国家自然科学基金(30170349)
- 作品数：4 被引量：11H指数：1
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- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 用抗细胞表面分子单链抗体筛选和鉴别其相互作用肽
- 2005年
- 展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分离单个阳性噬斑,并对其表达产物做电泳分析及斑点杂交。结果鉴别出1个scFv-C193结合肽,scFv-C193+克隆噬菌体DNA插入片段的PCR扩增和序列分析结果表明它是1个43bpDNA片段表达产物。BLAST分析EST人类基因数据库,发现它97%相同于CD34+造血干/祖细胞mRNA的1-43bp,提示scFv-C193识别片段存在于人类造血干/祖细胞基因中,单克隆单链抗体scFv-C193可能用于研究这些人类基因的性质。
- 许静李侠刘俊霞何一心韩忠朝宋增璇
- 关键词：抗体筛选表面分子相互作用CD34^+基因数据库人胎肝
- 特异性抗细胞表面分子单链抗体的分离和鉴定
- 2007年
- 目的:从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离和鉴定抗造血干/祖细胞表面分子单链抗体(scFv),克隆其基因并研究其对应抗原在不同细胞表面的分布。方法:用完整的KG1a细胞吸附法富集文库3轮,再用CD44单克隆抗体为引导分子进行引导选择,分离单克隆后用间接免疫荧光法鉴别其细胞结合特异性。对具有不同细胞结合特异性的克隆进行DNA序列分析,用一级结构不同的单链抗体作免疫印迹鉴别抗原分子量。结果:间接免疫荧光结果显示,64个阳性克隆分别识别不同的细胞系,分属3种细胞结合谱,DNA序列测定结果证明C95、H1两个克隆具有独特的一级结构,利用Westernblot成功测定它们特异性识别KG1a细胞膜蛋白的表观分子量分别为34kD/22kD。结论:成功建立了分离和鉴定抗细胞表面分子phage-scFv单克隆的方法,并从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离出2个抗造血干/祖细胞的特异性克隆。
- 许静吴立华徐洁刘俊霞孟磊何一心宋增璇
- 关键词：噬菌体展示表面分子单链抗体
- 原核表达载体pOPE101-8E5的改构及单链抗体的表达鉴定
- 2007年
- 利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3′端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4∷core-streptavidin。将该表达载体转化入在大肠杆菌中进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析表达产物的表达量和产物活性。结果提示成功地获得一个分子量约为45kDa的scFv-C4∷core-streptavidin的融合蛋白,它可结合KG1a细胞裂解物中分子量约为60kDa、45kDa的蛋白带,且其结合功能可以通过融合蛋白中的链亲和素基因直接测定。
- 许静刁世勇张磊徐洁孟磊
- 关键词：链亲和素单链抗体融合蛋白
- 单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的制备被引量：11
- 2003年
- 目的 :制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白。方法 :把碱性磷酸酶编码区插入pSTE2 8E5质粒DNA ,用scFvC6 6的重链和轻链可变区DNA取代scFv 8E5的重链和轻链可变区DNA ,构成表达载体pSTE2 C6 6 Ap在大肠杆菌中表达 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析产物活性。结果 :获得一个分子量为 75kD的scFvC6 6 Ap融合蛋白 ,可结合来自KG1a细胞裂解物中的一个分子量约 6 0kD的蛋白质带 ,其结合功能可通过其碱性磷酸酶活性直接测定。结论 :建立了一个用大肠杆菌制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白的方法 ,它可能取代常规的碱性磷酸酶标记方法而用于免疫检测。
- 许静刘俊霞李侠宋增璇
- 关键词：单链抗体碱性磷酸酶融合蛋白
