国家自然科学基金(30972965)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- Dll4/Notch通路与肿瘤血管形成被引量：2
- 2009年
- Notch是一个高度保守的跨膜受体蛋白家族,广泛存在于无脊椎以及脊椎动物体内。有5种Notch配体存在于哺乳动物体内,分别为Dll1、Dll3、Dll4、Jagged1和Jag-ged2。它们和Notch1-4的4个受体通过相邻细胞膜表面的接触、结合来激活Notch信号通路,发挥一系列的生物学调控功能。
- 丁新宇徐志飞
- 关键词：肿瘤血管形成NOTCH配体JAGGED1胞膜表面
- 人肺腺癌TLE1N端Q结构域片段在原核系统表达纯化及其多克隆抗体的制备
- 2010年
- 背景与目的 TLE1是参与Wnt、Notch以及EGFR信号通路调控的一种重要蛋白。TLE1N端Q结构域片段通过介导自身寡聚化及与LEF1结合发挥调控作用。本实验旨在构建人TLE1N端Q区基因在大肠杆菌的融合表达载体,制备并纯化人TLE1N端Q结构域蛋白片段,制备TLE1Q结构域多克隆抗体。方法以人肺腺癌cDNA库为模板聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)特异性扩增TLE1-Q(1-136)基因序列,与pGEX-4T-1质粒连接后转化感受态大肠杆菌E.coli。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D thiogalactoside,IPTG)诱导表达产生融合蛋白GST-TLE1-Q(1-136)。经亲和层析,rombin酶切,FPLC纯化,SDS-PAGE鉴定目的蛋白TLE1-Q(1-136)。免疫家兔,制备多克隆抗体。结果测序证实重组表达质粒中的人TLE1N端Q结构域基因序列正确,成功构建表达型重组质粒pGEX-4T1-TLE1-Q。重组质粒转化大肠杆菌C+后,经诱导,重组蛋白GST-TLE1-Q(1-136)得到表达。SDS-PAGE鉴定示纯化蛋白为目的蛋白人TLE1N端Q结构域片段TLE1-Q(1-136)。免疫家兔后收获抗血清,ELISA显示抗体效价为1:20000,具有高度特异性。免疫印迹结果显示,制备的多抗可与TLE1-Q(1-136)蛋白特异性结合。结论成功构建了人TLE1N端Q结构域重组融合蛋白表达质粒pGEX-4T1-TLE1-Q,表达纯化了稳定可溶TLE1N端Q结构域蛋白TLE1-Q(1-136),制备了人TLE1N端Q结构域蛋白片段多克隆抗体,为进一步研究TLE1在肺癌生成中的作用奠定了基础。
- 王苏徐志飞唐华魏凌云赵学维
- 关键词：蛋白纯化多克隆抗体
