国家科技重大专项(2012ZX10002012-010)
- 作品数：7 被引量：32H指数：4
- 相关作者：殷正丰孙斌张妤施乐华钱海华更多>>
- 相关机构：第二军医大学苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体制备及其初步应用被引量：2
- 2013年
- 目的制备人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的小鼠单克隆抗体,并应用该抗体检测ASGPR在细胞系和组织中的表达。方法对ASGPR H1大亚基进行序列分析,选取ASGPR1全长序列制备免疫原。通过RT-PCR合成ASGPR1cDNA,构建ASGPR1表达重组载体,在E.coli BL21中表达后纯化,获得目的抗原。应用传统融合杂交瘤技术制备小鼠单克隆抗体,常规检测单抗亚类和效价,竞争抑制实验鉴定单抗特异性。用流式细胞术和免疫组织化学法分别检测ASGPR在多种肝源性与非肝源性细胞系以及多种肝组织中的表达。结果制备的单克隆抗体亚型为IgG1,效价达112 800。竞争抑制实验结果显示该单抗具有很好的ASGPR结合特异性,而且识别的肽段位于ASGPR胞外段。流式细胞术检测结果显示,ASGPR不同程度地表达于肝源性细胞系,但不表达于非肝源性细胞系。免疫组织化学检测结果显示,ASGPR专一性表达于正常肝组织和肝癌组织,在肝癌组织的表达与分化程度有关,高分化肝癌中的阳性率高于低分化肝癌(75.0%vs 28.6%,P<0.05)。结论成功制备高特异性人ASGPR小鼠单克隆抗体,适用于用流式细胞术和免疫组织化学法检测ASGPR表达,可用于临床病理鉴定原发性肝癌与转移性肝癌。
- 李军陈磊孙斌张妤钱海华殷正丰
- 关键词：去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体肝肿瘤流式细胞术免疫组织化学
- 循环肝癌细胞的研究进展和技术问题被引量：1
- 2013年
- 复发转移是导致绝大多数肝癌患者术后死亡的主要原因。现有的研究提示,从原发灶或转移灶释放进入血液的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是肝癌根治性术后复发转移的一个主要根源。在过去的10多年中,尽管CTCs检测技术及其临床意义的研究取得了长足进步,但由于缺乏可使用的肝癌CTCs检测方法,目前人们对于肝癌CTCs临床重要性的认识远不及其他主要类型的肿瘤。可喜的是,近年来关于肝癌CTCs检测方法及其临床意义的研究报道逐渐增多,并且得到一些有趣的结果。本文着重总结已报道的肝癌CTCs检测方法,综述肝癌CTCs作为肝癌复发转移来源的现有实验证据以及其作为肝癌预后标志物的现有研究结果,并讨论肝癌CTCs临床转化应用需要解决的技术问题。
- 张妤杨霞殷正丰
- 关键词：肝细胞癌循环肿瘤细胞预后
- 肝癌细胞的上皮间质转化被引量：4
- 2012年
- 1982年Greenberg和Hay……[1]。发现，晶状体上皮细胞可在胶原凝胶中转化为间质细胞样形态，从而提出了上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）的概念。在2003年第一届国际EMT会议上，EMT被正式定义为“上皮细胞经历多重生物化学改变以获得间充质细胞表型的过程”。
- 孙斌殷正丰
- 关键词：肝细胞癌上皮间质转化
- 循环肿瘤细胞存活调节机制及其靶向治疗策略的研究进展被引量：4
- 2017年
- 循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是指因自发或诊疗操作过程中进入外周血循环的肿瘤细胞,被普遍认为是肿瘤复发与转移的根源。近年来研究发现,CTCs可以通过克服血流剪切力的机械损伤、抵抗失巢凋亡以及逃避免疫杀伤,甚至对系统的化疗产生耐药等机制促进其在外周血中存活下来。本文从CTCs自身生物学特性及血液微环境两个方面就CTCs形成及迁移过程中涉及的存活机制进行综述,并探讨了针对CTCs存活机制的肿瘤治疗新策略的研究进展。
- 王文超施乐华殷正丰
- 关键词：肿瘤逃逸分子靶向治疗
- 上皮间质转化与循环肿瘤细胞被引量：15
- 2013年
- 目前认为,上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)程序性激活可使肿瘤细胞获得异常的活动能力,从而诱导循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)产生并存活,经过血液循环传播后,发生间质上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET),最终形成继发性转移灶。鉴于EMT是诱导CTCs并促进肿瘤转移的一个关键因素,CTCs-EMT在预后诊断和靶向治疗方面正受到越来越多的关注。本文对有关EMT促进CTCs产生和生存,发生EMT的CTCs又通过MET促进CTCs形成肿瘤转移灶的研究进展进行综述,并讨论了检测CTCs-EMT表型的临床应用问题。
- 刘慧颖殷正丰
- 关键词：肿瘤循环细胞细胞转化肿瘤间质细胞上皮细胞上皮间质转化
- 肿瘤相关肝星状细胞促进肝癌细胞上皮间质转化和迁移被引量：2
- 2013年
- 目的建立人肝癌组织中肿瘤相关肝星状细胞(tHSCs)分离、培养方法,探讨tHSCs对肝癌细胞生物学行为的影响。方法采用密度梯度离心法从新鲜切除的人肝癌组织样本中分离tHSCs锥虫蓝染色检测细胞活力,细胞免疫荧光鉴定活化tHSCs表达α-平滑肌肌动蛋白的特征,光镜观察培养的tHSCs形态学变化;tHSCs无血清培养后,收集条件培养液,分别与肝癌细胞系QGY-7701、BEL-7402、SMMC-7721共培养,并以肝星状细胞系LX-2做对照,采用MTT法、细胞划痕实验、蛋白质印迹等方法检测肝癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)相关指标的表达。结果从肝癌组织中分离的tHSCs活率在95%以上,纯度接近100%,在体外可进行传代培养与冻存。tHSCs能诱导3个受试肝癌细胞系产生典型的EMT样形态学变化及其分子标记物表达改变,表现为上皮标记物E-钙黏蛋白表达减少(P<0.05),间质标记物波形蛋白表达增加(P<0.05)。与此同时,tHSCs能促进培养的3个肝癌细胞系增殖和迁移。结论从人肝癌组织中分离的原代tHSCs活力和纯度高,可用于tHSCs的生物学功能实验研究。tHSCs在诱导肝癌细胞产生EMT样改变的同时,体外促进肝癌细胞的增殖和迁移。
- 孙斌陈磊刘振宇钱海华施乐华殷正丰
- 关键词：肝肿瘤肝星状细胞上皮间质转化细胞运动
- 靶向循环肿瘤细胞——防治肝癌术后复发转移的新策略被引量：4
- 2014年
- 肝细胞癌（以下简称肝癌）是我国最常见的恶性肿瘤之一，大多数发生于乙型肝炎后肝硬化的基础上。外科切除是目前治疗肝癌的主要手段，但术后复发率一直居高不下，严重影响着患者的远期疗效。肝癌复发转移是一个多因素参与、多阶段发展、极其复杂的动态生物学过程，
- 时志龙张妤殷正丰
- 关键词：循环肿瘤细胞肿瘤转移
