国家自然科学基金(30972945)
- 作品数：5 被引量：10H指数：3
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- 新鲜与短期培养胰岛细胞移植对移植胰岛存活的影响被引量：2
- 2013年
- 目的观察新鲜和短期培养后的小鼠胰岛细胞对移植后胰岛的再血管化及功能的影响。方法 C57小鼠作为胰腺供体,胆总管灌注胶原酶P溶液消化胰腺,Ficoll 400不连续梯度纯化获得胰岛细胞。接受不同胰岛细胞肾被膜下移植的受体糖尿病C57小鼠随机分成三组(n=10):A组接受新鲜胰岛细胞移植,B、C组分别接受培养1、3 d的胰岛细胞移植。术后观察血糖变化并于移植后第14天取移植胰岛,分别进行HE染色和胰岛素、CD31免疫组织化学染色,并计算微血管密度。结果胰岛细胞移植后3 d内,三组小鼠的随机血糖浓度均<11.0 mmol/L。A组小鼠在移植后第14天时的血糖浓度仍<11.0 mmol/L,而B、C组小鼠血糖浓度在移植3 d后呈现持续上升,此后各时间点的血糖浓度均显著高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学胰岛素染色结果显示:A组小鼠肾被膜下成团的细胞被染成棕褐色,B、C组类似细胞团仅有少量着色。免疫组织化学CD31染色发现,A组小鼠肾被膜下移植细胞团内部有大量细胞胞质被染成棕黄色,而B组和C组仅有少量细胞着色;A组肾被膜下胰岛内微血管密度显著高于B、C组(P<0.05)。结论小鼠新鲜胰岛细胞移植较短期培养后胰岛细胞移植更有利于移植胰岛的再血管化及存活。
- 唐成佳杜成友刘定志潘龙
- 关键词：胰岛移植糖尿病小鼠
- FK506对糖尿病小鼠胰岛移植物功能及再血管化的影响
- 2013年
- 目的探讨小鼠胰岛移植术后服用他克莫司（FK506）对胰岛移植物生物学功能及再血管化的影响。方法小鼠胰腺经胶原酶P灌注消化后，Ficoll．400不连续密度梯度离心提纯并培养制备供体胰岛。1型糖尿病受体小鼠接受肾被膜下胰岛移植并分成两组：单纯同系基因胰岛移植组（PIT组）和同系基因胰岛移植后加用FK506组（PIT＋FK506组）。监测受体小鼠血糖浓度的变化，观察移植物组织学形态、胰岛素分泌功能及新生血管生成情况。结果两组小鼠各时间点血糖浓度的变化差异无统计学意义（P〉0．05）。组织形态学观察发现两组小鼠胰岛移植物均存活良好，无明显差别。移植后第3～5天和第20天，PIT＋FK506组移植物血管内皮生长因子（VEGF）和CD34表达均较PIT组有所降低；PIT组肾被膜下移植物微血管密度分别为16．6±1．3和96．7±2．3，PIT＋FK506组分别为9．3±1．0和61．0±2．7，相同时间点两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论治疗剂量的FK506可在一定程度上抑制胰岛移植物的再血管化，但不会直接影响胰岛细胞的生物学功能。
- 莫玲斐杜成友潘龙王霆
- 关键词：糖尿病胰岛移植再血管化FK506小鼠
- 不同浓度肿瘤细胞上清液对成纤维细胞生长及表型转化的影响被引量：4
- 2011年
- 目的利用含不同浓度肿瘤细胞上清液的条件培养液培养成纤维细胞,观察其对成纤维细胞的生长及表型变化的影响。方法用MTT法和流式细胞凋亡术测定成纤维细胞的生长变化与凋亡率。用RT-PCR检测成纤维细胞转化为肌成纤维细胞后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。用Western blot检测α-SMA、TGF-β1蛋白的表达。结果 MTT法发现肿瘤细胞上清液与2×DMEM∶F12比例为1∶1时,对成纤维细胞的生长有明显的促进作用,其生长速度快于其他浓度(P<0.05)。流式细胞凋亡术检测表明随着肿瘤细胞上清液浓度的提高,成纤维细胞的凋亡率也上升,1∶1的凋亡率与1.5∶1时有差异(P<0.05)。RT-PCR、Western blot表明普通培养液培养的成纤维细胞α-SMA与TGF-β1的表达高峰在第5天,第7天下降明显(P<0.05)。当比例为1∶1时,α-SMA与TGF-β1的表达增加,高峰提前到第3天(P<0.05),第3天以后α-SMA的表达稳定(P=0.96,P=0.21)。结论当肿瘤细胞上清液与2×DMEM∶F12比例为1∶1时,能有效促进成纤维细胞的生长,并促使成纤维细胞向肌成纤维细胞稳定的转化。
- 肖衡杜成友罗诗樵刘定志
- 关键词：成纤维细胞肌成纤维细胞Α-平滑肌肌动蛋白转化生长因子Β1
- 肿瘤细胞上清液对成纤维细胞表型转变及血管内皮生长因子-A表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的检测肿瘤细胞上清液对成纤维细胞的激活情况及激活后血管内皮生长因子-A(VEGF-A)表达的变化规律。方法 MTT法检测普通培养液、含转化生长因子-β1(TGF-β1)的普通培养液以及肿瘤细胞上清液组成的条件培养液对成纤维细胞生长情况的影响,用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学法检测不同培养条件下成纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与VEGF-A的表达。结果肿瘤细胞上清液对成纤维细胞的生长有一定的促进作用。含TGF-β1的普通培养液比普通培养液更有利于成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,并且能维持肌成纤维细胞的表型,但是二者均不表达VEGF-A;条件培养液能促进成纤维细胞稳定表达α-SMA和VEGF-A,二者在培养后第1天均开始表达,第3天表达量达到峰值,第3天以后表达稳定。结论肿瘤细胞上清液能够有效、稳定地激活成纤维细胞为肌成纤维细胞,成纤维细胞的激活程度影响VEGF-A的表达,二者均具有最佳的激活时间点,并且最佳时间点相一致,最佳激活点的成纤维细胞有望成为一种可用于移植的促进血管重建的细胞。
- 肖衡杜成友罗诗樵刘定志潘龙
- 关键词：成纤维细胞肌成纤维细胞转化生长因子血管内皮生长因子Α-平滑肌肌动蛋白
- 三种消化酶分离胰岛对移植胰岛存活的影响被引量：3
- 2012年
- 目的比较三种消化酶分离胰岛的效率和质量及对移植胰岛存活的影响,为临床胰岛移植消化酶的选取提供参考。方法相同条件下采用Liberase TL(A1组)、Collagenase P(B1组)和CollagenaseⅤ(C1组)(n=35)消化酶消化小鼠胰腺,Ficoll-400密度梯度纯化获得胰岛;DTZ染色观察胰岛细胞形态,并计算IEQ(直径>150μm的胰岛细胞团定义为1个IEQ)和纯度;锥虫蓝染色检测胰岛细胞成活率。C57BL/6糖尿病(DM)小鼠作为受体分为A2、B2和C2三组(n=7),采用同基因胰岛肾被膜下移植,监测术后血糖浓度变化;于移植成功后15 d切取移植物,HE染色观察组织学变化。结果 3种消化酶分离C57BL/6小鼠胰腺可获得的IEQ、胰岛纯度和胰岛细胞成活率均为A1组>B1组>C1组,三组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。每只受体小鼠移植(900±30)个IEQ胰岛;移植前各组小鼠血糖浓度比较差异均无统计学意义(P>0.05);植术后第2天血糖浓度达最低值,第3天有一个短暂的回升,随后达到一个相对较平稳的状态,至第13天血糖浓度依次为A2组
- 刘定志杜成友罗诗樵肖衡潘龙
- 关键词：胰岛移植同基因胶原酶
