重庆市卫生局科研项目(05-2-189) 作品数:6 被引量:20 H指数:3 相关作者: 张华 张建华 漆洪波 卢敏 赵泽燕 更多>> 相关机构: 重庆医科大学附属第一医院 更多>> 发文基金: 重庆市自然科学基金 重庆市卫生局科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
2脱氧葡萄糖诱导葡萄糖调节蛋白78表达上调对宫内窘迫胎鼠脑神经元的保护作用 被引量:5 2008年 目的 探讨2-脱氧葡萄糖(2DG)诱导葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达上调对宫内窘迫胎鼠的脑神经元凋亡及内质网一线粒体联合作用的影响。方法 (1)建立胎鼠宫内窘迫模型后随机分为正常组(10只)、缺血缺氧再灌注组(40只,再灌注3h、6h、12h、24h)及治疗组(40只,宫内窘迫模型制备成功后即刻腹腔注射2DG100mg/kg体重,再灌注3h、6h、12h、24h)。(2)采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记(TUNEL)法检测胎鼠脑神经元凋亡情况及2DG对其的影响;蛋白印迹(westernblot)法检测GRP78、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)9、12及细胞色素C蛋白的表达水平,观察其与胎鼠脑神经元凋亡的关系及2DG对其的影响。结果 (1)正常组胎鼠阳性细胞数为(4.3±1.8)个/mm^2;GRP78、caspase-9、-12、细胞色素C蛋白表达水平分别为0.012±0.003、0.004±0.003、0.006±0.002、0.012±0.005。(2)缺血再灌注组胎鼠再灌注3h、6h、12h、24h的阳性细胞数分别为(43.6±11.4)、(64.4±9.3)、(74.2±12.1)及(97.3±8.9)个/mm^2,与正常组比较,差异有统计学意义(P〈0.05);GRP78蛋白表达水平分别为0.092±0.008、0.078±0.006、0.054±0.009、0.038±0.007,细胞色素C蛋白表达水平分别为0.040±0.006、0.076±0.009、0.108±0.005、0.089±0.008,caspase-9蛋白表达水平分别为0.042±0.003、0.086±0.007、0.142±0.006、0.112±0.009,caspase-12蛋白表达水平分别为0.076±0.006、0.113±0.010、0.125±0.005、0.057±0.008,均明显高于正常组(P〈0.05)。(3)治疗组再灌注3h、6h、12h、24h的阳性细胞数分别为(19.4±10.6)、(26.4±12.3)、(39.3±13.3)及(49.3±13.6)个/mm^2,与缺血再灌注组各时间点比较虽明显减少,但仍高于正常组(P〈0.05) 张华 卢敏 漆洪波 张建华关键词:脱氧葡萄糖 热休克蛋白质类 宫内窘迫胎鼠脑组织葡萄糖调节蛋白78及胱冬酶9,12表达的改变 被引量:3 2008年 目的:探讨内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78及凋亡因子胱冬酶(caspase)-9,12在宫内窘迫致胎鼠脑缺血损伤中的作用。方法:制备胎鼠宫内窘迫模型,随机分为正常组(10只胎鼠)、假手术组(50只胎鼠)、缺血再灌注组(50只胎鼠)。胎鼠脑组织行TUNEL染色,分析神经元凋亡情况;免疫组化法检测海马回CA1区GRP78及caspase-9,12蛋白的表达。结果:①宫内窘迫缺血再灌注可导致胎鼠脑神经元凋亡,且凋亡数量随再灌注时间延长而增加。②正常组及假手术组仅有GRP78,caspase-9,12蛋白微弱表达;缺血再灌注组GRP78于再灌注3 h达峰值,之后逐渐下降;caspase-12于再灌注3 h内表达量急剧上升,至12 h达高峰;caspase-9则于血流恢复3 h之后表达迅速增强,至12 h达峰值。结论:宫内窘迫致胎鼠缺血缺氧性脑损伤可能与GRP78表达升高启动内质网自稳调节系统有关;内质网caspase-12凋亡通路的启动可能是脑缺血损伤的又一机制。 赵泽燕 张建华 张华关键词:宫内窘迫 胎鼠 葡萄糖调节蛋白 内质网应激联合线粒体在宫内窘迫胎鼠脑神经细胞凋亡中的作用研究 被引量:3 2008年 目的:探讨内质网和线粒体在胎鼠缺血缺氧再灌注损伤脑神经细胞凋亡中的联合作用。方法:制备宫内窘迫模型,将其随机分为正常组、缺血再灌注组。以Western blot技术检测葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein 78,GRP78),半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-9、caspase-12,细胞色素-c(CytochromeC)蛋白表达水平。结果:缺血再灌注组各时间点GRP78蛋白表达水平均高于正常组,于再灌注3h时达高峰,随再灌注时间延长,蛋白表达逐渐减低。缺血再灌注组各时间点caspase-9、caspase-12蛋白表达水平均高于正常组,均于再灌注12h达高峰。缺血再灌注组胞浆cytoronC蛋白表达水平在各个时间点均高于正常组,并于再灌注12h达峰值。结论:内质网和线粒体在宫内窘迫胎鼠脑神经细胞凋亡的发生过程中具有协同作用。 卢敏 张华 漆洪波 张建华关键词:宫内窘迫 凋亡 内质网 线粒体 2-脱氧葡萄糖对内质网应激介导的宫内窘迫胎鼠脑损伤的保护机制的研究 被引量:5 2008年 目的探讨2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)对内质网应激介导的宫内窘迫胎鼠脑损伤的保护机制。方法制备胎鼠宫内窘迫模型;实验动物随机分为正常组、缺血再灌注组、假手术组及治疗组;取胎鼠脑组织行TUNEL染色,分析神经元凋亡情况;免疫组化法检测海马回CA1区GRP78及caspase-9,-12蛋白的表达;并观察2-DG对上数指标的影响。结果缺血再灌注组再灌注3hTUNEL阳性细胞数目明显增多;至再灌注24h阳性神经元数量达最大值。治疗组海马回CA1区典型TUNEL阳性神经元数量与缺血再灌注组各相应时间点比较明显减少(P<0.05)。缺血再灌注组GRP78,caspase-9,-12蛋白表达高于正常及假手术组。GRP78于再灌注3h达峰值,6h内无明显变化,以后随时间的延迟逐渐下降;caspase-12在3h内表达急剧上升,以后趋势变缓,至12h达高峰;caspase-9则于3h内无明显变化,之后迅速增加,至12h达到最大值。治疗组海马回CA1区神经元GRP78蛋白表达均显著高于缺血再灌注组,而神经元凋亡数量及caspase9,-12蛋白表达显著低于缺血再灌注组(P<0.01)。结论宫内窘迫所致的胎鼠脑组织缺血缺氧启动了内质网应激,内质网相关性死亡途经是胎鼠神经元损伤的又一机制;2-DG通过上调内质网分子伴侣GRP78的表达而对胎鼠缺血缺氧性脑损伤有明确的保护作用。 张华 赵泽燕 张建华关键词:缺血缺氧性脑损伤 2-脱氧葡萄糖 阴离子交换蛋白2在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中的差异表达 被引量:1 2010年 目的探讨阴离子交换蛋白2在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中的表达差异,以及该通道蛋白的表达改变与绒癌发生的关系。方法人正常绒毛滋养细胞的原代培养、纯化及鉴定;人绒毛膜癌JAR细胞株的培养。将原代纯化培养的人正常绒毛细胞设为正常组,人绒毛膜癌JAR细胞株设为绒癌组。以免疫组织化学法检测人正常绒毛滋养细胞和绒毛膜癌细胞株JAR细胞膜上AE2的表达。以RT-PCR技术检测人正常绒毛滋养细胞及绒癌JAR细胞中AE2mRNA的表达水平。结果在正常组中,原代培养的人正常绒毛滋养细胞上仅能从显微镜中肉眼观察到AE2的极低表达,以致摄影效果不佳。而在绒癌组中,绒癌JAR细胞膜上AE2的阳性细胞率为(91.59±12.10)%,远高于正常组。在正常人绒毛滋养细胞与人绒癌JAR细胞株中,均检测到AE2mRNA的表达。绒癌组AE2的OD值为(0.85±0.21);正常组AE2的OD值分别为(0.19±0.01)。绒癌组AE2的OD值明显高于正常组(P<0.05)。结论 AE2表达异常上调,滋养细胞内、外的水电解质平衡将被破坏,可能是导致绒癌发生的原因之一。 王思义 张建华 姜蓉 张华 王莉关键词:绒癌 内质网和线粒体在细胞凋亡中的联合作用 被引量:3 2006年 凋亡,即细胞程序性死亡,是由基因决定自动结束生命的过程。人类许多疾病都与其相关,如爱滋病、神经变性性疾病、骨髓发育不全综合征、酒精中毒性肝病、缺血性损伤,尤其宫内窘迫所致胎儿缺血缺氧性脑损伤。神经细胞的凋亡,更是目前关的焦点,凋亡程度与胎儿乃至新生儿的脑发育、智力发育密切相关。 卢敏 张华 漆洪波关键词:细胞凋亡 线粒体 内质网 缺血缺氧性脑损伤 神经变性性疾病 缺血性损伤