竭猪模型重症感染
- 生物人工肾小管对多脏器障碍/多器官衰竭猪IL-10和生存时间影响的研究被引量：1
- 2003年
- 从2002年6月～2003年1月,我们采用猪近曲小管上皮细胞株(LLC-PK1)自行构建的生物人工肾小管装置(RAD)[1],对急性肾衰竭(ARF)合并多脏器障碍/多器官衰竭(MODS/MOF)猪进行治疗,观察对抗炎细胞因子IL-10和生存时间的影响,获得满意的结果.
- 王笑云王恒进毛慧娟应旭旻沈霞
- 关键词：生物人工肾小管急性肾衰竭
- 生物人工肾小管对动物模型细胞因子水平及生存时间的影响被引量：4
- 2004年
- 目的:观察人工肾小管辅助装置(bio-artificialrenaltubuleassistdevice,RAD)对动物模型细胞因子水平、生存时间的影响。方法:经盲肠结扎加穿孔及双侧输尿管结扎术造模后的12头猪被随机平均分为3组,分别为RAD治疗组、不含小管细胞的假RAD治疗组和非治疗对照组。各组分别定时抽取静脉血检测血液电解质、肾功能指标。应用猪特异性酶联免疫试剂盒测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并记录两组动物的存活时间。结果:RAD组透析前后的血钾均值为(6.92±0.12),(4.39±0.46)mmol/L,血肌酐均值为(911.3±100.7),(652±130)μmol/L,TNF-α均值为(0.537±0.038),(0.278±0.069)μg/L,与对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。RAD组的平均生存时间为犤(110.25±18.69)h犦,明显长于非治疗对照组犤(72.84±11.62)h犦和假RAD治疗组犤(75.20±19.08)h犦,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:用RAD治疗可降低多脏器功能障碍综合征(multipleorgandys-functionfailure,MODS)并急性肾功能衰竭(acuterenalfailure,ARF)动物的TNF-α水平,并延长其存活时间。
- 应旭旻王笑云王恒进毛慧娟沈霞
- 关键词：生物人工肾小管动物模型细胞因子肿瘤坏死因子-Α急性肾功能衰竭
- 肾脏组织工程研究:生物人工肾小管对多器官功能障碍猪白细胞介素10水平及生存时间的影响被引量：6
- 2005年
- 目的:观察用猪细胞株(LLC-PK1)构建的生物人工肾小管装置(renaltubuleassistdevice,RAD)对多器官功能障碍综合征(multipleorgandys-functionsyndrome,MODS)猪细胞因子白细胞介素10(IL-10)及预后的影响。方法:健康杂交家猪16只,用盲肠结扎和穿孔加双侧输尿管结扎术制作重症感染性MODS并ARF模型,并随机分为3组:RAD治疗组(n=5):将RAD与血滤器连接,对MODS猪模型行连续性静脉-静脉血液滤过(continuousvenovenoushemofiltration,CVVH)治疗;假RAD治疗组(n=5):将RAD换为无细胞的假RAD,余与RAD治疗组相同;对照组(n=6)。观察生命指标、肝肾功能、血气分析、IL-10和生存时间等。结果:①低血压明显改善:RAD治疗组治疗24h时平均动脉压显著高于同时间点的假RAD治疗组、对照组犤(92.75±2.22),(63.50±11.82),(53.50±2.52)mmHg(1mmHg=0.133kPa),F=33.08,P<0.01犦;透析4～20hRAD治疗组动物精神状态明显好转,假RAD治疗组、对照组无显著变化(P>0.05)。②RAD治疗组、假RAD治疗组两组间血丙氨酸转氨酶、肌酐值比较无显著差异。③细胞因子:RAD治疗组IL-10的峰值明显高于假RAD治疗组、对照组犤(241.40±86.64),(106.30±9.69),(102.59±10.21)ng/L,F=9.75,P<0.05犦。④生存时间:RAD组的平均生存时间为(110.25±18.69)h。
- 王恒进王笑云应旭旻毛慧娟沈霞
- 关键词：白细胞介素10/血液
- 生物人工肾小管对多器官功能衰竭细胞因子及存活时间的影响被引量：3
- 2004年
- 目的研究用细胞株(LLC-PK1)构建的生物人工肾小管装置(RAD)对多器官功能衰竭(MOF)猪白介素(IL)-10、肿瘤坏死因子(TNF)α及存活时间的影响。方法ARF并MOF猪随机分为3组:(1)RAD组(A组,n=5):将RAD与血滤器相连,行连续静脉静脉血液滤过(CVVH)治疗24h;(2)假RAD组(B组,n=5):将RAD换为无细胞的假RAD,余与A组同;(3)未治疗组(C组,n=6)。观察血压、肝肾功能、血气、血IL-10、TNF-α(用特异性猪IL-10、TNF-α抗体检测)和生存时间。结果(1)A组治疗24h低血压状况显著改善;4～20h精神状态明显好转。(2)血IL-10(pg/ml)的峰值A组明显高于B、C组(241.40±86.64比106.30±9.69、102.59±10.21,P<0.05)。(3)血TNF-α(pg/ml)A组治疗后较治疗前明显降低(415.30±34.83比526.67±40.08,P<0.05);B、C两组无明显变化。(4)A组生存时间为(110.25±18.69)h,明显长于B组(81.20±11.76)h和C组(74.96±23.00)h(P<0.05),A组比B、C组分别延长了35.8%、47.1%。结论用RAD治疗明显改善了MOF猪低血压,升高血IL-10、降低TNF-α及延长存活时间。
- 王笑云王恒进应旭旻毛慧娟沈霞
- 关键词：生物人工肾小管多器官功能衰竭细胞因子存活时间LLC-PK1RAD
- 生物人工肾对急性肾衰并多器官功能障碍猪的细胞因子反应性及存活时间的影响
- 2009年
- 目的探讨生物人工肾（BAK）对急性肾衰（ARF）合并多器官功能障碍（MODS）猪的细胞因子反应性及存活时间的影响。方法17只ARF并MODS猪模型随机分为三组：BAK组（A组，n=6）；假BAK组（B组，n=6），血滤器中不含细胞；未治疗组（C组，n=5）。观测平均动脉压、肝肾功能、血清IL-10、TNF-α、动脉血气和生存时间。两组计量资料的对比采用t检验；三组计量资料的比较采用方差分析。结果A组治疗24h平均动脉压（mmHg）显著高于B组、C组[（91．82±5．73）vs.（64．29±13．05）vs.（52．91±372），P〈0．01]。血清IL-10（pg／mL）的峰值A组明显高于B、C组[（249．57±43．51）vs．（132．06±17．53）vs．（104．25±13．42），P〈0．01]。血清TNF-α水平（pg／mL）A组治疗后较治疗前明显降低[（402．91±32．47）vs．（537．16±38．45），P〈0．05]；治疗24hA、B两组间亦有显著差异（P〈0．05）。生存时间：A组为（113．01±14．32）h，明显长于B组（83．14±17．68）h和C组（68.95±18．28）h（P〈0．01），A组比B、C组分别延长了35．93％、63．90％。结论BAK可明显延长MODS合并ARF猪模型的存活时间，可能与BAK显著改善其低血压状况、升高血IL-10水平和降低血TNF-α浓度有关。
- 王恒进王笑云张苗应旭旻毛慧娟ZHU Wen-bin孙琤
- 关键词：白介素10肿瘤坏死因子-Α多器官功能障碍存活时间
- 生物人工肾小管体外构建及对氨基酸、钠离子、肌酐转运功能的研究被引量：6
- 2004年
- 目的探讨体外构建生物人工肾小管(RAD)的方法及5h内RAD在体外对肌酐(Cr)、葡萄糖(Glu)、钠离子(Na+)和天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸的转运功能。方法采用猪肾近曲小管上皮细胞株(LLC-PK1)体外培养,然后植入FH66血液滤过器内腔继续培养两周构建RAD。测定RAD对Na+、Cr、葡萄糖及4种氨基酸的转运功能,并与未植入LLC-PK1的滤过系统做对照,并观察哇巴因、根皮苷对转运的特异性抑制作用。结果RAD组肌酐滤过率明显低于对照组(P<0.01)。RAD组Na+、葡萄糖、氨基酸的滤过率在哇巴因及根皮苷作用后明显低于对照组(P<0.01);去除药物抑制因素后,滤过率又能恢复,与对照组比较差异有显著性意义。结论体外构建的RAD具有对氨基酸、葡萄糖、钠离子、肌酐的选择性转运功能,且能在5h内稳定维持。
- 应旭旻王笑云沈霞
- 关键词：生物人工肾小管氨基酸钠离子肌酐转运功能
