长春市科技计划项目(04-02GG217)
- 作品数：2 被引量：14H指数：2
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- 相关机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：长春市科技计划项目教育部科学技术研究重点项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- H3、H9亚型流感病毒多表位核酸疫苗毒构建及其表达研究
- 构建流感病毒多表位的的核酸疫苗,并研究表位基因在BHK细胞内表达产物的生物学活性。筛选流感病毒主要抗原(HANANP M)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感通用多表位基因(Epi),然后定向克隆至真...
- 陈义锋金宁一赵建增田明尧鲁会军南文龙赵翠青霍晓伟
- 关键词：多表位流感病毒核酸疫苗
- 文献传递
- H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位核酸疫苗构建及表达研究被引量：8
- 2007年
- 目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H7亚型流感病毒HA融合表达基因为骨架,将多表位基因Epi插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至pVAX1,构建抗A型流感H3579亚型的pVAX1-H7HA-Epi-H5HA。最后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞总RNA,以RT-PCR方法检测目的基因;以间接免疫荧光试验(IFA)初步测其表达产物抗原性。结果RT-PCR检测到目的基因;IFA检测到特异性荧光存在。结论本试验所构建的重组质粒pVAX1-H7HA-Epi- H5HA,在真核细胞内均获了有效地转录和表达;而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗多种A型流感病毒的通用核酸疫苗。
- 陈义锋金宁一贾雷立鲁会军田明尧南文龙马鸣潇刘成宏沈国顺马海利陈晓月
- 关键词：表位流感病毒核酸疫苗
- 流感复合多表位疫苗的设计及小鼠免疫研究被引量：8
- 2006年
- 鉴于目前出现了多种亚型禽流感病毒共存的局面，研究多价流感疫苗具有重要意义。根据各表位的免疫学特性，结合分子生物学信息软件的模拟功能，以H3、H9亚型流感病毒的HA抗原表位、流感病毒的其他主要抗原（NP、NA、M）表位的基因为基础，再附以Kozak序列和适当的酶切位点，设计并合成大小为765bp的复合多表位基因盒-Epi。将Epi基因克隆入真核表达载体pIRES1neo中，构建DNA重组体pIR—Epi；将H7HA、Epi、H5HA基因以融合表达方式克隆到pIRES1neo中，构建了DNA重组体pIRE—H57一Epi。以上述构建的DNA重组体与鸡痘病毒重组株对BALB／c小鼠进行免疫接种后，检测体液与细胞免疫指标。研究结果表明，流感病毒复合多表位DNA重组体pIRE—H57-Epi、pIRE—Epi免疫组小鼠均能产生针对H3亚型流感病毒的特异性抗体，抗体效价（1：1600～1：64003低于灭活疫苗免疫组（1：12800），但均高于其他对照免疫组（P〈0．01）。pIRE—H57-Epi免疫组抗H5、H7HA抗体效价分别为1：12800和1：6400，均高于其他免疫组（P〈0．05）。pIRE—Epi免疫组抗H5、H7HA抗体效价（1：200，1：100）较低，与其他对照免疫组差异不显著。pIRE—H57-Epi与pIRE—Epi免疫组抗H9亚型AIV的HA抗体效价（1：6400，1：3200）明显高于其他免疫组（P〈0．05）。与PBS对照组及空质粒pIRES1neo对照组比较，用所构建的重组体免疫的各试验组小鼠的T淋巴细胞亚类CD4^＋和CD8^＋的数量显著提高（P〈0．05）。pIRE—H57-Epi与pIRE—Epi试验组的CD4^＋与CD8^＋淋巴细胞的数量较灭活苗显著增多（P〈0．05），而各重组体免疫组之间差异不显著。此外，所有组的CD4^＋／CD8^＋比值均稳定在1．5～2．0，表明无异常免疫应答出现。ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN—γ斑点数实验结果表明，pIRE—H57-Epi、pIRE—Epi试验组的IFN—γ斑点数量（〉70）比灭活�
- 贾雷立金宁一鲁会军金洪涛王瑞琳田明尧陈义峰郑敏李昌李霄马明潇金扩世
- 关键词：禽流感病毒表位疫苗
