国家自然科学基金(30600006)
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目国家教育部博士点基金更多>>
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- Characterization of heterotrophic transformation algal strains of Dunaliella salina
- ＜正＞Most microalgae are obligate photoautotrophs and their growth is strictly dependent on the generation of ph...
- 文献传递
- 杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D2基因的克隆及序列分析
- 2007年
- 根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Oryza sativa、Chlorella vulgaris以及Me-sostigma viride等真核生物的psbD基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到杜氏盐藻cDNA片段的长度大约为1 000bp.该序列的PCR产物经T-A克隆并测序分析以及测序结果推导成氨基酸序列,Blast同源性分析表明所克隆的基因为杜氏盐藻psbD基因,编码杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心D2蛋白,该序列已递交GenBank(GenBank登录号为:DQ074450).编码的氨基酸序列,同源性依次为:Chlamydomonas reinhardtii92%,Nephroselmis olivacea88%,Pinus thunbergii88%,Am-borella trichopoda88%,Chlorella vulgaris88%.通过密码子偏爱性分析表明,psbD基因存在明显的密码子偏爱性,其(A+T)含量明显高于(G+C)含量.
- 刘红涛宋建伟臧卫东鲁照明王鹏举薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻密码子偏爱性
- 杜氏盐藻psaB基因cDNA克隆及系统进化分析(英文)
- 2007年
- 根据真核生物莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Chlamydomonas moewusii及Chlorella vulgaris等光系统Ⅰ反应中心蛋白psaB基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到的一段长为1.8kb左右的cDNA片段。PCR产物经T-A克隆并测序以及测序结果推导成氨基酸序列进行同源性比较,表明所克隆的1815bp序列为杜氏盐藻光系统Ⅰ反应中心psaB基因的cDNA片段,GenBank收录号为AY820754。根据已经得到的psaB的核苷酸序列推导成氨基酸序列与一些已知物种的psaB氨基酸序列相比较,同源性分别为Chlamydomonas reinhardtii 92%,Chlamydomonas moewusii 91%,Chlorella vulgaris 86%,Mesostigma viride 85%,Phy -scomitrella patenssubsp.Patens 85%,Nephroselmis olivacea 84%。此外,psaB密码子偏爱性分析表明:杜氏盐藻psaB基因第三位密码子A和T的组成分别为35.7%和39.17%,而G和C分别为7.27%和17.85%,即杜氏盐藻psaB基因密码子的组成大多为NNA和NNT。根据psaB基因的特征,作者对绿藻门的50个物种的psaB基因作了进化分析,结果表明:杜氏盐藻与Haematococcaceae中的大多数种类进化地位最为接近,这为更进一步弄清杜氏盐藻的遗传背景提供了理论依据。
- 鲁照明刘红涛臧卫东薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻CDNA
- 不同盐浓度和光照强度对杜氏盐藻psbA基因表达的影响被引量：3
- 2010年
- 利用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR研究不同浓度的NaCl和不同的光照强度条件下杜氏盐藻psbA基因的表达差异.结果显示,杜氏盐藻在2.5 mol NaCl的培养基中,其psbAmRNA的表达达到最高,与其它各组不同NaCl浓度(1.5 mol,2.0 mol,3.0 mol和4.0 mol)相比,差异显著(P<0.05);高浓度的NaCl(4.0 mol)能明显抑制杜氏盐藻psbA基因的表达.此外,与暗培养相比,杜氏盐藻在3 000 lx和4 500 lx的条件下,psbA基因的表达量明显升高(P<0.05),其中4500 lx光强下psbA表达量达到峰值.但高光强(8 000 lx)与暗培养相比,psbA基因的表达量无差异(P>0.05).上述结果提示,高浓度的盐(4.0 mol)和高光强(8 000 lx)能明显抑制PsbA基因mRNA的表达;而适量浓度的盐和光照条件能促进PsbA基因mRNA的表达.
- 吕文兵刘红涛薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻PSBA基因氯化钠光照强度
- 杜氏盐藻分子生物学最新进展及展望被引量：9
- 2007年
- 杜氏盐藻是一种无细胞壁的单细胞双鞭毛真核藻类,是一种十分重要的藻类资源。过去对杜氏盐藻的研究多集中在形态学、耐盐机理及β-胡萝卜素等方面,近年来,随着藻类基因工程的快速发展,国内外在杜氏盐藻分子生物学方面做了大量工作,现就杜氏盐藻在这一领域的研究进展进行综述,主要是重要功能基因的克隆与分析、杜氏盐藻调控序列的研究以及杜氏盐藻作为宿主表达外源基因等。
- 刘红涛冯书营陈涛薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻功能基因外源基因
- 杜氏盐藻玻璃珠新型转化方法的建立被引量：6
- 2007年
- 首次采用玻璃珠法成功转化了杜氏盐藻(以下简称盐藻),转化细胞经染色后呈现蓝色,表明外源报告基因GUS得到了成功的表达。同时还进行了转化时间、转速、PEG和质粒DNA浓度等因素对转化影响的分析,优化了转化条件。结果显示最佳的转化条件为:在800μL盐藻(106个细胞/mL)中加入150μLPEG和90μL质粒,在300mg玻璃珠存在的条件下,于转速2400r/min涡旋12s能够得到较为理想的转化结果。该方法与已报道的转化方法相比,具有操作简便、省时快捷、不需要昂贵消耗试剂和仪器设备、比较经济等优点。此方法的建立为深入研究盐藻基因工程提供了有力的工具。
- 冯书营贾岩龙刘红涛李杰薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻玻璃珠
- 杜氏盐藻异养表达载体的构建及异养转化株的鉴定被引量：3
- 2009年
- 分别构建杜氏盐藻诱导型和组成型异养表达载体,筛选并初步鉴定异养转化藻株。通过RT-PCR从人胎盘组织中克隆并鉴定人红细胞葡萄糖转运基因(Glut1),构建以诱导型双拷贝碳酸酐酶启动子(DCA)驱动Glut1表达的中间载体,然后与筛选标记Bar盒连接形成盐藻诱导型异养表达载体pMDDGN-Bar。此外,将pU?GUS(简称G5)质粒的GUS基因去除,回收大片段载体后与Glut1基因连接,构建以组成型启动子ubiquitin驱动的组成型异养表达载体G5Glut1-Bar。通过电击转化法转化盐藻,使Glut1得到表达,筛选具有草丁膦(PPT)抗性的表达Glut1的盐藻转化株。提取转化株总RNA,RT-PCR检测目的基因的整合。克隆获得了1479bp的Glut1序列,编码493个氨基酸。电泳检测各酶切结果表明Glut1、DCA、Nos和Bar盒已依次连接到相应的载体上,说明异养表达载体构建成功。经PPT筛选数周后,转化藻株生长良好,而对照野生藻株全部死亡。电泳检测RT-PCR产物表明两株转化株在相应位置(约250bp处)出现了较为特异的扩增条带,Blast同源性分析显示序列与人Glut1基因的同源性为100%。诱导型和组成型启动子驱动的盐藻异养表达载体构建成功,Glut1基因确已整合到盐藻的基因组中,构建的表达载体可用于盐藻中Glut1基因的表达。
- 陈涛刘红涛吕鹏举薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻异养
