国家自然科学基金(30170362)
- 作品数：7 被引量：41H指数：4
- 相关作者：郑德先刘彦信刘士廉张锦春史娟更多>>
- 相关机构：中国医学科学院中国协和医科大学中国医学科学院基础医学研究所中国医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组可溶性TRAIL的表达与生物学活性被引量：18
- 2003年
- 研究重组可溶性TRAIL的抗肿瘤生物学活性。采用基因分子生物学方法构建重组可溶性TRAIL的表达载体 ,建立大肠杆菌表达菌株 ,采用柱层析等方法获得纯化的重组可溶性TRAIL ;采用流式细胞术、细胞活性测定法和体内药效学实验分析重组可溶性TRAIL杀伤肿瘤细胞的生物学活性。结果表明重组可溶性TRAIL在体外可诱导人白血病细胞和肝癌细胞凋亡 ,凋亡率达5 0 %以上。中枢神经系统的肿瘤细胞对重组可溶性TRAIL不敏感。重组可溶性TRAIL在体内能显著抑制人非小细胞肺癌细胞在小鼠体内生长 ,抑制率达 70 %以上。结论为研究制备的重组可溶性TRAIL能在体内外杀死多种肿瘤细胞 ,具有显著的临床应用前景。
- 史娟张锦春畅晓燕刘士廉刘彦信郑德先
- 关键词：生物学活性肿瘤细胞凋亡
- Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡被引量：4
- 2005年
- 目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK、TJK和T3JK细胞 ,诱导细胞凋亡 ,用MTS比色法检测细胞死亡率 ,用Westernblot检测Bid的表达和活化。用脂质体的方法转染细胞。结果 :CD3ε特异的单克隆抗体和 5 FU分别单独处理TJK细胞 ,都能诱导其凋亡并伴随Bid的活化 ,二者联合使用能显著增加TJK细胞凋亡和Bid的活化。Bcl 2过表达可明显降低TJK细胞对 5 FU的敏感性。结论 :Bcl 2家族成员参与CD3ε和 5 FU诱导的T淋巴细胞凋亡的调节 ,Bcl 2过表达能显著抑制T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。
- 程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先
- 关键词：5-FUBID细胞凋亡
- CD3ε和5-氟尿嘧啶在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P53的表达被引量：8
- 2003年
- 目的 研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法 培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM的TJK及T3JK细胞株。用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 /或 5 FU(2 5 μg/ml)刺激不同的T淋巴细胞诱导细胞凋亡 ,用噻唑蓝比色法检测细胞存活率 ,并计算细胞死亡率 ;用瞬时转染野生型或突变型P5 3表达质粒的方法和Western印迹检测P5 3蛋白质的表达 ,分析其在T淋巴细胞凋亡中的作用。结果 在CD3ε和 5 FU分别诱导T淋巴细胞凋亡过程中 ,均伴随着P5 3蛋白质表达增加 ;两者联合使用使T淋巴细胞凋亡和P5 3蛋白质表达显著增加 ;P5 3过表达可明显增加T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。结论 抗CD3ε抗体和 5 FU联合作用可显著提高P5 3蛋白质表达 ,两者在T淋巴细胞凋亡中具有协同效应。
- 程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先
- 关键词：5-氟尿嘧啶T淋巴细胞凋亡P53单克隆抗体
- 口服AAV介导的TRAIL基因在肝癌治疗中的应用
- 肿瘤基因治疗是将肿瘤抑制基因、自杀基因或免疫基因通过不同途径导入人体靶细胞以发挥抗肿瘤作用,从而达到治疗目的。实践中,肿瘤基因治疗要取得突破,必须解决以下三个关键问题,即基因导入系统(基因治疗载体)、基因表达的特异性和可...
- 马宏郑德先刘彦信
- 文献传递
- ERBIN蛋白PDZ结构域结合蛋白的筛选和鉴定
- 2007年
- 目的筛选和鉴定ERBIN蛋白的PDZ结构域结合蛋白。方法以ERBIN蛋白的PDZ结构域为诱饵,采用酵母双杂交系统从人淋巴细胞白血病细胞系的MATCHMAKER cDNA文库中筛选ERBIN PDZ结合蛋白,使用β-半乳糖苷酶(LacZ)活性的定性分析和免疫共沉淀技术鉴定所获结合蛋白识别和结合ERBIN PDZ结构域的结合特性。结果TAX1蛋白能选择性与ERBIN蛋白的PDZ结构域发生特异性结合。结论TAX1蛋白是ERBIN结合蛋白家族中的一个新成员。
- 宋春娇郑德先刘彦信
- 关键词：ERBIN酵母双杂交免疫共沉淀
- 腺相关病毒介导的肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体的表达及其体外抗肿瘤活性的研究被引量：6
- 2004年
- 目的 研究腺相关病毒 (AAV)介导的重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL114 2 81)在体内外的表达规律及其杀伤肿瘤细胞的生物学活性 ,探讨重组腺相关病毒用于肿瘤基因治疗的应用前景。方法 构建编码TRAIL胞外区 114 2 81位氨基酸的多肽的重组腺相关病毒载体rAAV TRAIL114 2 81,转染HEK2 93人胚肾细胞 ,获得高滴度的重组病毒颗粒后 ,转导人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat、人肝癌细胞株HepG2和SMMC 772 1以及人宫颈癌细胞株HeLa等 ,并采用经C5 7BL/ 6小鼠门静脉输入、皮下注射、肌内注射、腹腔注射或口服等不同给药途径 ,研究重组腺相关病毒介导的TRAIL114 2 81蛋白在体内外的表达规律。采用实时PCR方法测定重组病毒滴度。采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)、Western印迹法和免疫组化法测定蛋白表达。采用MTT法测定重组rAAV TRAIL114 2 81杀伤肿瘤细胞的生物学活性。结果 成功地获得了rAAV TRAIL114 2 81重组病毒 ,其滴度为每毫升 7 5× 10 12基因组颗粒数 (Gps/ml)。重组病毒转导使TRAIL114 2 81在宿主细胞中高效表达 ,并可显著诱导Jurkat、HeLa和SMMC 772 1等肿瘤细胞凋亡 ,但不能诱导HepG2细胞凋亡。体内实验中 ,经小鼠门静脉输入重组病毒 ,可使TRAIL114 2
- 马宏刘彦信刘士廉许瑞安郑德先
- 关键词：介导重组腺相关病毒重组病毒滴度体外抗肿瘤活性
- 化疗药物增强重组可溶性TRAIL抗肿瘤作用被引量：6
- 2004年
- 目的探讨化疗药物对重组可溶性TRAIL穴rsTRAIL雪抗肿瘤作用的影响及其分子机制。方法13株不同肿瘤细胞经rsTRAIL处理后,采用MTS-PMS染色法和流式细胞仪技术测定细胞凋亡率,观察肿瘤细胞对rsTRAIL的敏感性;化疗药物与rsTRAIL联合作用于敏感性不同的肿瘤细胞检测细胞敏感性的变化;免疫印迹技术分析TRAIL受体DR5蛋白表达。结果13株肿瘤细胞中约46.2%穴6/13雪的细胞株对rsTRAIL敏感;化疗药物CHX、CP和8-CA可显著提高肿瘤细胞株对rsTRAIL细胞毒作用的敏感性;8-CA和TRAIL联合作用可上调DR5的蛋白表达。结论化疗药物CHX、CP和8-CA可增强rsTRAIL的抗肿瘤作用。
- 王明婕刘彦信李晓玲史娟刘士廉郑德先
- 关键词：化疗药物细胞凋亡DR5
- DIFF33H参与TRAIL诱导的人Jurkat T淋巴细胞白血病细胞凋亡调控
- 2004年
- 目的 :研究DIFF33H在人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡中的表达规律及其生物学功能。方法 :采用PCR扩增DIFF33HcDNA ,Northernblot分析DIFF33H的mRNA表达 ,MTT法测定细胞凋亡。结果 :在重组可溶性TRAIL诱导的人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡过程中 ,DIFF33HmRNA的表达水平随着Jurkat细胞的凋亡而下降 ,并对重组可溶性TRAIL的作用具有浓度和时间的依赖性。在抗肿瘤药物 5 FU诱导肿瘤细胞凋亡过程中 ,DIFF33H的mRNA表达水平也显著下降。结论 :DIFF33H参与人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡的调控。
- 邹耀中刘彦信郑德先
- 关键词：TRAILJURKAT细胞凋亡
