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国家重点基础研究发展计划(2011CB504901): 作品数：10 被引量：12H指数：2; 相关作者：王恒樑朱力冯尔玲王建平孙强正更多>>; 相关机构：军事医学科学院中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

志贺菌rfbA基因突变体的构建: 2012年; 目的构建弗氏2a志贺菌301 rfbA基因缺失突变株,初步探究志贺菌脂多糖合成与糖蛋白合成通路是否相关。方法首先用PCR扩增出rfbA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对rfbA基因进行缺失,用PCR进行初步验证,然后通过LPS的银染方法进行进一步验证。随后,制备野生株、rfbA缺失突变株的全菌蛋白样品,进行双向电泳后比较野生株301和rfbA缺失株的蛋白表达谱。结果成功构建了301 rfbA缺失突变株。在LPS的银染实验中,rfbA突变株在凝胶中未形成一长串的梯状条带。在双向电泳实验中,野生株和突变株没有明显的蛋白差异点。结论获得了301 rfbA基因缺失突变体,初步认为志贺菌中不存在与脂多糖O-抗原合成相关的蛋白糖基化途径。; 宋丽牛畅白国旺冯尔玲刘先凯魏华王恒樑熊勇华朱力; 关键词：志贺菌属脂多糖类基因缺失突变

病原细菌多糖疫苗和多糖结合疫苗研究进展被引量：7: 2013年; 在许多病原细菌中,荚膜多糖和O抗原多糖能够刺激机体产生保护性抗体,因此利用病原细菌的多糖制成的疫苗能有效预防传染病,同时避免了病原细菌耐药性的出现。此类疫苗包括多糖疫苗和多糖结合疫苗。细菌体内糖基化的发现,使得利用生物法生产多糖结合疫苗成了多糖结合疫苗生产的热门方向。我们简要综述了多糖疫苗和多糖结合疫苗在研究和应用方面的主要进展。; 潘超朱力王恒樑; 关键词：多糖疫苗多糖结合疫苗病原细菌

中国福氏志贺菌优势序列型ST91获得SRL和Tn7多重耐药岛分析: 2014年; 目的分析中国福氏志贺菌优势序列型ST91(sequence type 91)中志贺菌耐药岛(Shigella resistance locus,SRL)和Tn7耐药岛的分布及变化情况。方法对包括14种血清型(1a[7株],1b[1株],1d[1株],2a[5株],2b[1株],3a[3株],3b[1株],4a[1株],4av[1株],4b[1株],X[9株],Xv[25株],Y[2株]和Yv[1株])和7种ST型(ST91[50株],ST109[1株],ST18[3株],ST142[1株],ST143[1株],ST103[2株],ST16[1株])的59株中国福氏志贺菌基因组中SRL、Tn7耐药岛的编码基因及核酸序列进行分析,并与参考菌株2002017和YSH600的SRL和Tn7岛进行比较。结果所有50株中国分离的福氏志贺菌ST91菌株,1株ST109和1株ST142菌株均携带SRL和Tn7岛。1株ST18菌株仅携带2个耐药岛的3个耐药基因。其他ST型菌株均未发现耐药岛。与参考菌株2002017相比,9株ST91菌株的SRL耐药岛发生了插入或缺失。其中,7株ST91菌株缺失了编码四环素耐药性的tet基因;1株ST91菌株缺失了编码β-内酰胺酶的oxa-1和编码氯霉素乙酰转移酶的cat基因;1株ST91的SRL岛上插入了1个编码广谱β-内酰胺酶的blaTEM-1基因。所有50株ST91、1株ST109和1株ST142菌株携带的Tn7岛的核酸序列和编码基因与参考菌株相比未发现差异。结论福氏志贺菌ST91型中国分离菌株均携带SRL和Tn7耐药岛。在SRL岛上发生了基因的插入和缺失。处于进化早期的ST18菌株,在获得耐药岛的过程中可能发挥了重要作用。; 张楠孙强正王建平代航徐建国; 关键词：福氏志贺菌

弗氏志贺菌2a GadB蛋白的功能研究: 2011年; 目的探究gadB基因的潜在功能及其对弗氏志贺菌2a 301株致病能力的影响。方法利用λ-Red重组系统构建弗氏志贺菌2a 301株的gadB缺失突变株,随后进行基本的表型实验测评,并初步评价其毒力,最后制备突变株和野生株全菌蛋白样品,利用双向电泳技术比较二者在蛋白表达谱上的差异。结果成功获得gadB基因缺失株;生化实验发现缺失株不能利用甘油发酵;而豚鼠角膜实验发现突变株炎症反应稍轻于野生株;全菌蛋白表达谱中发现10个差异蛋白。结论利用双向电泳鉴定到一些可能与GadB有关的蛋白,为gadB潜在功能的研究提供了线索。; 赵天朱力冯尔玲马姗姗廖祥儒王恒樑; 关键词：基因敲除双向电泳

福氏志贺菌gtrI基因突变导致的血清型回复转换被引量：1: 2015年; 目的研究携带O抗修饰基因gtr I的福氏志贺菌Y血清型菌株特征。方法采用血清型多重聚合酶链反应(PCR)分型方法检测携带gtr I基因但I型抗原表位阴性的福氏志贺菌Y血清型菌株,并对其gtr I基因簇进行序列分析,对其基因组进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。结果 5株福氏志贺菌基因组携带gtr I基因簇,但是I型抗血清凝集阴性,表现为Y血清型特征;测序发现这5株菌株中的gtr I基因均发生了功能失活性突变;PFGE分析显示这5株菌株与福氏志贺菌血清型1a菌株具有相同或相近的PFGE带谱。结论携带O抗修饰基因gtr I的福氏志贺菌Y血清型菌株来源于血清型1a。; 王欣儒王建平罗霞孙强正; 关键词：福氏志贺菌

不同温度下福氏志贺菌与其膜囊泡的比较蛋白质组学研究: 2017年; 【目的】对不同温度下福氏志贺菌(Shigella flexneri)及其分泌的膜囊泡进行比较蛋白质组学分析,为进一步理解福氏志贺菌膜囊泡的生物学活性奠定基础。【方法】采用差速离心和密度梯度离心方法,分别富集纯化37℃和30℃培养条件下的野生型福氏志贺菌2a 301株和相应的膜囊泡;借助二维纳升液相色谱-线性离子阱质谱联用系统,对制备得到的4种组分蛋白进行鸟枪蛋白质组学鉴定分析。【结果】37℃和30℃培养条件下,福氏志贺菌菌体蛋白和膜囊泡蛋白的鉴定总数分别为1 510、231、1 412、281,4种组分的共有蛋白数为156。生物信息学分析结果发现:膜囊泡中特异性富集了核糖体结构蛋白和膜起源蛋白,且37℃培养条件下的膜囊泡特异包被了大量三型分泌系统相关蛋白。【结论】运用比较蛋白质组学技术首次分析了不同温度下福氏志贺菌及其膜囊泡的蛋白质组变化,发现一些温度相关的膜囊泡特异包被蛋白,为深入研究膜囊泡的选择性包被奠定基础。; 韩冬梅卫灿东; 关键词：福氏志贺菌蛋白质组

基于凝集素-糖蛋白特异结合的特性筛选与鉴定空肠弯曲杆菌NCTC11168株糖蛋白: 2013年; 【目的】从空肠弯曲杆菌NCTC11168菌株中筛选糖蛋白。【方法】本实验基于凝集素-糖蛋白特异结合的特性,先用免疫印迹的方法确定空肠弯曲杆菌内糖蛋白能与凝集素SBA特异结合,再用包被有凝集素SBA的磁珠捕获样品中的潜在糖蛋白,通过N-乙酰半乳糖胺竞争性洗脱及双向电泳分离,最后利用串联质谱鉴定捕获的糖蛋白。【结果】质谱分析共鉴定到22种空肠弯曲杆菌蛋白,其中至少5种为已报道糖蛋白,包括Cj0633在内的17种为迄今为止未知的潜在糖蛋白。【结论】这种糖蛋白筛选策略可用于细菌糖蛋白的分离鉴定。; 白国旺喻钢刘先凯冯尔玲曾明王恒樑朱力; 关键词：糖蛋白凝集素

鼠疫耶尔森菌201株和201△pCD1株蛋白表达谱比较研究被引量：1: 2015年; 目的分析缺失编码Ⅲ型分泌系统的大质粒p CD1对鼠疫耶尔森菌蛋白质表达谱的影响,探索鼠疫菌的潜在致病机制,为鼠疫疫苗研制提供新线索。方法通过双向电泳与质谱分析相结合的方法,比较鼠疫菌在26℃和37℃不同培养温度下,全菌蛋白表达谱差异,鉴定差异蛋白并对其功能进行初步分析。结果成功分离并鉴定了鼠疫菌201株和201△p CD1缺失突变株中的差异蛋白,其中26℃条件下鉴定到24个差异蛋白,37℃条件下鉴定到25个差异蛋白,内含7个由p CD1质粒编码的蛋白。结论通过比较蛋白质组学研究,发现大质粒p CD1缺失后,多种染色体编码蛋白的丰度发生了显著变化,暗示大质粒能调控染色体编码基因的表达。; 刘红胜郭景玉冯尔玲王效义王恒樑宋亚军朱力; 关键词：蛋白表达谱质谱分析法

福氏志贺菌Xv血清型聚合酶链反应鉴定方法的建立及应用被引量：3: 2014年; 目的建立福氏志贺菌Xv血清型聚合酶链反应(PCR)鉴定方法。方法根据福氏志贺菌Xv血清型O抗结构,针对O抗合成基因wzx、7;8群抗原决定基因gtr X和MASF IV-1抗原决定基因opt,建立PCR扩增鉴定方法。并应用该方法对139株福氏志贺菌临床分离株进行血清型检测。结果建立一种福氏志贺菌Xv血清型PCR鉴定方法,该体系在一个反应中包括3对引物,Xv血清型PCR扩增全部为阳性,可将Xv血清型与目前已知的其他18种福氏志贺菌血清型完全区分。非福氏志贺菌菌属及腹泻相关菌属菌株检测结果发现无任何PCR扩增产物。对139株不同血清型福氏志贺菌临床分离株的鉴定结果显示,该方法可将Xv血清型鉴定,与血清凝集结果一致。结论本研究建立的福氏志贺菌Xv血清型PCR鉴定方法具有快速、特异的优点,可以用于检测和监测。; 罗霞王建平孙强正; 关键词：福氏志贺菌聚合酶链反应

弗氏志贺菌ΔlysA突变株的构建及SILAC技术的应用尝试: 2012年; 目的构建弗氏2a志贺菌301株赖氨酸营养缺陷型突变株,为将细胞培养条件下稳定同位素标记(SILAC)技术应用于志贺菌蛋白质组学研究奠定基础。方法采用λ-Red重组系统对弗氏2a志贺菌301株lysA基因进行缺失,对野生株和突变株进行基本的表型测评和毒力评价,并利用双向电泳技术比较二者在全菌蛋白表达谱上的差异,最后将突变株分别在含有12C6-赖氨酸和13C6-赖氨酸的培养基中培养,根据双向电泳胶图取对应蛋白点进行胶内酶切及MALDI-TOF/TOF分析。结果成功构建了301 lysA基因缺失突变株,蛋白鉴定结果显示所取对应蛋白点为同一蛋白,在质谱图上轻重同位素峰位移为6 amu。结论本研究所构建的赖氨酸营养缺陷型突变株适合进行SILAC分析。; 李月玥刘先凯冯尔玲王恒樑陈福生朱力; 关键词：基因缺失双向电泳 SILAC

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