上海市自然科学基金(06ZR14117)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：李明峰熊伟民侯静任军邸立军更多>>
- 相关机构：中国人民解放军北京市肿瘤防治研究所解放军第四五五医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 次级淋巴组织趋化因子(SLC)转染树突状细胞抗肝癌细胞特异性免疫的实验研究
- 2009年
- [目的]构建携带次级淋巴组织趋化因子(SLC)基因的重组腺相关病毒载体并转染肝癌患者外周血来源的树突状细胞(DC),探讨其对肝癌细胞特异性的免疫作用。[方法]采用PCR法扩增出SLC基因,将SLC基因片段克隆至腺相关病毒PAG-AAV载体上,GFP作为成功转染的示踪蛋白。经HEK293T细胞的包装扩增后得到携带SLC基因的重组腺相关病毒体外转然DC,制备AAV-SLC-DC疫苗,流式细胞仪检测感染率,免疫荧光、RT-PCR法检测SLC表达。并以MTT法检测DC刺激T淋巴细胞增殖能力(MLR)及对肝癌细胞株HepG2的CTL效应。[结果]成功得到SLC基因,并将SLC基因片段克隆至PAG-AAV载体上,可检测到序列正确的SLC基因的正确表达,经HEK293T细胞包装出病毒颗粒;测定病毒滴度为6.3×1010μg/ml。重组腺相关病毒PAG-AAV-SLC体外感染DC,流式细胞仪检测感染率达48.37%。SLC基因转染不影响DC的表型表达,与对照组无显著差异(P>0.05);转染后DC较对照组有较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力;并可诱导出特异性的CTL效应,不同效靶比与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。[结论]构建的重组SLC腺相关病毒可将SLC基因导入树突状细胞(DC)内并正确表达,并可诱导出对肝癌细胞特异性的CTL效应,为进一步研究SLC基因修饰的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用提供了实验基础。
- 李明峰侯静熊伟民邸立军任军
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子树突状细胞腺相关病毒
- 次级淋巴组织趋化因子和甲胎蛋白共修饰的树突状细胞诱导特异性抗肝癌免疫作用的研究被引量：4
- 2010年
- 背景与目的:树突状细胞(dendritic cell,DC)是迄今发现的抗原呈递功能最强的专职抗原呈递细胞,近年来以DC为基础的肿瘤基因免疫治疗研究倍受瞩目。病毒载体介导的基因转移以其高效和良好的靶向性已被广泛应用于肿瘤基因治疗。本实验拟制备携带人AFP和SLC基因的慢病毒表达载体,并于体外感染CD34+造血干细胞来源的DC,诱导DC产生特异性抗肝癌细胞免疫作用,观察其对肝癌细胞株的杀伤作用。方法:采用化疗和集落刺激因子动员的肝癌患者外周血造血干细胞,血细胞分离机采集CD34+造血干细胞,IL-4、GM-CSF联合TNF-α刺激CD34+细胞分化为DC。并检测经Lenti-AFP/Lenti-SLC转染致敏后的DC对CTL增殖的影响,并检测其对人肝癌细胞HepG2的作用。结果:经细胞因子刺激诱导培养的DC具有典型的分枝状突起,高表达CD1a、CD11c、CD80和CD86。MTT法检测Lenti-AFP/Lenti-SLC抗原冲击的DC能明显诱导CTL增殖。此CTL对表达AFP的肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著性高于未转染DC组和无DC组(P<0.05和P<0.01),效靶比为50:1时杀伤效应达到最高峰(P<0.01)。结论:Lenti-AFP/Lenti-SLC抗原转染的DC在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对AFP阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗奠定了基础。
- 侯静李明峰熊伟民何新颖邸立军任军
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子甲胎蛋白树突状细胞细胞毒性T淋巴细胞肝癌
- PGE_2促进人脐血CD34^+造血祖细胞向淋巴样树突状细胞分化
- 2010年
- 为了探讨前列腺素E2(protaglandin E2,PGE2)对人外周血CD14+单核细胞和脐血CD34+造血祖细胞(hematopoieticprogenitor cells,HPC)体外诱导pDC分化的影响。分别采用IL-4+GM-CSF+TNF-α和SCF+Flt-3L+GM-CSF+TNF-α诱导人外周血CD14+单核细胞和CD34+HPC向pDC分化,采用流式细胞仪分析细胞表型,并观察PGE2加入培养体系后对pDC分化的影响。结果:以CD34+HPC为来源,比CD14+单核细胞能诱导出更多数量且具有功能的pDC。培养体系中加入PGE2显著增强了CD34+HPC向pDC的分化,而对CD14+单核细胞的分化却无明显促进作用。PGE2可有效促进脐血CD34+HPC在多种细胞因子的作用下向pDC的成熟分化。
- 侯静李明峰熊伟民顾剑锋陈兆远张雁云
- 关键词：前列腺素E2
- 携带AFP基因慢病毒载体制备并感染树突状细胞的实验研究被引量：6
- 2009年
- 目的:制备携带AFP基因的慢病毒,并体外感染树突状细胞(DC),制备AFP-DC疫苗。方法:以人HepG2肝癌细胞cDNA为模板PCR扩增出AFP基因片段,将该片段克隆入慢病毒载体,构建成Lenti-AFP慢病毒载体。其后,用慢病毒载体转染293T细胞,包装慢病毒表达载体。通过酶切、PCR对Lenti-AFP慢病毒载体进行鉴定。包装好的慢病毒体外感染DC,制备AFP-DC疫苗,流式细胞仪检测感染率,免疫荧光、RT-PCR法及电化学发光法检测AFP表达。结果:酶切、PCR鉴定证实,慢病毒载体插入片段为AFP基因。包装的慢病毒具有良好的感染性,可以在293T细胞中形成病毒颗粒,携带AFP基因的慢病毒感染DC,经免疫荧光、RT-PCR法及电化学发光法证实DC能够表达转染基因AFP,并且不会影响DC表型,感染率高达78.91%。结论:成功构建携带AFP基因的慢病毒载体,感染树突状细胞后表达AFP,为DC疫苗在肝癌中的临床应用提供了实验基础。
- 李明峰侯静熊伟民邸立军任军
- 关键词：甲胎蛋白慢病毒基因转染树突状细胞
