江苏省自然科学基金(BK2008249)
- 作品数：10 被引量：42H指数：3
- 相关作者：钱进军赵康仁马瑞夏海平任乃勇更多>>
- 相关机构：江苏大学江苏大学附属四院镇江市第四人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目镇江市科技支撑计划(社会发展)项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胞质定位和核定位突触核蛋白慢病毒表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的:构建表达人突触核蛋白(α-synuclein)核定位和胞质定位基因(SNCA-NLS和SNCA-NES)的真核细胞表达慢病毒载体,并且观察重组质粒在293FT细胞中的表达情况。方法:采用PCR方法从质粒中扩增出目的基因,扩增出的目的基因与线性化后的载体PLVU-2A-EGFP在In-fusion重组酶作用下通过同源重组把目的片段连接到空载体上。目的片段和EGFP报告基因之间通过自剪切多肽2A连接。对重组质粒进行PCR、双酶切和质粒测序鉴定后,采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组的质粒转染至293FT细胞中,用荧光显微镜检测基因在细胞中表达的情况。通过蛋白质印迹分析核定位和胞质定位基因(SNCA-NLS和SNCA-NES)在胞核和胞质中突触核蛋白的定向表达。结果:PCR、双酶切和质粒测序结果证明SNCA-NLS和SNCA-NES已正确地克隆到真核表达载体PLVU-2A-EG-FP中,并分别在细胞核和细胞质中定向表达。结论:成功构建了PLVU-SNCA-NLS-2A-EGFP及PLVU-SNCA-NES-2A-EGFP表达载体,为研究α-突触核蛋白在帕金森病发病过程中所起的作用奠定了基础。
- 徐敏芳钱进军高静马瑞赵康仁
- 关键词：慢病毒载体
- 胞质和核定位α-突触核蛋白过表达对人神经母细胞瘤细胞的影响被引量：3
- 2013年
- 探讨α-突触核蛋白在人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞中定位过表达的影响.研究应用PLVU-SNCA-NES(NLS)-2A-EGFP重组慢病毒载体感染SH-SY5Y细胞,通过观察绿色荧光蛋白(EG-FP)检测目的基因在细胞中的表达情况.形态观察与MTT检测相结合,分析胞质和核定位α-突触核蛋白过表达对SH-SY5Y细胞增殖的影响,同时测定鱼藤酮、H2O2对胞质和核定位α-突触核蛋白过表达SH-SY5Y细胞活性的影响.MitoTracker染色法测定胞质和核定位α-突触核蛋白过表达的SH-SY5Y细胞中线粒体数目的变化.结果发现,α-突触核蛋白胞质定位过表达使得SH-SY5Y细胞培养96h时活性显著增强,24h、48h、96h时细胞中线粒体的数目显著增加,增长比率分别为91.18%、41.15%、50.21%;α-突触核蛋白核定位过表达的SH-SY5Y细胞相对正常细胞表现出较低的细胞活性,在培养48h、72h后细胞存活率显著下降.400nmol/L鱼藤酮损伤24h后,α突触核蛋白核定位过表达的SH-SY5Y细胞活性显著高于正常细胞鱼藤酮损伤组.50～800μmol/LH2O2处理条件下,α-突触核蛋白的定位过表达对SH-SY5Y细胞活性的影响并不显著.研究结果表明α-突触核蛋白胞质定位过表达表现出一定的神经保护作用,α-突触核蛋白核定位过表达也能使SH-SY5Y细胞的活性发生改变.
- 夏娟高静熊御云邱晶马瑞钱进军
- 关键词：Α-突触核蛋白核定位
- 突变A53Tα-synuclein基因核输入信号和核输出信号真核载体的构建及表达分析
- 2011年
- 目的:构建真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES,瞬时转染SH-SY5Y细胞。方法:PCR扩增法获得含有SalI和NotI的目的片段A53T-SNCA-NLS、A53T-SNCA-NES,SalI、NotI双酶切载体pRK5,线性pRK5与目的片段经ligation high连接,酶切、PCR鉴定重组质粒pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES。重组质粒通过Lipofactamine2000转染SH-SY5H细胞,免疫荧光法鉴定瞬转细胞。结果:真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES构建成功,NLS、NES能介导突变基因A53T-SNCA翻译的α-synuclein蛋白在核内表达或胞质表达。结论:基因A53T-SNCA翻译的突变α-synuclein蛋白核内高表达或胞质高表达可能是家族性帕金森氏病发病机制中关键因素之一。
- 王颖钱进军赵康仁马瑞徐敏芳熊御云高静
- 丙戊酸钠对抗鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤的线粒体机制被引量：1
- 2012年
- 研究丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对抗鱼藤酮(Rotenone)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的作用及线粒体机制。以1,10μmol/L VPA预处理SH-SY5Y细胞3 h,再加入400 nmol/L Rotenone作用24 h。MTT法检测与相差显微镜观察相结合,分析VPA对抗Rotenone损伤的作用;JC-1染色法与Mito-Tracker染色法分析线粒体膜电位及线粒体数量的变化;Clark氧电极法检测细胞呼吸功能;DCFH-DA探针法检测细胞中ROS的含量;并在离体线粒体上观察VPA对Ca2+诱导的线粒体肿胀的影响。结果发现,1,10μmol/L VPA预处理SH-SY5Y细胞3 h可对抗400 nmol/L Rotenone引起的细胞损伤,并且可以提高损伤细胞中线粒体的膜电位,增加线粒体的数量,此外,还可以增强损伤细胞的呼吸功能,降低细胞中ROS的含量,但VPA并不能直接作用于离体的线粒体发挥神经保护作用。由此,VPA具有良好的神经保护作用,其机制与增强线粒体功能和数量、从而改善细胞功能有关,这为其应用于帕金森病的预防与治疗提供了实验依据。
- 邱晶高静熊御云夏娟马瑞钱进军
- 关键词：鱼藤酮丙戊酸钠线粒体帕金森病
- 低浓度利福平对鱼藤酮介导的帕金森病细胞模型SH-SY5Y细胞的保护作用被引量：1
- 2011年
- 目的探讨低浓度利福平对鱼藤酮诱导的人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)细胞的影响。方法鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型,光学显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率,RT-PCR法检测α-突触核蛋白mRNA。结果经利福平1、10、100nmol/L预处理后,三个利福平组细胞ROS含量、α-突触核蛋白mRNA以及细胞凋亡率均低于鱼藤酮损伤组(P<0.01)。结论利福平具有抗氧化作用,能降低细胞α-突触核蛋白mRNA水平,并对细胞有保护作用。
- 钱进军王颖赵康仁吴颉言张渭芳王清芳马瑞
- 关键词：帕金森病利福平鱼藤酮
- 脑静脉窦血栓形成误诊原因分析被引量：5
- 2012年
- 目的探讨脑静脉窦血栓形成(cerebral venous sinus thrombosis,CVST)的误诊原因,并提出减少误诊的对策。方法对我院2003年2月—2012年2月收治7例误诊的CVST的临床资料进行回顾性分析。结果本组7例因意识障碍、癫痫误诊为病毒性脑炎3例;因头痛、呕吐伴局灶性神经功能缺失误诊为脑梗死2例,脑出血1例;因胸闷、呕吐误诊为冠心病1例。误诊时间1～30 d。均经CT静脉造影(CTV)检查确诊,予脱水、抗凝、溶栓等治疗,6例好转,1例死亡。结论CVST早期临床表现无特异性,临床医生应提高对本病的认识,对疑诊患者及时行头颅CT及CTV等检查,可降低误诊率。
- 任乃勇赵康仁张渭芳夏海平汤继平
- 关键词：脑静脉窦血栓形成误诊脑梗死脑出血冠状动脉疾病
- 尤瑞克林治疗大面积脑梗死的临床分析及文献回顾被引量：3
- 2014年
- 目的探讨尤瑞克林治疗大面积脑梗死的临床疗效。方法将大面积脑梗死患者60例随机分为对照组和治疗组,对照组(30例)接受常规治疗,治疗组(30例)在常规治疗的基础上给予尤瑞克林治疗。观察比较治疗前后神经功能缺损(NIHSS)、Barthel指数及日常生活能力量表(ADL)评分,评估患者治疗效果。结果治疗10、20d后各项评分变化差异有统计学意义(P<0.01);治疗组疗效明显优于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论尤瑞克林注射液可以明显改善大面积脑梗死患者的意识及神经功能缺损,降低病死率,有助于改善预后,提高患者的存活率及生存质量。
- 夏海平任乃勇钱进军赵康仁刘娜于明
- 关键词：尤瑞克林大面积脑梗死疗效
- 急性脑梗死患者血抵抗素、脂联素水平的改变及其与颈动脉粥样硬化和脑卒中危险因素的关系被引量：21
- 2013年
- 目的探讨急性脑梗死患者血抵抗素、脂联素水平的改变及其与颈动脉粥样硬化和脑卒中危险因素的关系。方法检测113例急性脑梗死患者的血清抵抗素、脂联素(酶联免疫吸附测定法)及血糖、血脂、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平和血压,用彩色多普勒超声仪检测颈动脉;并与正常对照组进行比较。对血抵抗素水平与其他观察指标的相关性及影响因素进行分析。结果急性脑梗死组的血清抵抗素水平显著高于正常对照组(P<0.001)、脂联素水平显著低于正常对照组(P<0.01)。多因素非条件Logistic回归分析显示,抵抗素、年龄、血压、低密度脂蛋白(LDL)、hs-CRP为颈动脉粥样硬化的危险因素。血抵抗素水平与血糖、LDL、hs-CRP、颈动脉内-中膜厚度(IMT)、粥样硬化斑块评分呈正相关(r=0.16～0.31,均P<0.05),与脂联素、高密度脂蛋白(HDL)呈负相关(r=-0.23～-0.26,均P<0.05)。结论急性脑梗死患者的血清抵抗素水平显著升高、脂联素明显降低。抵抗素是颈动脉粥样硬化的危险因素,与血糖、LDL、hs-CRP和颈动脉粥样硬化程度正相关;而脂联素与其呈负相关。
- 任乃勇赵康仁张渭芳靳彪钱进军夏海平
- 关键词：急性脑梗死抵抗素脂联素颈动脉粥样硬化
- 实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠Th1、Th2和Th17免疫反应检测被引量：1
- 2012年
- 目的探讨不同类型免疫反应在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用。方法 24只SD大鼠随机均分为EAE组和对照组,通过行为观测和大脑微观形态学确认免疫诱导的EAE模型,用ELISA法检测淋巴结和脾细胞培养上清液中IL-4、IFN-γ和血清中IgG水平,流式细胞术检测淋巴结和脾细胞中IL-17及Foxp3细胞频数。结果与对照组相比,EAE组IgG、IFN-γ、IL-17及IL-4水平均明显增高(P<0.05或P<0.01)。结论 Th1、Th2和Th17免疫细胞在EAE的发病均起着重要的作用。
- 马瑞夏海平马进
- 关键词：自身免疫性脑脊髓炎
- 辛伐他汀对急性脑梗死患者血脂、抵抗素、脂联素水平及颈动脉内膜—中层厚度的影响被引量：6
- 2013年
- 目的探讨辛伐他汀对急性脑梗死患者血脂、抵抗素、脂联素水平及颈动脉内膜—中层厚度(IMT)的影响。方法将急性脑梗死伴颈动脉硬化患者113例随机分为观察组(56例)和对照组(57例),对照组给予基础治疗,观察组在此基础上加用辛伐他汀40 mg口服,疗程均为3个月。2组于治疗前、治疗后检测血脂、抵抗素、脂联素及颈动脉内膜—中层厚度变化。结果与治疗前比较,2组治疗3个月后总胆醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、抵抗素水平、脑卒中量表(NIHSS)评分及颈动脉内膜—中层厚度均降低,且观察组较对照组降低更明显(P均<0.05);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、脂联素水平均升高,且观察组较对照组升高更明显(P<0.05)。相关性分析表明IMT与TC、TG、LDL-C抵抗素呈正相关(r=0.18、0.24、0.16、0.21,P均<0.05),而与脂联素、HDL-C呈负相关(r=-0.26、-0.23,P均<0.05)。结论他汀类药物治疗能有效降低急性脑梗死患者的血脂及抵抗素水平,有效延缓和逆转动脉粥样硬化斑块,减少急性脑梗死的发生。
- 任乃勇赵康仁张渭芳靳彪钱进军夏海平
- 关键词：辛伐他汀血脂抵抗素颈动脉内膜-中层厚度
