中央高校基本科研业务费专项资金(1511219013)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 相关作者：胡忠义杨华马慧陆俊梅陈海珍更多>>
- 相关机构：同济大学附属上海市肺科医院苏州大学山西省儿童医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生一般工业技术更多>>
- 纳米技术在结核病实验室诊断和治疗中的研究进展被引量：1
- 2012年
- 开发快速、有效的实验室诊断技术是结核病的研究热点之一。目前纳米技术在结核病的实验室诊断和治疗新技术方面已有一些研究报道，我们对纳米技术在结核病实验室诊断和治疗方面的研究进展综述如下。
- 马慧胡忠义王祎龙杨华
- 关键词：实验室诊断技术结核病
- 结核分枝杆菌环七肽配体分子的筛选和鉴定
- 2014年
- 目的 基于噬菌体展示随机环七肽库,通过亲和筛选获得结核分枝杆菌（MTB）环七肽配体分子,初步鉴定其与分枝杆菌的结合能力,以优化纳米检测.方法 以MTB标准株H37Rv灭活菌体为靶分子,卡介苗（BCG）为反筛分子,对噬菌体展示随机环七肽文库进行筛选.4轮淘选后,挑选H37Rv和BCG洗脱单噬菌体进行测序,ELISA检测单噬菌体与其亲和力将高亲和力单噬菌体所展示环肽进行体外合成,并标记荧光,荧光显微镜与流式细胞仪检测合成环肽的结合活性,并与前期获得的线性结合肽进行比较.结果 经过4轮亲合淘选,能与靶分子结合的噬菌体明显富集.单噬菌体测序共获得16种共同序列.ELISA检测显示,单噬菌体SB1、SB5、SB8、SB26与H37Rv和BCG的亲和力均较高,其吸光度值（A450）与阴性对照吸光度值（A450）比≥2.1,与3种非分枝杆菌不结合,确定为阳性克隆.流式细胞仪检测结果显示,H37Rv与环肽SB1、SB5、SB24、SB26结合的阳性细胞率分别为（73.2±6.3）％、（63.2±5.3）％、（32.9±3.1）％、（89.4±7.0）％;BCG与这4种环肽结合的阳性细胞率分别为（65.6±6.1）％、（48.6±4.5）％、（10.3±1.8）％、（86.6±7.9）％,H37Rv和BCG与4种环肽结合的阳性细胞率均高于H8[（4.0±1.0）％、（5.5±1.2）％].荧光显微镜观察结果显示,环肽SB1、SB5、SB24、SB26荧光肽均与H37Rv发生结合,荧光强度较强,与其他18种分枝杆菌均有一定的亲和力,但荧光强度弱于H37Rv,与3种非分枝杆菌均不结合.结论 本研究以环七肽库替代线性七肽库,成功筛选获得新的MTB配体分子,其与分枝杆菌的亲和力提高.
- 杨华马慧黄晓辰陆俊梅刘忠华胡忠义
- 关键词：配体肽库噬菌体展示
- 免疫磁珠荧光量子点技术检测结核分枝杆菌的方法学研究和初步评估被引量：1
- 2013年
- 目的建立免疫磁珠荧光量子点技术检测MTB的方法，探讨最佳检测条件并进行初步评估。方法以MTB标准株H37Rv、12种非结核分枝杆菌（NTM）标准株及3种非分枝杆菌为检测对象，免疫磁珠和功能化荧光量子点作用为对照组。利用湿化学方法制备纳米磁珠和荧光量子点，分别与MTB结合肽H8偶联，获得同时与H37Rv作用的免疫磁珠和功能化荧光量子点，形成三元复合物结构，通过测量荧光值及荧光显微镜观察判定样品中是否存在MTB，建立纳米技术检测MTB的新方法，进一步探讨免疫磁珠和功能化荧光量子点的最佳检测浓度及作用时间。利用菌悬液和模拟痰标本，对该检测方法的检测下限和特异度进行初步评估。结果偶联的免疫磁珠和功能化荧光量子点均能与H37Rv结合，镜下可见其与H37Rv作用的三元复合物，实验组与对照组的荧光值比值约为4：1；免疫磁珠和功能化荧光量子点最佳检测浓度均为100mg／L，最佳作用时间为2h；H37Rv菌悬液和模拟痰标本检测下限均为10。CFU／ml；特异度检测结果，3种非分枝杆菌在显微镜下均未见红色荧光，荧光值小于对照组，为阴性；12种NTM菌悬液和模拟痰标本检测时，仅副偶发分枝杆菌、金色分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和偶发分枝杆菌在显微镜下可见红色荧光，荧光值与对照组的比值均〉2，判断为阳性，其余均为阴性。结论免疫磁珠荧光量子点技术检测技术有可能成为检测MTB的新方法，但其临床应用价值尚有待进一步评估。
- 马慧胡忠义王祎龙秦莲花陈海珍陆俊梅杨华
- 关键词：分枝杆菌结核量子点免疫磁珠
- 结核分枝杆菌甲硫腺苷核苷酶的原核表达及活性分析
- 2012年
- 目的克隆、表达、鉴定结核分枝杆菌（MTB）Rv0091基因编码蛋白，分析酶活性，初步鉴定其功能。方法构建Rv0091基因原核表达质粒，在大肠杆菌BL21trxB进行表达，经IPTG诱导，Ni2＋-NTA柱纯化后获得可溶性蛋白，通过SDS-PAGE分析目的蛋白纯度、Westernblot进行免疫学活性鉴定、质谱分析重组蛋白相对分子质量、酶耦联法检测酶活性，分析酶学性质。结果成功构建Rv0091基因原核表达质粒，建立了可溶性蛋白最佳表达体系，获得纯度在95％以上的可溶性蛋白，Westernblot结果证实重组蛋白为结核分枝杆菌蛋白，质谱鉴定其相对分子质量与理论值基本一致，酶学活性实验证实重组蛋白能够分解底物5’一甲硫腺苷（MTA），酶学性质分析表明最适缓冲液为磷酸盐缓冲液和Hepes，酶的热稳定性较差，37℃为最适反应温度，最适pH为10～12。结论初步证明该重组蛋白在体外能够分解MTA，发挥甲硫腺苷核苷酶（MTAN）的作用，可能在MTB的代谢中起关键作用。
- 陈海珍杨华胡忠义杨焕森马慧高诗会郭琪柏文娟秦莲花李连青
- 关键词：结核分枝杆菌重组蛋白酶活性分析
- 免疫磁珠荧光量子点技术检测结核分枝杆菌被引量：4
- 2013年
- 目的筛选结核分枝杆菌(MTB)免疫磁珠荧光量子点检测方法的最佳配体组合。方法将本室筛选获得的MTB结合肽H8和商业化抗MTB多克隆抗体(Pab)与纳米磁珠偶联,多肽H8、商业化抗MTB单克隆抗体(Mab)和抗热休克蛋白65单克隆抗体(Mabc)与荧光量子点偶联,分别获得2种免疫磁珠和三种功能化荧光量子点,两两组合用于MTB检测,通过显微镜下观察荧光信号以及激光诱导荧光仪测量荧光值,判断不同配体组合与MTB的亲和性及特异性,获得最佳组合及其检测下限。结果偶联Mabc的荧光量子点与免疫磁珠MNP-Pab组合检测MTB结果为阴性,其余5组均为阳性。测量荧光值,检测效果较好的两组组合分别是MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8,阳性荧光值与阴性对照组比值分别是4.394和3.956,检测下限均是102条菌/mL。6组组合与12种非结核分枝杆菌(NTM)的亲和性各异,而与3种非分枝杆菌均不结合。结论 MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8两组检测效果较好,与MTB亲和性较高,特异性较好,可作为MTB免疫磁珠荧光量子点检测技术的最佳配体组合。
- 马慧王祎龙胡忠义秦莲花陈海珍陆俊梅王洁柏文娟郭琪高诗会杨华
- 关键词：免疫磁珠分枝杆菌结核配体
