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国家自然科学基金(30872543)
国家自然科学基金(30872543)
- 作品数:6 被引量:10H指数:2
- 相关作者:张凯伦刘成珪王刚李源程龙更多>>
- 相关机构:华中科技大学广州军区武汉总医院华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 人血管内皮细胞生长因子165真核表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响被引量:2
- 2011年
- 目的构建携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因的新型真核表达载体pIRES-EGFP-VEGF165,并通过转染人脐静脉内皮细胞株EA.hy926细胞,观察载体的体外表达和对血管内皮细胞增殖的影响。方法将VEGF165目的基因片段插入到真核表达载体pIRES-EGFP质粒中,按每孔加入质粒DNA1.2p,g介导体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞株EA.hy926细胞,通过荧光实时定量逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR,n=3)和Westernblot(n=5)分别检测mRNA和蛋白水平的表达,并通过MTT法(n=5)检测转染pIRES—EGFP—VEGFl65质粒对血管内皮细胞增殖的促进作用。结果成功构建pIRES—EGFP—VEGFl65真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞株EA.hy926细胞的转染效率约为(11.2±2.5)%;荧光实时定量RT—PCR和Westemblot证实转染pIRES—EGFP.VEGFl65质粒组细胞在mRNA和蛋白水平表达的VEGF165均高于对照组(P〈0.01),MTT法检测表明转染pIRES-EGFP—VEGF165质粒组细胞增殖速度较对照组明显增加(P〈0.01)。结论成功构建pIRES—EGFP—VEGFl65真核表达载体,并实现其在人脐静脉内皮细胞株EA.hy926细胞中的表达,而且证实可以促进血管内皮细胞的增殖。
- 王刚张凯伦蒋雄刚刘成珪
- 关键词:血管内皮细胞生长因子真核表达载体细胞增殖内皮化
- 携带质粒的PLGA纳米粒-超声微泡复合体的构建及细胞相容性研究
- 2013年
- 目的构建携带tPA基因质粒的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒-超声微泡复合体,检测其理化性质、体外缓释方式、细胞相容性。方法应用双次乳化法制备携有tPA基因质粒的PLGA纳米粒;应用薄膜水化超声法制备阳离子超声微泡;两者通过静电吸附作用,形成质粒-纳米粒-超声微泡复合体(plasmid encapsulated nanoparticle-mi-crobubble complex,PENMC)。检测PLGA纳米粒的质粒载量,该复合体PENMC的质粒载量;检测PLGA纳米粒及复合体体外缓释质粒的情况;CCK-8法检测纳米粒及复合体PENMC的细胞毒性。结果检测携带质粒的纳米粒粒径为(217.2±2.2)nm,zeta电位为(-15.24±0.83)mV。微泡平均大小为(3.2±1.5)μm,zeta电位为(13.66±2.05)mV。微泡浓度为(4.3±1.1)×108/mL。PENMC平均直径为(4.6±1.7)μm,zeta电位为(2.23±1.45)mV。浓度为(3.0±1.3)×108/mL。1mg PLGA纳米粒载有质粒(42.3±2.1)μg。1mL PENMC中带有质粒(20.5±2.7)μg。PLGA纳米粒及复合体PENMC前7d累计释放量均为(57±3)%。起始段短时间内快速释放,后呈现稳定、缓慢释放。体外细胞毒实验证实PLGA纳米粒及复合体PENMC均未见明显细胞毒性效应。结论所构建的纳米粒-超声微泡复合体显示出较好的缓释效果,较低的细胞毒性,为后续将其应用于基因治疗奠定了实验基础。
- 程龙刘成珪张凯伦胡志伟李源
- 关键词:纳米粒超声微泡造影剂组织型纤溶酶原激活因子非病毒载体
- VEGF同轴静电纺丝膜的体外血液相容性及生物学活性研究
- 2012年
- 目的评价VEGF同轴静电纺丝膜的物理特性、体外血液相容性和生物学活性,探求其作为人工心血管替代材料的可行性。方法通过静电纺丝技术制备VEGF同轴静电纺丝膜,然后进行体外溶血实验、动态凝血实验、凝血时间测定、血小板粘附实验、细胞毒性实验、体外细胞粘附实验对其血液相容性和生物学活性进行评价,并与涤纶(Dacron)作平行对照。结果 VEGF同轴静电纺丝膜的血液相容性较高,经统计学分析与Dacron之间差异无统计学意义(P>0.05)。VEGF同轴静电纺丝膜的体外细胞粘附实验中,经细胞计数Dacron为(5.34±0.94)×103,PCL-PEG静电纺丝膜为(7.82±0.85)×104,PCL-PEG/BSA同轴静电纺丝膜为(8.04±0.84)×104,PCL-PEG/BSA-VEGF同轴静电纺丝膜则为(1.39±0.76)×105,经统计学分析PCL-PEG静电纺丝膜和PCL-PEG/BSA同轴静电纺丝膜之间差异无统计学意义(P>0.05),PCL-PEG静电纺丝膜和PCL-PEG/BSA同轴静电纺丝膜与Dacron之间差异有统计学意义(P<0.05),而PCL-PEG/BSA-VEGF同轴静电纺丝膜与PCL-PEG静电纺丝膜和PCL-PEG/BSA同轴静电纺丝膜之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF同轴静电纺丝膜血液相容性较高,且更易于与内皮细胞粘附,显示其成为人工心血管替代材料的前景。
- 王永生张凯伦程龙李源周成刘成珪
- 关键词:血液相容性细胞毒性实验生物学活性
- 人脐静脉内皮细胞的研究和应用被引量:4
- 2011年
- 血管内皮细胞在人体多种生理和病理过程中发挥重要作用,一直以来都是研究的热点。其中使用最广泛的当属人脐静脉内皮细胞,然而就其各种亚系细胞有何特点和优劣,国内尚未见报道。现通过总结原代人脐静脉内皮细胞、延长寿命的脐静脉内皮细胞系、永生化的脐静脉内皮细胞系等在医学研究领域的应用和进展,对不同种类之间优势和局限性进行比较,从而更好地指导实际运用。
- 王刚张凯伦
- 关键词:人脐静脉内皮细胞原代细胞细胞系
- VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达被引量:2
- 2011年
- 目的构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况。方法将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达。结果成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P<0.01)。结论成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础。
- 王刚刘成硅张晓明张凯伦蒋雄刚
- 关键词:真核表达载体体外表达
- 同轴静电纺丝法制备血管内皮生长因子纳米纤维缓释载体被引量:2
- 2013年
- 目的应用同轴静电纺丝的方法制备以聚己内酯(PCL)为壳层,血管内皮生长因子(VEGF)和牛血清蛋白(BSA)为芯的纳米纤维缓释载体,观察其体外缓释VEGF的特性,并检测释放VEGF的活性。方法观察15—18kV电压下制备出来的VEGF纳米纤维缓释载体的形貌结构特征,分别在第1、3、7、15、30天检测BSA和VEGF的释放量分别为BSA/PCL(17%、34%、38%、45%、56%),BSA/PCL.聚乙二醇(PEG)(30%、45%、80%、89%、92%),VEGF(5%、10%、20%、60%、90%),绘制时间.累积释放量曲线(%),检测释放VEGF的活性,并与新鲜的VEGF组和无VEGF组作为平行对照。结果15、16、17、18kV制备出来的同轴静电纺丝直径为分别为(282.00±43.57)、(199.13±32.87)、(182.00±27.74)、(159.00±36.33)nm。VEGF在30d内逐渐释放,累积释放量98%,释放出来YEGF的生物学活性与新鲜的VEGF之间差异无统计学意义(P〉0.05),与无VEGF之间差异有统计学意义(P〈0.05)。结论运用同轴静电纺丝技术成功制备了以PCL为壳层,VEGF和BSA为芯的纳米纤维缓释载体,通过调整电压可以控制纳米纤维的直径,该载体还能够保持VEGF的生物学活性并持续释放,同时可以通过加入PEG来调节其释放量。
- 刘成珪王永生李源程龙叶巍张凯伦
- 关键词:药物缓释血管内皮生长因子纳米纤维