上海市自然科学基金(06ZR14092)
- 作品数：4 被引量：18H指数：2
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- 相关机构：同济大学附属肺科医院宁夏大学上海市肺科医院更多>>
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- 筛选结核分枝杆菌CFP-10抗原适体的研究被引量：5
- 2008年
- 目的建立SELEX技术筛选结核分枝杆菌CFP-10抗原适体的方法,并获得CFP-10的高亲和性适体。方法体外构建长度为78个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,以微孔板为筛选介质,采用SELEX技术筛选获得CFP-10的适体库。将适体库克隆、测序,用DNAMAN软件对其结构进行分析,利用酶联寡核苷酸吸附试验(enzyme-linkedoligonucleotide sorbent assay,ELOSA)测定亲和力。结果构建的ssDNA文库经过14轮筛选与CFP-10亲和力从0.273提高到1.265;克隆子测序,大多数长度与预期值相符。二级结构显示,口袋和茎环结构可能是适体与CFP-10结合的结构基础。结论成功建立了SELEX筛选技术,并初步获得了CFP-10的高亲和性适体。
- 马占忠王玉炯秦莲花丁元生谢琴胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌CFP-10SELEX适体
- 结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的筛选与亲和性分析被引量：11
- 2007年
- 目的通过建立指数级富集配体的系统进化技术(SELEX),筛选结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的方法,获得ESAT-6的高亲和性适体,为结核病诊断和治疗试剂的开发奠定基础。方法体外构建一个长度为78个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,以微孔板为筛选介质,SELEX技术筛选获得ESAT-6的适体库,将适体库克隆、测序,用DNAMAN软件对其结构进行分析,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定亲和力,找出高亲和性适体。结果经过13轮筛选,ssDNA文库与ESAT-6亲和力从0.257提高到1.163,且12轮后A值趋于平衡,克隆、测序获得ESAT-6的高亲和性适体,其中适体A10亲和力最高,达到1.515,且与CFP10-ESAT6融合蛋白无交叉反应。二级结构显示,口袋和茎环结构可能是适体与ESAT-6结合的结构基础。结论成功建立了SELEX筛选技术,并初步获得了ESAT-6的高亲和性适体。
- 马占忠秦莲花王玉炯胡忠义
- 关键词：ESAT-6适体
- 筛选结核分枝杆菌CFP10-ESAT6蛋白适配子的研究被引量：1
- 2011年
- 目的通过SELEX技术筛选出结核分枝杆菌CFP10-ESAT6蛋白的高亲和性适配子。方法构建一个78碱基的ssDNA文库,利用SELEX技术筛选获得CFP10-ESAT6的适配子。用DNAMAN软件对其结构进行分析,酶联寡核苷酸吸附试验(ELOSA)测定亲和力。结果经过15轮筛选,ssDNA文库与CFP10-ESAT6亲和力从0.305提高到1.356。二级结构显示,口袋和茎环结构可能是适配子与CFP10-ESAT6结合的结构基础。结论初步获得了CFP10-ESAT6的高亲和性适配子,为开发结核病诊断和治疗试剂奠定了基础。
- 马占忠何凤屏秦莲花胡忠义姜清明
- 关键词：分枝杆菌结核SELEX适配子
- 分枝杆菌简单序列重复区间分型方法的研究被引量：2
- 2008年
- 目的构建分枝杆菌简单序列重复区间（inter-simple sequence repeat，ISSR）分型系统，为结核分枝杆菌的基因分型、菌种鉴定以及流行病学的研究提供新的研究工具和研究思路。方法根据结核分枝杆菌基因组中简单重复序列（SSR）的丰度和频率，设计用于分枝杆菌基因分型的ISSR引物，以分枝杆菌属的DNA为材料，分析DNA浓度、Mg^2＋浓度、dNTP浓度、Taq酶的含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响，构建分枝杆菌的ISSR分型体系，并通过该体系筛选获得扩增结果稳定、多态性强的引物。结果经过优化实验建立了分枝杆菌ISSR-PCR最佳反应体系，20μl的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为：10ng模板DNA，1U Taq酶，0．5μmol／L引物，1．5mmol／L MgCl2，0．2mmol／L dNTPs。利用该反应体系从10个ISSR引物中，筛选出了3个稳定性高、重复性好的引物，对分枝杆菌属28个菌种的标准菌株及52株结核分枝杆菌临床分离株进行了ISSR遗传多样性分析。结果显示，28个分枝杆菌菌种，除了结核和牛分枝杆菌之间具有较高的相似性，两两之间存在着高度的遗传多样性；52株结核分枝杆菌菌株在用ISSR进行分型时，大部分菌株表现出了较高的遗传相似性。结论建立了分枝杆菌属的ISSR分型体系。
- 秦莲花范超郑瑞娟刘忠华王洁蔡江丽胡忠义
- 关键词：分枝杆菌
