上海市自然科学基金(06ZR14064)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：贺华孙青芳卞留贯沈建康贺子建更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院台州市中心医院广州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金上海市青年科技启明星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- NF2基因及其编码蛋白质结构的研究进展被引量：2
- 2007年
- Ⅱ型神经纤维瘤病（neurofibromatosisⅡ，NF2）是一种常见的常染色体显性遗传性疾病。其临床表现为以双侧听神经受累为主的多种类型的肿瘤，如视神经胶质瘤、脑膜瘤、星型细胞瘤、脊膜瘤以及室管膜细胞瘤等。非常具有特征性的是，NF2中枢神经系统肿瘤多发生于包被结构，如神经鞘瘤（施万细胞瘤）和脑膜瘤。
- 贺华张晨冉卞留贯孙青芳
- 关键词：NF2基因MERLIN蛋白染色体突变
- NF_2基因对细胞增殖和细胞周期的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察Ⅱ型神经纤维瘤(neurofibromatosisⅡ,NF2)基因对细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用脂质体介导法将携带野生型NF2的真核表达载体导入大鼠神经鞘瘤RT4细胞,质粒转染成功后实验细胞分为pEGFP-N1组、pEGFP-NF2组和对照组(未转染质粒组),以Western blot分析目的基因的表达,并采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期。结果pEGFP-NF2组细胞merlin蛋白出现明显高表达。pEGFP-NF2组细胞生长的抑制率高达37.7%,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);而pEGFP-N1组细胞生长的抑制率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测显示NF2可以阻断细胞周期,使其处于G1-G0期。结论野生型NF2可抑制大鼠神经鞘瘤RT4细胞的增殖,阻断细胞周期,使其处于G1-G0期。
- 贺华彭彪卞留贯孙青芳沈建康林亦海贺子建
- 关键词：神经纤维瘤病2型基因肿瘤抑制细胞周期
- Ⅱ型神经纤维瘤基因突变型的构建及生物学功能研究被引量：3
- 2009年
- 目的构建Ⅱ型神经纤维瘤（NF2）抑癌基因546位点突变的真核表达载体，并在大鼠神经鞘瘤细胞（RT4）中诱导表达。方法用定点突变法将pEGFP—Nl—NF2第546位异亮氨酸（Ile）突变为蛋氨酸（Met）从而构建NF2突变子pEGFP—NI—NF2^△Ile546Met，经酶切和测序鉴定后用脂质体法将其转染至RT4细胞，同时设pEGFP—N1-NF2转染组做为对照，Western blot法检测细胞pEGFP—NF2蛋白的表达，MTT法检测转染后细胞的增殖情况。结果酶切测序证实定点突变成功，Westem blot结果显示RT4细胞能表达pEGFP—NF2蛋白，pEGFP-Nl-NF2△Ile546Met转染组RT4细胞抑制率低于pEGFP—N1-NF2转染组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成功构建了1个能够在RT4细胞中表达的单个点突变的NF2基因真核表达载体。
- 贺华赵建祥卢亦成孙青芳卞留贯沈建康
- 关键词：定点突变真核表达载体抑癌基因
- 抑癌基因NF2突变子真核表达载体的构建与表达
- 2008年
- 目的:分别构建抑癌基因NF2的42位和47位点突变的2种真核表达载体。并在大鼠神经鞘瘤细胞RT4-D6P2T中诱导表达。方法:用定点突变法分别将pcDNA3.1-NF2第42位赖氨酸(Lys)突变为脯氨酸(Pro).第47位苯丙氨酸(Phe)突变为亮氨酸(Leu)构建2种NF2突变子(pcDNA3.1-NF2^(ΔLyn42Pro)和pcDNA3.1-NF2^(ΔPhe47Leu),将3种NF2质粒用脂质体法分别转染RT4细胞.RT—PCR和Western印迹法分析NF2基因及蛋白表达,MTT法检测转染后RT4细胞的增殖情况。结果:测序证实定点突变成功。构建的重组真核表达载体pcDNA3.1-NF2^(ΔLys42Pro)和pcDNA3.1-NF2^(ΔPhe47Leu)均能表达相应的蛋白和mRNA.这2种NF2突变体对RT4细胞抑制率明显低于野生型NF2组。差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了2种能够在RT4中表达的单个点突变的NF2基因真核表达载体。
- 贺华彭彪卞留贯孙青芳沈建康贺子建林亦海
- 关键词：NF2点突变真核表达载体
- 野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因Ⅱ亚型真核表达载体的构建及其功能被引量：2
- 2007年
- 目的构建野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因(NF2)Ⅱ亚型的真核表达载体,观察其在人胚胎肾细胞293(HEK293)中的表达并检测其转染神经鞘瘤细胞(RT4)后的功能。方法以人胎脑cDNA文库中的NF2Ⅱ亚型基因为模板,应用聚合酶链反应技术扩增野生型NF2Ⅱ亚型基因,并定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1质粒中;经鉴定正确的重组质粒pEGFP-NF2Ⅱ亚型,用Lipofectamine 2000脂质体导入人胚胎肾细胞293,通过荧光显微镜和Western Blotting法观察基因表达水平;随后转染大鼠神经鞘瘤细胞,利用水溶性四氮唑法观察野生型NF2Ⅱ亚型基因对大鼠神经鞘瘤细胞增殖的影响。结果经序列分析证实,克隆的NF2Ⅱ亚型基因与Genebank中的序列完全一致。DNA琼脂糖凝胶电泳检测显示,经双酶切后的质粒pEGFP cDNA片段大小约为4700bp;NF2Ⅱ亚型基因cDNA片段大小为1770bp,NF2Ⅱ亚型基因的真核表达载体可瞬时转染人胚胎肾细胞293,通过荧光显微镜和Western Blotting方法得到证实;水溶性四氮唑法检测显示,转染pEGFP-NF2Ⅱ亚型并表达NF2Ⅱ亚型编码蛋白的293细胞与对照组293细胞的增殖指数相同。结论所构建的野生型NF2Ⅱ亚型基因真核表达载体可在人胚胎肾细胞293中表达,且不具有抑制肿瘤细胞增殖的特性。
- 贺子建卞留贯贺华孙青芳赵卫国沈建康
- 关键词：基因神经纤维瘤病2型转染
