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牛疙瘩皮肤病病毒ORF132基因的克隆及其原核表达被引量：1: 2012年; 为原核表达牛疙瘩皮肤病病毒(LDSV)ORF132并对该基因进行生物信息学分析,本研究采用PCR扩增LSDV的ORF132基因,将其亚克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒pGEX-LSDV-ORF132。生物信息学分析表明,LSDV的ORF132与Neethling vaccine LW1959株LW132、NI-2490株LSDV132和NW-LW株LD132的相应推导氨基酸同源性分别为100%、100%和94.4%,与山羊痘病毒、绵羊痘病毒相应推导氨基酸的同源性为20.7%～36%。SDS-PAGE和western blot分析表明,pGEX-LSDV-ORF132在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导主要以包涵体形式存在,其重组蛋白大小约为48.95 ku,并且与特异性抗体具有抗原反应活性。; 周雪梅聂福平王昱肖进文聂奎李应国; 关键词：原核表达

猪瘟病毒NASBA-ELISA检测方法的建立与应用被引量：1: 2012年; 为建立猪瘟病毒NASBA-ELISA检测方法,以猪瘟病毒(CSFV)E2基因为研究对象,利用Prim-er 5.0和Blastn生物软件,设计并合成了特异的核酸序列依赖扩增(NASBA)引物和探针。经条件优化,确定的最佳扩增反应条件为42℃,反应1.5h。临床检测结果显示,用该方法可特异地扩增CSFV E2基因约155bp的目的片段,而对TGEV、PRRSV、PCV2、PPV、PEDV、APP和PK-15正常细胞等核酸的检测均为阴性,可最低检出1×100～1×101 copies/μL,其灵敏度比RT-PCR略高。应用该方法对采自重庆部分地区猪场的125份样品进行了检测;结果,猪瘟病毒阳性检出率为5.6%,NASBA-ELISA法与RT-PCR法的检出符合率为94.4%。结果表明,NASBA-ELISA方法可应用于CSFV的快速鉴别检测。; 聂福平肖进文李应国徐自忠王灵强王昱周雪梅李小兰; 关键词：猪瘟病毒 E2基因

猪传染性胃肠炎病毒NASBA检测方法的建立被引量：5: 2010年; 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NASBA的检测方法,本研究利用BioEdit和BlastN,根据GenBank中猪TGEV的S基因保守序列设计引物,建立了扩增TGEV的NASBA检测技术。利用该方法建立的反应体系在41℃反应2h即可得到有效扩增。实验结果表明:该方法对TGEV进行扩增获得约200bp特异性目的条带,而对CSFV、PRRSV、PCV-2、PPV、PEDV和ST细胞扩增结果均为阴性。NASBA的灵敏度高于普通RT-PCR,与病毒分离方法相当,可检测到5pg的核酸。该方法为TGEV的早期诊断提供了新途径。; 李小兰聂福平李应国肖进文徐自忠胡世君王昱; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒

山羊痘病毒属病毒检测技术研究进展被引量：3: 2011年; 山羊痘病毒属包括山羊痘病毒、绵羊痘病毒和牛结节疹病毒,分别引起山羊痘、绵羊痘和牛结节疹,感染动物发热、局部或全身出现丘疹或结节,损坏皮张,产乳量下降,造成严重经济损失并具有重要的公共卫生意义。文章就近年来国内外对该类病毒在病原学、血清学、分子生物学等方面的检测技术与方法进行综述,以促进对羊痘病毒检测技术的进一步研究和发展。; 肖雯聂福平王昱肖进文李应国刘力; 关键词：羊痘病毒

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国家质检总局科技计划项目(2009IK027)