国家自然科学基金(30170367)
- 作品数：11 被引量：74H指数：6
- 相关作者：梁华平徐祥杨文军郝天智时德更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院重庆医科大学附属第一医院温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 核因子-κB圈套寡核苷酸对核因子-κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响被引量：6
- 2004年
- 目的 探讨核因子 (NF) -κB圈套寡核苷酸 (ODN)对NF -κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响。 方法 利用电泳迁移率改变实验 (EMSA) ,测定合成的环状哑铃形圈套ODN对NF -κB的DNA结合能力的竞争抑制作用 ;利用NF -κB反应性报告细胞株HEK -不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP) ,观察圈套ODN瞬时转染对报告基因表达的影响。Wistar大鼠 96只 ,随机分为对照组、创伤性炎症组、圈套ODN组和无关ODN组。利用EMSA检测各组肝脏组织NF -κB的DNA结合活性 ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)检测大鼠肝脏组织TNF -α、白细胞介素 - 6 (IL - 6 )mRNA水平 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测大鼠肝脏组织肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)、IL - 6的蛋白水平。 结果 设计的环状哑铃形圈套ODN对NF -κB的DNA结合能力具有竞争抑制作用 ,1 μg ml和 2 μg ml圈套ODN瞬时转染HEK -d2EGFP ,可明显抑制p6 5蛋白诱导的d2EGFP表达。大鼠创伤性炎症后 3h ,肝脏NF -κB活性开始升高 ,伤后 1 2h达高峰。肝脏组织TNF -α、IL - 6mRNA水平和蛋白水平也明显上升 ,与NF -κB的活性改变一致。圈套ODN治疗后 ,大鼠肝脏组织TNF -α、IL - 6的表达明显下降 ,肝脏功能明显好转 ,而无关ODN则没有治疗效果。 结论 设计的靶向NF
- 梁华平徐祥杨文军王付龙刘东擘胡承香王正国
- 关键词：ODN鼠肝DNA结合EGFP
- 圈套ODNs影响IL-10表达的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的本实验设计合成靶向核因子κB(NF-κB)的哑铃形圈套寡核苷酸(ODNs),并验证其对白介素10(IL-10)的作用。方法以阳离子脂质体为载体,将圈套ODNs转染大鼠pMф细胞6h后用LPS(10μg/m l)刺激,用ELISA法及RT-PCR法测圈套ODNs对IL-10在蛋白及mRNA水平的影响。结果哑铃形圈套ODNs可降低在IL-10mRNA及蛋白水平的表达。结论靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs具有抗IL-10的作用。
- 国华孙磊胡宏伟
- 关键词：NF-KBIL-10
- 核因子-κB活性在创伤性炎症大鼠肝脏损伤中的变化及其意义被引量：6
- 2006年
- 目的探讨核因子-κB(NF-κB)活性在创伤性炎症大鼠肝脏损伤中的变化及其意义。方法 Wistar 大鼠60只,随机分成对照组和创伤性炎症组。运用匀浆法提取肝细胞的核蛋白,运用凝胶阻滞实验检测创伤性炎症术后肝脏组织NF-κB的活性,检测血浆转氨酶的水平,在光镜下观察肝细胞损伤程度,电镜下观察肝脏超微结构改变,以线粒体的肿胀程度作为肝细胞损伤的评价指标。结果大鼠创伤性炎症术后第3小时,肝脏NF- κB的活性开始升高,第12小时达高峰,第72小时后基本降至正常。血浆ALT含量在伤后明显上升,于第24小时达高峰,同时肝细胞出现明显的水肿、变性和坏死,肝小叶结构破坏明显。结论大鼠创伤性炎症肝脏损伤后,NF-κB活性明显升高,与肝脏结构和功能改变基本一致,NF-κB在创伤性炎症肝脏损伤中具有重要意义。
- 杨文军余正平张启瑜宋其同梁华平徐祥朱冠保施红旗蒋飞照
- 关键词：肝细胞创伤性炎症核因子-KB
- 寡核苷酸转染原代培养pMφ的研究
- 2008年
- 目的研究阳离子脂质体为载体的寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)转染原代培养的大鼠腹腔巨噬细胞(pMφ)的时相关系、分布以及转染效率。方法以阳离子脂质体为载体,将荧光标记的圈套ODNs(2.0μg/ml)转染入纯化的大鼠pMφ细胞,分别在30 min、1 h,3 h,6 h,9 h,12 h,18 h,24 h用荧光显微镜及激光共聚焦显微镜观察荧光标记的圈套ODNs在细胞内的动态变化。结果荧光显微镜下转染30 min细胞内便有荧光标记的圈套ODNs出现,转染6~12 h细胞内的荧光最强。激光共聚焦显微镜显示转染30min细胞内荧光标记的圈套ODNs主要分布在胞浆内,随着时间的延长,细胞内尤其胞核内的荧光越来越强,转染6~12h细胞内的荧光最强。Results:结论以阳离子脂质体为载体的哑铃形圈套ODNs可转染入大鼠pMφ细胞并分布于胞浆及胞核。
- 国华孟兆珂孙功成胡宏伟
- 关键词：寡核苷酸转染阳离子脂质体
- 靶向NF-κB的圈套ODNs拮抗pMφTNFα表达的实验研究
- 2003年
- 目的 本实验设计合成靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs,并验证其抗TNFα生成效应。方法 以阳离子脂质体为载体 ,将圈套ODNs转染大鼠pM细胞 6小时后用LPS(脂多糖 ) 10 μg ml刺激 ,用ELISA法及RT PCR法测圈套ODNs对TNFα蛋白及mRNA水平的影响。结果 哑铃形圈套ODNs可明显降低TNFα在mRNA及蛋白水平的表达。结论 靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs具有下调炎性介质TNFα的表达。
- 国华梁华平吕凤林徐祥郝天智王付龙杨文军
- 关键词：NF-ΚB抗炎治疗
- 核因子-κB靶向性寡核苷酸“圈套”策略对创伤性炎症大鼠肝脏损伤的作用被引量：14
- 2003年
- 目的 探讨核因子 κB(NF κB)靶向性寡核苷酸 (ODN )“圈套”策略对创伤性炎症大鼠肝脏损伤的作用。方法 Wistar大鼠 96只 ,随机分成对照组、创伤性炎症组、“圈套”ODN组和变异“圈套”ODN组 ,各组动物分别于术后 3、6、12、2 4、48和 72h分批处死。运用凝胶迁移变动分析 (EMSA)检测创伤性炎症术后肝脏组织NF κB的活性及合成“圈套”ODN的体外竞争抑制试验。检测血清转氨酶水平 ,在光镜下观察肝细胞损伤程度 ,电镜下观察肝脏超微结构改变 ,以线粒体的肿胀程度作为肝细胞损伤的评价指标。结果 创伤性炎症后 3h肝脏NF κB的活性开始升高 ,12h达高峰 ,72h后基本恢复正常。“圈套”ODN在体外能有效地抑制NF κB活性。血清ALT含量在伤后明显上升 ,于 2 4h达高峰 ,肝细胞出现明显的水肿、变性和坏死 ,肝小叶结构破坏明显。“圈套”ODN治疗 6h后 ,大鼠血清ALT水平明显降低 ,肝小叶结构损伤明显好转 ,线粒体的肿胀明显减轻。结论 NF κB靶向性“圈套”ODN通过特异性抑制NF κB活性 。
- 杨文军梁华平徐祥李德卫时德郝天智
- 关键词：创伤性炎症核因子-ΚB肝脏损伤
- 核因子-кB靶向性寡核苷酸“圈套”策略对创伤性炎症大鼠肝脏TNF-α的作用被引量：6
- 2004年
- 目的 探讨NF кB靶向性寡核苷酸 (ODN)“圈套”策略对创伤性炎症大鼠肝脏TNF α的作用。方法 Wistar大鼠 96只 ,随机分成对照组、创伤性炎症组、“圈套”ODN组和变异“圈套”ODN组。运用凝胶阻滞实验检测创伤性炎症术后肝脏组织NF кB的活性及合成“圈套”ODN的体外竞争抑制试验 ,用RT PCR检测大鼠肝脏组织TNF αmRNA水平 ,ELISA检测大鼠肝脏组织TNF α的蛋白水平。结果 大鼠创伤性炎症术后 3h肝脏NF кB的活性开始升高 ,术后 12h达高峰。肝脏组织TNF αmRNA水平和蛋白水平也明显上升 ,与NF кB的活性改变一致 ,“圈套”ODN在体外能有效地抑制NF кB活性。“圈套”ODN治疗后大鼠肝脏组织TNF α的表达明显下降 ,肝脏功能明显好转 ,而变异“圈套”ODN没有效果。结论 NF кB靶向性“圈套”ODN通过特异性抑制NF кB活性 ,可以有效地抑制创伤性炎症大鼠肝脏炎症介质TNF α的释放 ,从而改善肝脏功能。
- 杨文军梁华平徐祥时德郝天智国华李德卫
- 关键词：创伤性炎症
- 锁核酸研究进展被引量：14
- 2003年
- 锁核酸 (lockednucleicacid ,LNA)是一种新型的寡核酸衍生物 ,结构中 β D 呋喃核糖的 2’ O ,4’ C位通过缩水作用形成环形的氧亚甲基桥、硫亚甲基桥或胺亚甲基桥 ,呋喃糖的结构锁定在C3’内型的N构型 ,形成了刚性的缩合结构。LNA作为一种新的反义核酸 ,具有与DNA/RNA强大的杂交亲和力、反义活性、抗核酸酶能力、水溶性好及体内无毒性等优点。LNA在基因诊断和基因治疗上有很多优势 ,如 :单链核酸的多态性基因分型、LNA寡聚体具有高效抑制端粒酶活性及LNA修饰的DNA核酶 (LNAzymes)高效清除高级结构的RNA等 。
- 李生茂徐祥梁华平李磊
- 关键词：锁核酸寡聚核苷酸基因诊断
- 圈套寡核苷酸影响腹腔巨噬细胞炎症介质表达的实验研究被引量：3
- 2003年
- 目的 设计合成靶向核因子 -κB(NF -κB)的哑铃形圈套寡核苷酸 (ODNs) ,并检测其抗炎效应。 方法 提取大鼠腹腔巨噬细胞 (pMΦ) ,随机分为正常对照组、单纯内毒素 (LPS)组、圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组。收集正常对照组和单纯LPS组LPS刺激后 1,2 ,6 ,12 ,18,2 4h上清及细胞 ;采用阳离子脂质体按质量比为 4∶1的比例分别介导 2 ,4,8mg L圈套ODNs转染大鼠pMΦ细胞 ,6h后用LPS刺激 ,收集转染后 8,12 ,18h上清及细胞。细胞免疫组化法分析LPS刺激前后p6 5表达与分布变化 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测上清中肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)、白细胞介素 - 6 (IL - 6 )蛋白表达 ,逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法检测TNF -α、IL - 6和IL - 10mRNA转录。 结果 4,8mg L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠pMΦTNF -α、IL - 6转录和表达。 结论 靶向NF -κB的哑铃形圈套ODNs具有拮抗炎症介质转录和表达的功能。
- 国华梁华平吕凤林徐祥郝天智王付龙杨文军
- 关键词：炎症基因治疗核因子-ΚB圈套寡核苷酸巨噬细胞
- 创伤后多器官功能障碍综合征的预测研究进展被引量：25
- 2004年
- 费军黄显凯梁华平蒋耀光
- 关键词：多器官功能障碍综合征创伤
