江苏省自然科学基金(BK2008215)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：龚卫娟季明春龚春香范敏其王海洋更多>>
- 相关机构：扬州大学扬州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠CD86基因启动子的构建及活性分析被引量：1
- 2009年
- 为构建小鼠CD86启动子,并对其特异性调控能力进行鉴定。首先自C57BL/6J小鼠基因组中采用高保真PCR扩增小鼠CD86基因的启动子,经测序鉴定后,插入pCDNA3.1-EGFP重组质粒。然后分别转染小鼠来源细胞株:RAW264.7、NIH/3T3、P815、SP2/0、EL4细胞,观察各细胞内绿色荧光蛋白的表达。结果显示,小鼠CD86基因启动子的序列与GenBank报道一致;双酶切鉴定证实小鼠CD86启动子序列已经克隆入重组载体;小鼠CD86启动子能调控EGFP在巨噬细胞系RAW264.7细胞中表达,不能调控EGFP在NIH/3T3、P815、SP2/0和EL4非抗原提呈细胞内表达。说明成功构建小鼠CD86基因启动子,且该启动子具有特异性调控目的基因表达的活性。
- 范敏其龚卫娟龚春香肖炜明丁岩冰季明春
- 关键词：分子克隆
- 重组可溶性MHCI类相关蛋白A对NK细胞生物学活性的影响被引量：5
- 2009年
- 目的:研究体外重组可溶性MHCI类相关蛋白A(sMICA)对NK细胞杀伤靶细胞活性、分泌IFN-γ、增殖和凋亡的影响。方法:将重组sMICA蛋白与人外周血NK细胞相互作用过夜后,流式细胞仪检测NK细胞杀伤K562靶细胞的能力;ELISA检测培养上清IFN-γ浓度;MTS/PMS法检测sMICA对NK细胞增殖的影响;给NK细胞标记Annexin V和碘化丙啶检测凋亡情况。结果:可溶性MICA抑制NK细胞杀伤K562细胞的活性,下调IFN-γ的分泌,却对NK细胞的增殖和凋亡没有影响。结论:肿瘤细胞表面脱落的sMICA抗原可通过抑制NK细胞活性而逃逸机体的免疫监视功能。
- 龚卫娟王海洋范敏其龚春香刘丹季明春
- 关键词：NK细胞细胞毒活性
- 固相MICA协同s4-1BBL、IL-15体外高效扩增CD3^+CD56^+细胞的研究
- 2011年
- 目的:观察固相MHCⅠ类相关抗原A(iMICA)是否协同s4-1BBL、IL-15促进外周血CD3+CD56+细胞的增殖并增强其活性。方法:首先将iMICA联合s4-1BBL、IL-15分别刺激外周血单个核细胞或纯化的CD3+CD56+细胞,共培养19天,动态观察CD3+CD56+细胞频率变化及记录其增殖曲线;其次利用LDH释放法和ELISA分别检测长期培养的CD3+CD56+细胞杀伤活性及IFNγ-、IL-4的分泌;最后检测CD3+CD56+细胞表面活性相关受体的表达。结果:iMICA联合s4-1BBL、IL-15促进CD3+CD56+细胞的频率自2%升高至21.7%,绝对细胞数平均增长32倍;扩增后的CD3+CD56+细胞杀伤K562活性明显增高,IFNγ-分泌能力增强,不分泌IL-4;其表面活化性受体表达上调,抑制性受体表达下调。结论:iMICA联合s4-1BBL、IL-15能高效扩增CD3+CD56+细胞,体外大量增殖后可用于肿瘤的过继免疫治疗。
- 温晓星葛鹏龚卫娟肖炜明季明春
- 关键词：MICA4-1BBLIL-15扩增
- 树突状细胞上调MHCI类相关抗原A表达对NK细胞活性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:观察单核细胞、未成熟和成熟树突状细胞(DCs)表达MHCI类相关抗原A(MICA)的情况,以及DCs表达MICA后对NK细胞活性的影响。方法:用流式细胞术分别检测单核细胞、未成熟DC(iDCs)以及LPS、TNF-α、CD40L、IL-15和IFN-α分别刺激的成熟DCs表面MICA的表达,并观察DCs表达MICA后对NK细胞表达CD69、细胞毒活性和分泌IFN-γ的影响。最后用流式细胞术检测重组NKG2D/Fc蛋白和抗IL-12单克隆抗体(mAb)对DCs激活NK细胞的影响。结果:单核细胞不表达MICA,iDCs低表达MI-CA。LPS、TNF-α和CD40L对DCs表达MICA无影响;但IFN-α和IL-15可促进DC上调MICA表达。DCs表达MICA后可促进NK细胞表达CD69、分泌IFN-γ、杀伤K562细胞。NKG2D/Fc蛋白可抑制NK细胞的杀伤活性和分泌IFN-γ;而抗IL-12mAb仅抑制IFN-γ分泌。结论:MICA在DCs表面的表达受局部微环境影响,且DCs表达MICA后可增强NK细胞的活性。
- 龚卫娟龚春香王长荣肖炜明钱莉季明春
- 关键词：树突状细胞自然杀伤细胞
