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封闭趋化因子受体的单链vMIP-Ⅱ的表达纯化及活性鉴定被引量：5: 2002年; 目的:研究病毒基因来源的人趋化因子同源物vMIP-Ⅱ的活性单链重组物在原核细胞的表达及制备方法,为大量获取单链vMIP-Ⅱ和其用于趋化因子受体封闭因子的临床应用打下基础。方法:采用双酶切定点克隆、渗透法破碎菌体,并用MBP亲和层析及重组肽段自脱离方式对表达产物进行纯化。纯化产物用SDS-PAGE蛋白印迹及抑制粘附反应等方法进行鉴定。结果:融合蛋白MBP-vMIP在原核细胞中高效分泌型表达,MBP-vMIP在体外自断裂分离出vMIP-Ⅱ,终产物单链vMIP-Ⅱ具有结合趋化因子受体CCR5活性。结论:vMIP-Ⅱ在原核细胞中的融合表达及终产物自脱离法可用于大量获取重组单链vMIP-Ⅱ。单链vMIP-Ⅱ对人趋化因子受体的结合活性有可能对与此受体有关的疾病如HIV感染、慢性炎症过程有作用。; 孙晗笑冯丽霞刘杰利奕成王玉林冯丽霞; 关键词：单链活性鉴定艾滋病毒

同源于hMIP-1α的vMIPα对人趋化因子受体的作用被引量：8: 2001年; HIV感染靶细胞须以人CD4+白细胞膜上的趋化因子受体为共受体, 与此共受体结合的趋化因子类似物可阻止HIV进入靶细胞. 实验目的是了解与人趋化因子单核细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)同源的人疱疹病毒8 K6基因编码产物vMIPα是否具有结合人趋化因子受体的功能. 首先用蛋白质同源分析及蛋白空间结构模拟等对比vMIPα与人趋化因子的结构异同, 用PCR扩增出K6片段, 克隆于哺乳类细胞表达载体, 转染于NIH3T3细胞, 得到条件培养液. 然后将K6基因在大肠杆菌中表达, 得表达产物vMIPα. 结果显示转染K6的NIH3T3细胞含有vMIPα单一分子量的mRNA, 此转染细胞的条件培养液及大肠杆菌表达纯化的vMIPα可与人趋化因子125I-hMIP-1α竞争结合外周血单核细胞的CCR5受体, 而且此条件培养液及vMIPα不引起外周血单核细胞对ICAM-1的黏附反应. 研究证实K6编码产物vMIPα与CCR5结合但不引起细胞黏附反应, 即封闭HIV的CCR5共受体, 提示有用于防治HIV/艾滋病的可能性.; 孙晗笑冯丽霞利奕成何文芳; 关键词：人类免疫缺陷病毒艾滋病

vMIP-II肽在大肠杆菌中的双辅助子高效表达被引量：1: 2002年; 目的 :构建病毒趋化因子 (vMIP -II)基因表达载体并在大肠杆菌中以辅助折叠和辅助阻遏方式高效表达vMIP -II重组肽 .方法 :用PCR法获得vMIP -II基因片断 ,将其插入表达载体pQE ,构建重组表达载体pEh -vMIP .表达载体、辅助折叠子和辅助阻遏子载体共转染大肠杆菌DH5α ,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆 .结果 :阳性重组子在大肠杆菌细胞中经IPTG诱导可高效表达vMIP -II重组肽 ,蛋白电泳分析可观察到一相对分子质量与理论值相符 (约 8× 10 3)的诱导表达条带 ,其表达量约占菌体总蛋白的 2 0 % .分析表明 ,vMIP -II重组肽主要以可溶性形式表达 .结论 :用双辅助技术在大肠杆菌中高效表达较小相对分子质量vMIP -II的成功 ,为进一步研究vMIP -II的功能及应用奠定基础 ,也为同类小分子。; 孙晗笑利奕成朱彦彦钟瑛冯丽霞; 关键词：基因表达大肠杆菌基因工程

生物医学发展大趋势中大型科研仪器的作用被引量：1: 2000年; 生命科学的重要组成部分——生物医学的发展趋势，论述了新型仪器设备与生物医学相互促进、不断发展的关系，提出了在生物医学发展过程中，新型仪器设备在生物医学等研究领域所起到的对研究方向的引导作用，以及对科学研究跨学科、多领域渗透、补充的桥梁作用；探讨了建立健全新型仪器设备管理使用办法的重要性。; 利奕成孙晗笑; 关键词：生物医学仪器生物技术设备管理

人疱疹病毒8编码的趋化因子vMIP-II在大肠杆菌的优化表达被引量：1: 2002年; 　目的:探讨优化vMIP-II/MBP融合蛋白表达载体pMal在原核细胞中的表达条件,并对其表达产物进行纯化。方法:通过接菌、诱导表达,实验了解诱导时不同的温度、诱导时间、IPTG浓度对蛋白表达量的影响,并进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶(SDS-PAGE)电泳分析。结果:发现该菌在含0 3mmol/LIPTG的TB培养基中,28℃诱导表达4h,可使诱导蛋白表达量占菌体蛋白总量的10%。结论:vMIP-Ⅱ/MBP的表达受温度条件影响较大,低温诱导时表达水平较高。从而为该工程菌的中试提供了实验基础。; 刘杰徐飞龙王玉林利奕成孙晗笑; 关键词：基因工程

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广东省自然科学基金(990470)