国家自然科学基金(81173549)
- 作品数：7 被引量：56H指数：4
- 相关作者：吴皓郁红礼王卫潘耀宗张萍更多>>
- 相关机构：南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 姜辣素拮抗半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞所致炎症因子TNF-α释放增加、ROS过量生成及RIP3表达增高被引量：13
- 2015年
- 为探索姜辣素拮抗半夏凝集素蛋白致炎作用,该研究采用ELISA法测定生姜不同提取部位对半夏凝集素蛋白所致巨噬细胞释放炎症因子TNF-α的影响;采用荧光探针测定姜辣素对半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞氧自由基ROS水平变化的影响;采用Western blot法研究姜辣素对半夏凝集素蛋白致巨噬细胞中细胞受体相互作用蛋白RIP3的表达水平增高的影响;扫描电镜研究姜辣素对半夏凝集素蛋白致巨噬细胞形态变化的影响。结果显示姜辣素可显著抑制半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞所导致炎症因子释放增加、ROS过量生成及RIP3的表达增高,扫描电镜显示姜辣素可抑制半夏凝集素蛋白导致的细胞变形坏死。生姜解半夏毒的机制可能与姜辣素抑制半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞导致的炎症因子释放、ROS的过量生成、RIP3的表达增高及巨噬细胞坏死相关,机体表现为抑制炎症的发生发展。
- 郁红礼毛善虎赵腾斐吴皓潘耀宗束晨燕
- 关键词：姜辣素半夏TNF-ΑROS细胞形态变化
- 半夏凝集素蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA的建立被引量：3
- 2022年
- 为测定半夏及其炮制品中内源性毒性物质半夏凝集素蛋白(Pinellia ternata lectin, PTL)的含量,该文采用杂交瘤细胞技术制备PTL特异性单克隆抗体,并建立了PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法,检测条件为:捕获抗体工作浓度为2.5μg·mL-1,检测抗体稀释倍数为1∶450,包被条件为4℃过夜,封闭时间、抗原及检测抗体孵育时间均为90 min,辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(streptavidin-horseradish peroxidase, SA-HRP)孵育时间为15 min。该方法对PTL抗原的定量限为0.375 ng·mL-1;线性范围为75.000~4 800.000 pg·mL-1,R~2=0.997 1;加样回收率在90.0%~110.0%;试验内和试验间精密性变异系数分别在2.0%~3.0%、2.0%~8.5%。采用该方法测定3批半夏及其炮制品中PTL含量,测得半夏中PTL质量分数均值为35.42 mg·g^(-1),其炮制品清半夏、法半夏、姜半夏中PTL质量分数均值分别为1.15 mg·g^(-1)、16.53μg·g^(-1)和122.63 ng·g^(-1),表明炮制后PTL含量显著下降。该文建立的PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法线性较好,反应灵敏,准确度高,为半夏炮制过程中PTL含量检测提供一种简便有效的监测方法。
- 谢雨薇郁红礼吴皓陶兴宝王贺鹏程砚秋王彩霞曾平刘冰冰张萍崔小兵
- 关键词：半夏单克隆抗体
- 法半夏炮制过程对半夏中毒蛋白凝集素蛋白的影响被引量：16
- 2020年
- 为探究法半夏炮制过程对其毒性成分凝集素蛋白的影响,阐释法半夏炮制解毒的科学内涵,该研究采用Western blot法半定量分析炮制前后半夏中活性凝集素蛋白的含量;以甘草汁、石灰水以及两者混合溶液浸泡的方法分别处理半夏及凝集素蛋白,考察炮制不同时间对毒性蛋白凝集素蛋白含量的影响;采用SDS-PAGE凝胶电泳分析炮制前后溶液及沉淀中凝集素蛋白的条带变化;采用MALDI-TOF技术对炮制前后的蛋白进行相对分子质量定性分析比较。结果显示,生半夏中含凝集素蛋白5.01%,而法半夏中仅含0.04%,表明炮制后活性凝集素含量显著降低;石灰水浸泡1 d、甘草汁浸泡3 d后,生品中凝集素含量显著降低,混合溶液浸泡的影响最大。定性分析发现,使用石灰水浸泡后,凝集素蛋白被分解为小分子的肽段,甘草汁浸泡,可促使凝集素蛋白变性沉淀。法半夏炮制过程中辅料甘草汁和石灰水浸泡均可破坏毒性成分凝集素蛋白结构,显著降低毒性成分凝集素蛋白的含量,此为法半夏炮制解毒机制之一。
- 李书晖郁红礼吴皓张元斌王卫
- 关键词：半夏毒性成分
- 掌叶半夏毒针晶及凝集素蛋白的致炎作用与巨噬细胞的相关性研究
- 目的:探索掌叶半夏毒针晶及凝集素蛋白诱导炎症与巨噬细胞的相关性。方法:自掌叶半夏块茎中提取分离纯化掌叶半夏毒针晶与凝集素蛋白;采用SDS-PAGE凝胶电泳联合质谱分析鉴定凝集素蛋白;采用大鼠腹腔巨噬细胞体外培养模型,以T...
- 潘耀宗郁红礼吴皓陈叶青王奎龙
- 关键词：巨噬细胞扫描电镜炎症因子
- 文献传递
- 炮制对天南星科4种有毒中药毒性成分凝集素蛋白的影响被引量：18
- 2019年
- 为研究炮制对天南星4种有毒中药半夏、掌叶半夏、天南星、白附子中毒性成分凝集素蛋白的影响,该研究采用Western blot(蛋白质印迹)法半定量分析4种有毒中药生品及其不同炮制品中凝集素蛋白含量,并以生姜汁浸泡、白矾水浸泡以及单独加热煮制的方法分别处理4种生品及4种凝集素蛋白,考察不同辅料及加热方法对凝集素蛋白的影响。结果显示,掌叶半夏、半夏、天南星和白附子生品中各凝集素蛋白的质量分数分别为7.3%,4.9%,2.7%,2.3%,清半夏中半夏凝集素的质量分数为0.027%,姜半夏、制天南星和制白附子中均检测不到活性凝集素蛋白,表明炮制后活性凝集素含量显著降低;且随着白矾水浸泡时间或加热时间的延长,生品中凝集素含量逐渐降低。而单独生姜汁浸泡对生品中凝集素蛋白的含量几乎无影响。不同辅料及加热煮制的方法直接处理凝集素蛋白对其产生的影响与对生品产生的影响一致。故复制法以白矾浸泡及加热煮制的炮制方法可促使有毒中药中毒性成分活性凝集素蛋白的含量降低,这是有毒中药毒性下降的关键。该研究以Western blot法检测天南星科有毒中药毒蛋白凝集素蛋白的含量水平可作为炮制程度的评价方法。
- 郁红礼王卫吴皓沈敏张元斌李书晖
- 关键词：天南星科毒性
- 白附子凝集素促炎作用与细胞的关系
- 目的:研究白附子凝集素(Typhonium giganteum agglutinin,TGA)诱导大鼠腹腔中性粒细胞迁移与居留细胞、巨噬细胞、肥大细胞的关系。方法:分别采用腹膜内居留细胞灌洗模型,Tg刺激大鼠腹膜内巨噬细...
- 刘先琼郁红礼吴皓潘耀宗郗有丽
- 关键词：巨噬细胞肥大细胞
- 文献传递
- ELISA法测定半夏及其炮制品中半夏凝集素含量
- 2023年
- 目的:研究双抗夹心酶联免疫ELISA法作为半夏及其炮制品中毒蛋白半夏凝集素蛋白(Pinellia ternata lectin,PTL)检查方法的可行性。方法:采用双抗夹心ELISA法,测定半夏不同炮制品中PTL含量。结果:方法学考察结果显示,非线性四参数曲线拟合相关系数r^(2)=0.9999,表明当PTL浓度在0.075~4.80 ng•mL^(-1)浓度范围内,以非线性四参数拟合曲线计算PTL含量的准确度高,且方法精密度、稳定性、重复性较好。26批半夏生品及75批半夏炮制品(清半夏、法半夏、姜半夏各25批)中半夏中PTL含量均值为30.9 mg•g^(-1),其炮制品清半夏、法半夏、姜半夏中PTL含量均值分别为0.92 mg•g^(-1),48.80μg•g^(-1),130.32 ng•g^(-1),表明炮制后PTL含量显著下降,姜半夏中PTL含量最低,其次为法半夏,清半夏含量最高。同时建立半夏不同饮片中内源性毒性蛋白凝集素蛋白限度检查方法,建议清半夏、法半夏、姜半夏中PTL含量分别不超过2.70 mg•g^(-1)、160.0μg•g^(-1)、510.0 ng•g^(-1)。结论:ELISA法测定半夏凝集素蛋白准确可靠,且成本低,可快速批量测定,可以作为半夏及其炮制品中PTL检查方法。
- 郁红礼谢雨薇吴皓吴皓刘冰冰崔小兵张萍崔小兵
- 关键词：半夏ELISA
- 姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶刺激性毒性的机制研究被引量：15
- 2016年
- 为探索姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶刺激性毒性的机制,该研究采用掌叶半夏毒针晶诱导的小鼠腹腔炎症模型,观察姜辣素对小鼠腹腔炎症渗出液中炎症介质PGE2的影响;采用大鼠腹腔巨噬细胞体外培养模型,以上清液中TNF-α和IL-1β为指标,研究姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶的致炎作用;采用扫描电镜法观察姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶刺激后巨噬细胞表面形态的改变;采用巨噬细胞-中性粒细胞共培养模型,考察姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶对中性粒细胞迁移的影响。结果显示,姜辣素可以显著抑制掌叶半夏毒针晶所致的小鼠腹腔渗出液中PGE2的生成;姜辣素可以显著抑制掌叶半夏毒针晶诱导巨噬细胞释放炎症因子,并具有一定的量效关系;扫描电镜显示,姜辣素可以显著抑制巨噬细胞吞噬掌叶半夏毒针晶及细胞膜破损,并能显著抑制掌叶半夏毒针晶诱导的中性粒细胞迁移。姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶刺激性毒性的机制可能是抑制了包括巨噬细胞激活、炎症因子释放、中性粒细胞迁移聚集的致炎毒性。
- 金羊平吴皓郁红礼潘耀宗陈叶青王奎龙张程超王卫
- 关键词：姜辣素掌叶半夏巨噬细胞扫描电镜中性粒细胞趋化
- 石灰水炮制半夏对毒性成分凝集素蛋白的影响研究被引量：2
- 2023年
- 为探究法半夏炮制过程中炮制辅料石灰水浸泡对其毒性成分凝集素蛋白的影响,阐释法半夏炮制过程中石灰水解毒的科学内涵。以Western blot法考察不同pH石灰水(pH 10、11、12.4)、饱和氢氧化钠及碳酸氢钠溶液浸泡对凝集素蛋白含量的影响;采用SDS-PAGE法结合银染技术测定不同pH石灰水浸泡凝集素蛋白后上清与沉淀中蛋白组成;以MALDI-TOF-MS/MS技术检测不同pH石灰水浸泡凝集素蛋白后上清及沉淀中肽段相对分子质量分布,圆二色谱检测浸泡过程中凝集素蛋白二级结构比例变化。结果显示,pH>12的石灰水及饱和氢氧化钠溶液浸泡均可使凝集素蛋白含量显著下降,而pH<12的石灰水及饱和碳酸氢钠溶液浸泡对凝集素蛋白含量无显著影响。pH>12的石灰水浸泡凝集素蛋白后其上清和沉淀均在12 kDa位置未检测到对应的凝集素蛋白条带和分子离子峰。这是由于pH>12的石灰水浸泡可使凝集素蛋白的二级结构比例发生明显改变,出现了不可逆变性过程,而pH<12的石灰水浸泡未使凝集素蛋白的二级结构比例发生明显改变,未出现变性过程。pH>12是法半夏炮制过程中石灰水解毒的关键条件。石灰水(pH>12)浸泡可使凝集素蛋白发生不可逆变性,致使半夏致炎毒性显著下降,起到炮制解毒的关键作用。
- 陶兴宝吴皓
- 关键词：半夏石灰水
- 天南星科有毒中药半夏毒针晶的致炎作用研究
- 目的:探索半夏毒针晶所引起的刺激性炎症效应的机体表现及对相关炎症介质的影响。方法:采用小鼠毛绌管通透性试验、小鼠腹腔炎症试验及大鼠足趾肿胀试验,考察不同浓度半夏毒针晶所致的炎症毒性效应及其量-效关系,并测定相关炎症介质含...
- 朱法根吴皓郁红礼史闰均陶文婷
- 关键词：半夏炎症介质
- 文献传递
