浙江省自然科学基金(398498)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 相关作者：卢亦愚严菊英周敏史雯茅海燕更多>>
- 相关机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 流感病毒型别及亚型的多重RT-PCR方法快速检测被引量：3
- 2005年
- 目的为适应流感疫情监测中快速诊断的需要,建立敏感特异的流感病毒多重逆转录PCR(MRTPCR)检测方法。方法对甲1型(H1N1)、甲3型(H3N2)、乙型流感病毒的血凝素(HA)基因保守区域分别设计引物进行MRTPCR。另设计了两对引物对H1N1和H3N2亚型流感病毒的神经氨酸酶(NA)N1、N2作亚型判断。结果MRTPCR可特异性检测出各型流感病毒的目的片段,相互间无交叉反应。二次PCR反应后对H1N1、H3N2流感病毒的检测灵敏度可达0.10TCID50/50μl以下,对乙型流感病毒的检测灵敏度可达0.01TCID50/50μl以下。应用此方法也可特异性地检测出H1N1和H3N2流感病毒的NA基因。结论用MRTPCR从临床患者含漱液标本中检出相关流感病毒的灵敏度要高于用狗肾传代细胞(MDCK)或鸡胚分离的灵敏度,达到了快速、敏感、正确检测流感病毒及其亚型的目的。
- 卢亦愚严菊英茅海燕孙琰周敏史雯
- 关键词：正粘病毒科逆转录聚合酶链反应乙型流感病毒H3N2亚型PCR方法
- 多重逆转录-聚合酶链反应对甲_1与甲_3型流行性感冒病毒神经氨酸酶亚型的快速鉴定被引量：2
- 2004年
- 为建立流行性感冒 (流感 )病毒甲1、甲3 型神经氨酸酶 (NA)N1与N2 亚型的快速鉴别方法 ,通过对大量NA基因序列的比较 ,分别在N1与N2 亚型的保守区域设计特异性引物 ,采用多重逆转录 聚合酶链反应 (MRT PCR)进行NA基因扩增 ,并评价了其灵敏度和特异性。结果表明 :MRT PCR能特异性扩增甲1、甲3 型流感病毒NAN1与N2 亚型基因 ,灵敏度为 0 1TCID50 ,可从临床患者含漱液中直接检测到N1、N2 基因。MRT PCR方法不仅可作为甲型流感病毒NA亚型的快速鉴定方法 ,而且可以作为人类甲型流感病毒基因快速诊断方法的补充 ,应用于流感爆发疫情的应急诊断。
- 卢亦愚严菊英茅海燕李敏红冯燕史雯
- 浙江省近几年甲_3型流行性感冒病毒株HA_1基因特性分析被引量：10
- 2003年
- 为了研究近几年浙江省甲3 型流行性感冒 (流感 )流行株血凝素 (HA)基因的特性 ,阐明HA基因的变异与流感流行的关系。对浙江省 1998～ 2 0 0 2年流感流行期间分离的甲3 型代表性毒株 ,提取病毒核糖核酸 (RNA) ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增病毒HA1基因 ,纯化产物进行核苷酸序列测定 ,并用DNAMAN和BioEdit软件作分析处理。结果显示 :浙江省近几年流感流行期间分离到的甲3 型流感病毒中的 8株代表毒株 ,其在HA1区域的核苷酸长度均为 987bp ,由此推导的氨基酸数为 32 9个。A/浙江 / 2 5 / 98与当时世界卫生组织 (WHO)推荐的流感疫苗株A/武汉 / 35 9/ 95株在HA1区域的核苷酸同源性为 97 4 % ,氨基酸同源性仅为 94 8% ;HA1区的抗原性已发生了一定的变异。A/浙江 / 11/ 0 2株与同期WHO推荐的流感疫苗株A/莫斯科 / 10 / 99相比 ,两者的氨基酸同源性仅为 96 1% ;且氨基酸的改变发生在抗原决定簇A区和B区的有 4个位点 ,与 1998年的流行株A/浙江 / 2 5 / 98的氨基酸同源性也只有 96 1%。说明A/浙江 / 11/ 0 2株与A/莫斯科 / 10 / 99和A/浙江 / 2 5 / 98株相比 ,其HA1区的抗原性也发生了变化 ,在基因进化树上远离A/莫斯科 / 10 / 99株和A/浙江 / 2 5 / 98株。表明由于甲3
- 严菊英卢亦愚周敏史雯
- 关键词：HA1基因基因变异
- 甲_3型流行性感冒病毒基因的快速检测被引量：6
- 2002年
- 为建立流行性感冒 (流感 )的快速诊断技术 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测甲3型流感病毒的血凝素 (HA)基因。对甲3型流感病毒的HA基因保守区域设计相关引物并进行PCR扩增 ,比较了它的特异性与灵敏度。结果显示 :该引物只能扩增甲3型流感病毒的特异性片段 ,而对其它型别的流感病毒以及麻疹、风疹、流行性腮腺炎病毒无交叉反应。检测的灵敏度 1次PCR可达 1 0TCID50 / 50ml以下 ,2次PCR反应可达 0 1TCID50 / 50ml以下。采用该方法从临床患者含漱液标本中的检出率 ,比采用狗肾传代细胞 (MDCK)分离病毒的阳性率更高 ,可达到迅速。
- 卢亦愚严菊英周敏姜晓路
- 关键词：流行性感冒逆转录-聚合酶链反应
- 浙江省流行性感冒病毒监测与HA1基因分析
- 2006年
- 目的 了解浙江省流感病毒变异情况和WHO推荐流感疫苗株对我省人体的保护情况。方法 对浙江省近两年分离到的甲3型流感病毒进行核酸提取、病毒血凝素HA，基因核苷酸序列测定，与WHO推荐疫苗株进行对比。结果 近两年分离到的甲3型流感病毒株HA1区域的核苷酸序列长度均为987bp，未发现核苷酸的丢失和插入，相应的点突变率为0．8～1．3％，推导的氨基酸序列长度均为329个。2003年分离的毒株与同期WHO推荐使用的疫苗株A／Moscow／10／99相比，核苷酸同源性只有95．6％。95．9％，氨基酸总变异达20个，发生在抗原决定簇A、B区的有6个位点。2004年分离的毒株与同期WHO推荐使用的疫苗株A／fujtan／411／2002（A／Kumamoto／102／2002，A Wyoming／3／2003）相比，核苷酸同源性达98．6％～99．1％，仅发生3～6个氨基酸的变异，基因进化树上，我省2003、2004年分离的毒株都属于同一类性状的毒株，与2004年WHO推荐疫苗株接近，远离2003年推荐疫苗株。结论我省甲3型流感病毒的抗原性已发生漂移。2003年WHO推荐使用的流感疫苗株对我省甲3型流感的预防效果不够理想，2004年推荐使用的疫苗株对我省甲3型流感的预防效果较好。
- 李敏红史雯周敏卢亦愚严菊英茅海燕冯燕龚黎明葛琼
- 关键词：甲3型血凝素基因
- 浙江省流行性感冒病毒分离株HA1基因分析被引量：6
- 2006年
- 目的 研究浙江省近2年新分离的甲3型流行性感冒（流感）病毒株血凝素HA1基因特性，以了解浙江省流感病毒变异情况和WHO推荐疫苗株对人体的保护情况。方法 采集浙江省近2年类流感病人的咽拭子和含漱液标本进行流感病毒的分离，对分离到的甲3型流感病毒进行核酸的提取，采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行核苷酸序列测定，用DNAMAN和BioEdit生物软件对测序结果进行分析处理，并与WHO推荐疫苗株进行比对。结果 近2年新分离到的甲3型流感病毒株HA，区域的核苷酸序列长度均为987bp，未发现核苷酸的丢失和插入，相应的点突变率为0．8％～1．3％，推导的氨基酸序列长度均为329个。2003年分离的毒株与同期WHO推荐使用的疫苗株A／Moscow／10／99比较，核苷酸同源性只有95．6％～95．9％，氨基酸总变异达20个，发生在抗原决定簇A、B区的有6个位点。2004年分离的毒株与同期WHO推荐使用的疫苗株A／fujian／411／2002（A／Kumamoto／102／2002，A Wyoming／3／2003）比较，核苷酸同源性达98．6％～99．1％，仅发生3～6个氨基酸的变异。基因进化树上，浙江省2003，2004年新分离的毒株均属于同一类性状的毒株，与2004年WHO推荐疫苗株接近．已远离2003年推荐疫苗株。结论 浙江省甲3型流感病毒的抗原性已发生漂移，与我省流感的流行密切相关。2003年WHO推荐使用的甲3型流感疫苗对我省甲3型流感的预防效果不够理想，2004年推荐使用的疫苗对我省甲3型流感的预防效果较好。
- 李敏红史雯茅海燕周敏冯燕卢亦愚严菊英龚黎明葛琼
- 关键词：甲3型流感血凝素基因
