国家自然科学基金(81173441)
- 作品数：12 被引量：75H指数：6
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- 补肾活血中药动员大鼠骨髓EPC修复内皮功能的实验研究被引量：16
- 2014年
- 目的探讨补肾活血中药对心肌梗死(MI)模型大鼠外周血、缺血心肌组织内皮祖细胞(EPC)数量及血管内皮功能的影响。方法结扎法建立大鼠MI模型,随机分为补肾活血中药高剂量组(H组)、低剂量组(L组)和模型组(M组),正常大鼠为空白组(K组),每组10只。H组、L组以补肾活血中药灌胃,M组、K组正常喂养,4周后外周血、缺血心肌组织EPC培养,7d后收集贴壁细胞运用流式细胞仪鉴定CD34/CD133表型,ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF),硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)。结果H组、L组外周血和缺血心肌表达CD34/CD133阳性率、EPC数量均高于M组、K组(P<0.05或P<0.01);H组、L组外周血和缺血心肌NO含量、VEGF表达均高于M组、K组(P<0.05或P<0.01)。结论补肾活血中药具有动员骨髓EPC进入血液循环、修复血管内皮损伤的作用。
- 张彤刘元峰宋宪波苏文革吴波戴国华
- 关键词：内皮祖细胞补肾活血中药
- 体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立被引量：2
- 2014年
- 目的建立大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)缺氧模型。方法植块法培养CMECs,免疫细胞化学鉴定微血管内皮细胞特异性标志。将原代培养的CMECs在1%O2-94%N2-5%CO2低氧气体环境中培养24h制备低氧损伤模型(L组),以无血清常氧培养作为对照组(N组)。倒置相差显微镜观察缺氧前后细胞形态变化,MTT法测定细胞活力,Annexin V-FITC和PI双标记法测定细胞凋亡率。结果植块法培养的大鼠CMECs具备典型微血管内皮细胞特征;Ⅷ因子、CD31相关抗原免疫染色鉴定均阳性。缺氧前后细胞形态无明显变化;与N组比较,L组细胞活力明显增加(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05),其中早期凋亡降低最明显(P<0.01)。结论本方法可以成功建立简便、易行的CMECs细胞缺氧模型。
- 马培泽宋宪波刘宁姜月华戴国华
- 关键词：心肌微血管内皮细胞缺氧模型细胞活力
- 微小RNA-223-3p通过调节Rps6kb1/HIF-1α信号通路抑制缺血心肌微血管内皮细胞血管新生被引量：14
- 2014年
- 目的 筛选大鼠缺血心肌微血管内皮细胞（myocardial microvascular endothelial cells,CMEC）血管新生过程中的核心微小RNA（microRNA,miRNA）,并探讨其调控机制.方法 健康雄性SD大鼠,6周龄,SPF级.结扎法建立大鼠心肌缺血模型,植块法培养CMEC.免疫细胞化学法鉴定CMEC.大鼠缺血CMEC作为缺血组,正常大鼠CMEC作为正常组,观察缺血CMEC血管新生的生物学特征,确定其血管新生过程中迁移、增殖和成管的窗口期.miRNA芯片检测miRNA的动态表达变化,筛选差异表达显著的miRNA并应用实时聚合酶链反应验证,拟定出缺血CMEC血管新生过程中核心miRNA.生物信息学方法预测核心miRNA靶基因,并用实时聚合酶链反应验证.同时,蛋白印迹法检测靶基因及血管新生相关基因p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、丝氨酸-苏氨酸激酶（Akt）、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达水平.结果 培养的CMEC具备典型微血管内皮细胞特征,第Ⅷ因子、血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）相关抗原免疫染色鉴定均为阳性.正常组和缺血组迁移窗口期均为第1天、成管窗口期均为第2天,而他们的增殖窗口期分别为第3天和第6天.根据表达量差异的显著性以及与血管生成的关系,最终确定miRNA-223-3p为缺血CMEC血管新生的核心miRNA,实时聚合酶链反应验证miRNA-223-3p表达与芯片结果一致.生物信息学方法预测Rps6kb1为miRNA-223-3p的靶基因,Pathway分析Rps6kb1能够参与低氧诱导因子-1α（HIF-1α）信号通路调控血管生成.缺血CMEC的迁移期和增殖期,Rps6kb1/HIF-1 α信号通路下游分子VEGF、p38MAPK、PI3K、Akt的基因和蛋白表达均明显下调.结论 miRNA-223-3p是缺血CMEC血管新生的核心miRNA,miRNA-223-3p可通过调节Rps6kb1/HIF-1α信号通路抑制缺血CMEC血管新生的迁移和增殖过程,从而降低血管新生能力.
- 戴国华宋宪波马培泽刘宁姚静
- 关键词：微RNAS内皮细胞新生血管化病理性
- 益气活血中药对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞血管新生功能的影响被引量：8
- 2015年
- 目的观察益气活血中药对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)增殖、迁移、成管功能的干预作用,及其对细胞增殖相关蛋白激酶(ERK)和细胞死亡相关分子(p53)mRNA表达的影响。方法制备芪参益气滴丸高剂量(QG组)、中剂量(QZ组)、低剂量(QD组)大鼠含药血清,分别与大鼠缺血CMECs共孵育,同时制备空白血清,分别与心肌缺血模型大鼠(MX组)、正常大鼠(ZC组)来源的原代CMECs共孵育;噻唑蓝比色法检测细胞增殖情况,细胞划痕法检测细胞迁移能力,倒置相差显微镜观察管腔结构的形成情况;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测ERK和p53mRNA的表达情况。结果增殖窗口期QZ组、QD组均为第2天,而QG组、ZC组均为第3天,MX组为第6天;QG组、QZ组、QD组增殖率、迁移率及成管率均显著高于MX组,而QD组增高最明显(P<0.01);与MX组比较,QG组、QZ组、QD组ERK mRNA表达增加,p53 mRNA表达降低(P<0.05)。结论益气活血中药可促进大鼠缺血CMECs的血管新生功能,但其作用与药物剂量并非成正相关,可能与不同药物浓度干预导致ERK及p53的差异表达有关。
- 姚静戴国华刘宁宋宪波马培泽
- 关键词：益气活血血管新生ERK
- 补肾活血中药激活MMP-9信号通路动员大鼠骨髓EPCs的分子机制研究被引量：15
- 2013年
- 目的探讨补肾活血中药对心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型大鼠骨髓、外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量及骨髓基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)信号通路的影响。方法结扎法建立大鼠MI模型,30只造模成功大鼠随机分为补肾活血中药高剂量组、补肾活血中药低剂量组和模型组,每组10只,另取10只正常大鼠为空白组。补肾活血中药高、低剂量组分别用补肾活血中药按3g/kg、1.5g/kg加生理盐水4mL灌胃,每天1次。空白组及模型组每天单用生理盐水4mL灌胃1次。4周后骨髓、外周血EPC培养,7天后收集贴壁细胞运用流式细胞仪鉴定CD34/CD133表型,Western blot法检测MMP-9和水溶性Kit配体(solouble Kit ligand,sKitL),ELISA法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)。结果补肾活血中药高、低剂量组骨髓和外周血表达CD34/CD133阳性率、EPC数量均高于模型组(P<0.05,P<0.01);且两组骨髓和外周血VEGF、SDF-1α、MMP-9和sKitL表达均高于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论补肾活血中药能够激活MMP-9信号通路,增加其上游和下游信号表达水平,动员骨髓EPC进入血液循环。
- 戴国华张彤吴波焦华琛刘元峰宋宪波
- 关键词：内皮祖细胞补肾活血中药
- mir-223-3p在急性心肌梗死患者血浆中的表达特征及临床意义被引量：1
- 2014年
- 目的:观察急性心肌梗死患者血浆mir-223-3p的表达情况,分析血浆mir-223-3p用于急性心肌梗死(AcuteMyoeardialInfraetions,AMI)临床诊断的可能性。方法选择AMI患者29例,陈旧性心肌梗死患者31例,健康志愿者10例,入院后1h、24h、2d、7d分别抽取肘静脉血。real-timePCR检测mir-223-3p表达水平,改良szasz法检测CK-MB,免疫印记法检测cTnI。结果 AMI患者血浆mir-223-3p表达水平较陈旧性心肌梗死患者及健康组均显著升高(P<0.01),陈旧性心肌梗死患者与健康组之间比较无统计学差异(P>0.05)。 AMI患者入院1h血浆mir-223-3p表达水平已达到峰值,24h后明显降低,第2d基本进入平台期,并持续至第7d,但仍明显高于陈旧性心肌梗死患者与健康组入院时的水平(P<0.01)。mir-223-3p表达水平与cTnI和CK-MB均呈正相关,相关系数分别为(r越0.848,=0.000)、(r越0.804,=0.000)。结论 mir-223-3p在AMI早期表达水平明显升高,而且拥有较cTnI和CK-MB更早的时间窗,提示mir-223-3p对AMI早期诊断具有一定价值。
- 戴国华马培泽宋宪波刘宁姚静
- 关键词：急性心肌梗死CK-MBCTNI
- 大鼠缺血心肌微血管内皮细胞血管新生的生物学特征被引量：7
- 2014年
- [目的]观察大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)血管新生的生物学特征。[方法]采用结扎法建立大鼠心肌缺血模型,植块法培养CMECs,倒置相差显微镜观察细胞形态学特征,免疫细胞化学法检测CMECs特异性抗原。实验分组将大鼠缺血CMECs作为缺血组(I组),正常大鼠CMECs作为对照组(N组),采用噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线并检测细胞增殖能力,划痕法测定细胞迁移能力,倒置相差显微镜观察管腔结构形成情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测细胞增殖相关蛋白激酶(ERK)和细胞死亡相关分子(p53)mRNA的表达情况。[结果]大鼠CMECs具备典型微血管内皮细胞特征,Ⅷ因子、CD31相关抗原免疫染色鉴定均为阳性。N组和I组迁移窗口期均为第1天,成管窗口期均为第2天,N组和I组的增殖窗口期分别为第3天、第6天。两组比较,I组迁移率、增殖率和成管率均低于N组,以迁移率降低最为明显(P<0.01)。I组ERK、p53 mRNA表达均高于N组(P<0.05)。[结论]缺血CMECs的血管新生能力明显降低,血管新生增殖窗口期改变,可能与ERK和p53mRNA表达的变化有关,为进一步研究其基因组学及药物干预提供实验依据。
- 戴国华宋宪波马培泽刘宁姚静
- 关键词：缺血心肌微血管内皮细胞血管新生生物学特征
- 益气活血中药对急性心肌梗死病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响被引量：7
- 2016年
- 目的观察益气活血中药对急性心肌梗死(AMI)病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响。方法将AMI病人30例随机分为治疗组和对照组各15例,治疗组予常规西药联合益气活血中药治疗,对照组予常规西药治疗,疗程2周。健康志愿者10名为健康组。健康志愿者于入组时,AMI病人于入院后1 h、第3天、第7天、第14天分别抽取肘静脉血,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测miR-2 2 3-3 p、miR-1 3 2-5 p的表达情况。结果AMI病人入院早期miR-2 2 3-3 p出现高表达、miR-132-5p出现低表达,与健康志愿者比较差异有统计学意义(P<0.01);与miR-132-5p及肌钙蛋白I(c Tn I)比较,miR-223-3p显示出高表达、高敏感性的特点。与对照组比较,治疗组治疗后病人血浆miR-223-3p表达降低、miR-132-5p表达上调更显著,差异有统计学意义(P<0.01);c Tn I于24 h上升和第3天下降更为明显(P<0.05)。结论益气活血中药联合常规西药治疗AMI较单纯常规西药治疗临床疗效较好,可能与调节miR-223-3p、miR-132-5p的表达有关,miR-223-3p有望成为新的AMI早期诊断标志物。
- 朱敬伟戴国华姚静刘宁宋宪波马培泽
- 关键词：急性心肌梗死益气活血中药肌钙蛋白I胸痹
- 心肌梗死的microRNAs组学及中医药干预的研究概况
- 2014年
- 心肌梗死是人类主要死亡原因之一,易并发心律失常、心肌重构、心力衰竭等,其发病率和致死率逐年升高。microRNAs组学属于基因组学分支,是目前生命科学领域研究的热点。研究发现其在心肌梗死的病理生理过程中发挥重要作用,并调控心梗后血管生成、心律失常、心肌重构等多个过程,为心肌梗死的研究提供了新的思路和方法。中医药通过调控miRNAs表达干预心肌梗死已取得一定进展,如促进心梗后血管生成、抑制心梗后心律失常、延缓心梗后心室重构等。
- 刘宁姚静戴国华
- 关键词：心肌梗死中医药
- 大鼠缺血心肌微血管内皮细胞的培养和鉴定被引量：6
- 2013年
- 目的 建立大鼠缺血心肌微血管内皮细胞（Cardiac Microvascular Endothelial Cells,CMECs）培养模型,为进一步研究其生物学特征提供实验基础.方法选取220~280 g成年雄性SD大鼠,结扎法建立心肌缺血模型,植块法培养结扎后24 h、3 d、7 d的心肌缺血模型大鼠CMECs,倒置相差显微镜观察培养细胞的形态学特征,观察不同时间点缺血模型CMECs生长状况,免疫细胞化学方法显示CMECs特异性抗原.结果 镜下观察部分CMECs刚游离出组织块时呈星形或多边形,当细胞生长至亚融合状态呈短梭形并呈铺路石样,部分区域可见管腔样或血管网络状结构,具备典型微血管内皮细胞特征;心肌缺血7 d时,缺血心肌组织CMECs密度最大;免疫细胞化学染色鉴定,Ⅷ因子、CD31相关抗原均为阳性,阳性率分别为（95.1±1.2）%、（95.0±1.6）%.结论 本方法可获得纯度高、结构和功能良好的缺血CMECs,为缺血性心血管疾病研究奠定基础.
- 宋宪波马培泽高伟徐向青戴国华
- 关键词：缺血心肌微血管内皮细胞
