国家自然科学基金(30872586)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：第三军医大学大坪医院解放军477医院更多>>
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- 人PSCA基因真核载体的构建与表达被引量：2
- 2009年
- 目的克隆人PSCA(prostate stem cell antigen)分子的cDNA,构建PSCA基因的真核表达载体,并在体外进行表达和鉴定。方法从PSCA阳性细胞系LNCaP中提取总RNA,逆转录为cDNA。根据编码人PSCA的基因序列设计引物,以cDNA为模板,采用PCR技术扩增PSCA基因,将该基因插入到pcDNA3.1(+)真核载体,构建pcDNA3.1(+)-PSCA表达质粒。经限制性酶切鉴定和DNA序列测定结果证实后,将重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA转染Hela细胞,检测其体外瞬时表达。结果测序证实得到人PSCA基因序列,序列分析显示没有发生无义突变。RT-PCR和免疫细胞化学分析结果分别表明转染细胞有目的基因和分子的表达。结论成功克隆人PSCA基因,并在真核细胞中获得表达,为进一步构建基于PSCA的肿瘤疫苗奠定了基础。
- 张克勤聂志林梁培禾孙中义李彦锋靳凤烁
- 关键词：PSCA前列腺癌DNA疫苗
- 前列腺癌的免疫治疗进展被引量：3
- 2013年
- 前列腺癌是严重威胁中老年男性健康的恶性肿瘤之一，死亡率高，仅次于肺癌，位居第2。50多年以来，临床治疗前列腺癌患者一直采用雄激素阻断治疗，然而，
- 刘勇张克勤
- 关键词：前列腺癌免疫治疗
- 基于PSCA的肽-DNA复合疫苗的构建及其免疫学效应的检测被引量：3
- 2011年
- 目的设计、制备和鉴定PLL-PSCA14-22/-pcDNA3.1(+)-PSCA复合疫苗及其免疫学效应的检测。方法将带正电荷的多聚赖氨酸(PLL)通过化学方法与PSCA的一个CTL表位肽PSCA14-22偶联,将上述阳离子多肽PLL-PSCA14-22与带负电荷的编码PSCA的重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA利用正负电荷相吸作用制备靶向PSCA的肽-DNA复合疫苗;通过DNA阻滞实验和DNaseⅠ保护实验鉴定制备的疫苗;将制备成功的复合疫苗体外转染Hela细胞,通过RT-PCR检测该疫苗的转染效率;并进一步通过LDH释放实验检测该疫苗对PSCA阳性的前列腺癌细胞系LNCaP的特异性杀伤效应。结果当PLL-PSCA14-22多肽与pcDNA3.1(+)-PSCA重组质粒正负电荷比≥2时,DNA电泳条带完全消失,即重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA完全被PLL-PSCA14-22多肽所包裹,复合疫苗可有效抵抗DNaseⅠ的消化作用。RT-PCR结果表明该复合疫苗在体外可有效转染Hela细胞,且当正负电荷比为64时出现较高的转染效率,并且能够有效激发CTL应答杀伤LNCaP细胞。结论成功构建的靶向PSCA的多肽-DNA复合疫苗可有效转染真核细胞,诱导CTL应答杀伤前列腺癌细胞,该研究为进一步体内动物实验探讨该疫苗对前列腺癌的免疫治疗效应奠定了基础。
- 刘勇靳凤烁张克勤
- 关键词：PSCA前列腺癌
