北京市优秀人才培养资助(D)
- 作品数：4 被引量：24H指数：3
- 相关作者：段钟平时红波张莉郭媛媛陈德喜更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京佑安医院山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：北京市优秀人才培养资助王宝恩肝纤维化研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 氧化应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡被引量：12
- 2015年
- 目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)在氧化应激诱导肝细胞凋亡中的作用。方法以人肝HL-7702细胞为研究对象,H2O2/抗霉素A诱导细胞产生氧化应激,建立肝细胞凋亡模型。SB216763为GSK3β特异性抑制剂,在H2O2/抗霉素A给药前2 h干预。采用钙黄绿素乙酰甲酯/碘化丙啶(PI)双染色观察细胞存活情况,采用annexinⅤ-FITC/PI联合流式细胞术检测细胞凋亡,同时对细胞培养上清进行乳酸脱氢酶(LDH)检测来评价细胞死亡程度;Western blot法检测p-GSK3β、GSK3β、caspase-3、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达。结果 H2O2/抗霉素A诱导的氧化应激促进了GSK3β活性增加,抑制GSK3β活性缓解了氧化应激和由氧化应激引起的细胞凋亡。与氧化应激模型组相比,SB216763干预组中PI染色的细胞显著减少,流式细胞术检测细胞凋亡率降低,细胞培养上清中LDH显著降低,Western blot法结果显示干预组中cleaved caspase-3、JNK、Cyt C蛋白表达下降。结论 GSK3β是氧化应激诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子,抑制其活性可减轻氧化应激而改善肝细胞凋亡。
- 张向颖郭媛媛张莉温韬朴正福时红波陈德喜段钟平任锋
- 关键词：氧化应激细胞凋亡糖原合成酶激酶-3Β
- 内质网应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡被引量：1
- 2012年
- 目的探讨细胞内信号分子GSK3β在内质网应激（ERS）诱导肝细胞凋亡中的作用。方法以小鼠肝癌细胞株Hepa1细胞为研究对象，化学药物衣霉素（20μg/m1）为ERS诱导剂，建立肝细胞凋亡模型。化学药物SB216763特异性抑制GSK3β活性，在衣霉素诱导细胞凋亡前1h给予干预处理。乙酰氧基甲酯（AM）／碘化丙啶（propidiumiodide，PI）对活细胞／凋亡细胞进行检测；再利用培养细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）的检测评价细胞死亡情况；Westernblot检测p-GSK313蛋白、ERS相关凋亡蛋白GRP78、CHOP、caspase-12以及caspase-3、cleavedcaspase-3蛋白的表达。结果研究表明，衣霉素诱导的ERS促进GSrdβ活性升高；抑制GSK3β活性缓解了衣霉素诱导的ERS：GRP78、CHOP和easpase-12的表达被抑制；与此同时抑制GSK3β活性显著减轻了ERS诱导的Hepa1细胞凋亡。与ERS诱导Hepa1凋亡模型组相比，SB216763干预组PI染色的凋亡细胞显著减少，培养细胞上清中的LDH显著下降；此外，Westernblot结果显示GSK3β活性抑制减少了cleavedcaspase-3活性蛋白的表达。结论GSK3β是ERS诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子，抑制GSK3β活性通过减轻ERS而改善肝细胞凋亡。
- 杨丙章任锋温韬朴正福郑素军张晶陈煜陈德喜段钟平师水生
- 关键词：内质网应激细胞凋亡糖原合成酶激酶-3Β
- 糖原合成酶激酶3β在乙型重型肝炎肝衰竭中的作用研究被引量：5
- 2016年
- 目的探讨细胞内信号分子糖原合成酶激酶（GSK）30在HBV引起的重型肝炎肝衰竭发生过程中的作用。方法收集2009年至2011年北京佑安医院就诊患者中慢性乙型肝炎患者（12例，慢乙型肝炎患者组）和HBV感染引起的重型肝炎肝衰竭患者（12例，乙型重型肝炎肝衰竭组）以及正常人（8例，对照组）的肝组织资料，进行各项临床检测指标的统计分析，用细胞裂解液匀浆提取蛋白，用GSK3D活性测定试剂盒检测肝组织中GSK3D活性，用Westernblot方法检测p-GSK3、GSK3、β-肌动蛋白的表达；制备石蜡切片进行免疫荧光检测。用LSD-t检验进行组间比较，P〈0．05为差异有统计学意义。结果Westernblot结果显示，与对照组相比，慢性乙型肝炎患者组GSK3β第9位丝氨酸磷酸化程度上升，活性下降，重型肝炎肝衰竭患者组GSK3β第9位丝氨酸磷酸化程度显著下降，即GSK3β活性显著上升（P=0．0342）；同时，免疫荧光方法对各组样本进行检测结果显示乙型重型肝炎肝衰竭组GSK3D磷酸化水平显著下降，证明其活性明显增高；最后，GSK3D活性检测试剂盒进行GSK3β活性检测，与Westernblot和免疫荧光结果相一致，重型肝炎肝衰竭患者中GSK3β涪性显著增加，与对照组相比，P=0．0289。结论GSK3活性在重型肝炎肝衰竭发生过程中被激活，因此其是重型肝炎肝衰竭发病机制中的一种重要信号分子，抑制其活性可能在重型肝炎肝衰竭的预防和治疗中发挥一定的作用。
- 张向颖任锋魏琳琳郭媛媛张莉温韬谢棒祥时红波朴正福陈德喜段钟平
- 关键词：肝炎乙型肝功能衰竭
- 抑制糖原合成酶激酶3活性对Toll样受体4介导肝脏炎症反应的调节作用被引量：7
- 2012年
- 目的研究抑制糖原合成酶激酶3p（GSK-3p）活性对Toll样受体4介导的炎症反应的调节作用。方法以C57BL／6小鼠为研究对象，分别建立不同灌注时间的小鼠热缺血再灌注损伤模型以及通过腹腔注射脂多糖（LPS）建立小鼠肝脏炎症模型；通过小鼠的股骨分离出骨髓干细胞，经过分化培养获得骨髓来源的巨噬细胞，随后通过LPS激活TLR4配体引发炎症细胞模型。通过SB216763抑制GSK-3D活性，分别干预小鼠肝脏炎症模型和炎症细胞模型。通过Westemblot检测肝脏丝裂原活化蛋白激酶的表达；实时定量PCR方法检测细胞炎症因子的基因表达。用SPSSl3．0统计软件进行单因素方差分析，用LSD-t检验进行组间比较。结果在肝脏缺血再灌注过程中，丝裂原活化蛋白激酶（包括ERK、JNK和p38）的磷酸化水平在灌注1h后增加，ERK、JNK和p38的活性升高，但在4h后，这种活洼激活消失，回归到起始水平。此外，LPS刺激巨噬细胞激活ERK、JNK在15rain被磷酸化而激活，p38蛋白在1h左右磷酸化而被激活。SB216763预处理一定程度上抑制了LPS刺激巨噬细胞的ERK、JNK和p38蛋白磷酸化的激活。无论是小鼠肝脏炎症模型还是炎症细胞模型，GsK-3p活性抑制均促进了抗炎细胞因子白细胞介素10（IL-10）的表达，而显著抑制了促炎细胞因子IL-12、肿瘤坏死因子（TNF）α，IL-6和IL-1D的基因表达。在对照组、炎症组及SB216763干预组小鼠炎症模型中炎症因子基因表达结果显示，IL-10相对表达量分别为0．21±0．08，0．83±0．21，1．76±0．67，F=3．16，P=0．027；IL-12相对表达量分别为0．11±0．05，0．85±0．11，0．43±0．10，F=2．67，P=0．0381TNFα相对表达量分别为0．052±0．012，8．11±0．98，3．9±0．82，F=4．13，P=0．016；IL-1β相对表达量分别为0．12±0．07，2．51±0．62，1．28±0．33，F=2．22，P=0．030；IL-6相对表达量分别为0．22±0�
- 任锋张海燕朴正福郑素军陈煜陈德喜段钟平
- 关键词：肝脏再灌注损伤炎症糖原合成酶激酶3
