国家高技术研究发展计划(863-2002AA245051)
- 作品数：4 被引量：24H指数：3
- 相关作者：秦爱建刘红梅刘岳龙陈鸿军叶建强更多>>
- 相关机构：扬州大学安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 重组马立克病病毒CVI988／Rispens的构建被引量：3
- 2005年
- 根据I型马立克病病毒(MDV)强毒GA株基因序列,设计两对引物,用PCR方法扩增出CVI988／Rispens株的US10及其侧翼序列,分别克隆入pUC18载体中。经测序检测正确后,进一步插入含CMV启动子的绿色荧光蛋白 (EGFP)基因表达盒,获得了含EGFP报告基因的转移载体质粒pPUC18-US10-EGFP。通过同源重组,成功地筛选出表达EGFP的重组病毒rCVI988-EGFP,经传代证明重组rCVI988-EGFP在感染的CEF细胞中能稳定表达EGFP。结果表明:构建的重组转移载体质粒正确,US10是MDV复制非必需片段,为进一步利用US10区构建重组MDV多价基因工程疫苗奠定了基础。
- 刘红梅秦爱建叶建强陈鸿军金文杰刘岳龙
- 关键词：马立克病病毒绿色荧光蛋白重组病毒
- 传染性法氏囊病病毒JS株VP2基因真核表达载体的构建及其应用被引量：11
- 2006年
- 应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo(+),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。
- 刘红梅秦爱建许小琴李迎晓陈鸿军叶建强金文杰刘岳龙邵红霞
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2
- 鸡传染性法氏囊病毒JS株毒力测定被引量：6
- 2008年
- 35日龄SPF鸡半数致死量(LD50)和9日龄SPF鸡胚半数致死量(ELD50)试验结果显示,传染性法氏囊病毒(IBDV)JS株的LD50为10-3.60.1 mL/只,ELD50为10-5.20.1 mL/胚;1~6周龄SPF鸡及商品鸡的致病性试验结果显示,IBDV JS株对SPF鸡和商品鸡3周龄后的致病率为100%,最高致死率分别为93.75%和75%;应用RT-PCR方法从IBDV JS株中扩增的VP2基因,经序列测定分析结果显示,IBDV JS株的VP2基因与香港HK46、日本OKYM、英国UK661等国际超强毒株的氨基酸序列的同源性达99%以上。表明IBDV JS株为超强毒株。
- 许小琴刘红梅秦爱建周小进郜平光Mohammed Kouadir
- 关键词：VP2基因超强毒株
- 表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组马立克氏病毒的构建被引量：5
- 2006年
- 用聚合酶链式反应(PCR)方法从真核表达载体pcDNA3.1-VP2中扩增出包含CMV和polyA的VP2表达盒基因片段,经琼脂糖凝胶电泳大小为2.4kb;将该基因片段插入马立克氏病病毒(MDV)CVI988//Rispens的非必需区US10片段中,经SphI酶切分析获得大小为6.0和2.4kb两个片段,表明成功构建出表达VP2基因的MDVCVI988转移载体pUC18-US10-VP2质粒。将质粒与CVI988/Rispens疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过免疫荧光方法筛选,结果获得了表达VP2基因的重组MDV(rMDV-VP2)。用IBDV特异性单克隆抗体进行间接免疫荧光试验(IFA)证实,rMDV-VP2病毒传至第8代仍能稳定表达VP2蛋白,这为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。
- 刘红梅秦爱建叶建强陈鸿军邵红霞金文杰刘岳龙
- 关键词：重组病毒VP2
- 表达传染性法氏囊病毒VP2基因的重组马立克氏病毒的构建与应用
- 传染性法氏囊病(Infection bursal disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal diseasevirus,IBDV)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病。近年来,由于...
- 秦爱建刘红梅金文杰刘岳龙
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