国家自然科学基金(30170377)
- 作品数：12 被引量：33H指数：4
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- 相关机构：华中科技大学中山大学附属第一医院南方医科大学更多>>
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- 杆状病毒转导不同哺乳动物骨髓来源间充质干细胞被引量：6
- 2008年
- 杆状病毒作为一种新型基因载体,若能有效转导不同哺乳动物骨髓来源间充质干细胞(bone marrow-derived mesen-chymal stem cells,BMSCs),将会成为干细胞基因修饰研究领域中更理想的一种基因载体。本文探讨了重组杆状病毒(BacV-CMV-EGFP)对不同哺乳动物BMSCs的转导效率。体外原代培养小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs。用培养3代以上的哺乳动物BMSCs进行病毒转导实验,转导2d后用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同哺乳动物BMSCs中的表达,并用流式细胞仪检测重组杆状病毒对不同哺乳动物BMSCs的转导效率。结果显示:原代培养的小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs于体外传代3次以上后,细胞呈现较均一的梭形,漩涡状生长;倒置荧光显微镜观察显示,与小鼠、大鼠、猪的BMSCs相比,恒河猴及人有更多BMSCs表达绿色荧光蛋白,且荧光强度较强;杆状病毒对小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs的转导效率分别为(21.21±3.02)%﹑(22.51±4.48)%﹑(39.13±5.79)%﹑(71.16±5.36)%及(70.67±3.74)%。上述结果表明,重组杆状病毒对不同哺乳动物BMSCs的转导效率不同,对恒河猴及人的BMSCs转导效率较高,说明重组杆状病毒可作为人或灵长类动物BMSCs基因修饰研究领域中更理想的基因载体。
- 刘正山张成卢锡林李勇许勇峰熊符冯善伟李玲
- 关键词：杆状病毒转导绿色荧光蛋白
- QT延长综合征HERG基因新突变位点E505D的功能检测被引量：2
- 2004年
- 目的 研究中国人QT延长综合征2型(LQT2)HERG基因突变(E505D)导致的功能改变。方法 将HERG基因野生型cRNA和突变型(E505D)cRNA分别和同时注射到非洲爪蟾卵母细胞,采用双电极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞膜上电流的表达,了解基因突变对电流的影响。结果 单独注射突变型cRNA记录到的电流与注射双蒸水记录到的电流差异无显著性。野生型和突变型cRNA共同注射记录到的电流显著低于单独注射野生型cRNA,电流改变呈负电位占优势的方式。结论 HERG基因突变使快速激活延迟整流性钾通道电流减小,心室复极时间延长,QTc延长,证实HERG基因突变与LQT2相关。
- 桂乐杨钧国丁久平袁国会杜戎李伟任法鑫张守焰康彩练
- 关键词：QT延长综合征突变型突变位点非洲爪蟾卵母细胞
- 先天性长QT综合征一家系的突变分析被引量：2
- 2005年
- 目的对1个先天性长QT综合征(longQTsyndrome,LQTS)家系的突变进行检测与分析。方法根据先证者的临床表现及心电图先对其致病基因初步判断,然后采用聚合酶链反应以及直接测序法对其进行KCNQ1基因检测以发现致病突变。结果根据先证者的临床表现及心电图将其致病基因初步定位于KCNQ1基因上,且在KCNQ1基因上发现一错义突变940(G→A)(G314S),此突变在欧美及日本人群中均有发现,为长QT综合征的突变热点。结论在中国长QT综合征患者中有与国外患者同样的突变热点。
- 杜戎杨钧国李伟桂乐袁国会康彩练任法新张守焰
- 关键词：突变先天性长QT综合征KCNQ1基因家系先证者致病基因
- Brugada综合征相关基因SCN5A新突变位点的检测被引量：11
- 2003年
- 目的 研究中国人Brugada综合征相关基因SCN5A突变情况。 方法 利用多聚酶链反应及DNA测序对 1个Brugada综合征家系SCN5A基因的全部 2 8个外显子进行基因检测。结果 在国内外已知突变点均无突变 ,发现 1个新的错义突变位点 (A5 4 71G) ,其相应的氨基酸改变为N1774S。结论 在中国人Brugada综合征患者的SCN5A基因上发现 1个新的突变位点。
- 任法鑫杨钧国李伟胡骏康彩练徐涛
- 关键词：BRUGADA综合征SCN5A突变位点特发性心室颤动
- 应用PCR技术对先天性长QT综合征KCNQ1基因进行定点突变的研究
- 2004年
- 利用聚合酶链反应(PCR)技术对长QT综合征(LQTS)KCNQ1基因进行定点突变的研究。首先设计两对引物(包含预定的突变),通过3轮PCR扩增,扩增出含有所需突变位点的片段,然后将片段克隆入T载体中,通过酶切连接的方法将突变点引入到pIRES2 EGFP KCNQ1中,随后用Effectene转染试剂介导转染HEK293细胞。结果在真核表达载体pIRES2 EGFP KCNQ1基础上获得了KCNQ1cDNAC934T的突变体,测序表明在序列中发生了预期的突变。将含突变点的pIRES2 EGFP KCNQ1转染HEK293细胞后,在荧光显微镜下观察到被转染的HEK293细胞发出绿色荧光,表明含突变点的pIRES2 EGFP KCNQ1得到了表达。
- 李伟杨钧国任法鑫康彩练张守焰
- 关键词：长QT综合征KCNQ1定点突变
- 先天性长QT综合征KCNQ1基因定点突变的研究被引量：1
- 2005年
- 目的利用聚合酶链反应(PCR)技术对长QT综合征(LQTS)KCNQ1基因进行定点突变的研究。方法利用PCR定点突变技术,首先设计两对引物(包含预定的突变),通过3轮PCR扩增,扩增出含有所需突变位点的片段,然后将片段克隆入T载体中,通过酶切连接的方法将突变点引入到pIRES2EGFPKCNQ1中,随后用Effectene转染试剂介导转染HEK293细胞。结果在真核表达载体pIRES2EGFPKCNQ1基础上获得了KCNQ1cDNAC682T的突变体,测序结果表明在序列中发生了预期的突变。结论KCNQ1定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。
- 李伟杨钧国任法鑫康彩练张守焰徐涛
- 关键词：先天性长QT综合征基因定点突变KCNQ1基因T载体
- 先天性长QT综合征KCNE1基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：3
- 2007年
- 目的:克隆先天性长QT综合征KCNE1基因,并构建真核表达载体。方法:从人胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出KCNE1基因;采用T-A克隆法,将KCNE1基因克隆入pCR2.1 TOPO载体中,经限制性酶切基因重组后,构建真核表达载体pEGFP-N1-KCNE1,经DNA测序鉴定,用E ffectene转染试剂介导转染HEK293细胞。结果:采用基因克隆和重组法,得到了KCNE1真核表达载体pEGFP-N1-KCNE1,并在HEK293细胞中得到了表达。结论:KCNE1基因的克隆及其真核表达载体的构建和表达为进一步的功能研究奠定了基础。
- 李伟杨钧国杜戎徐秋梅管思明柯琴梅王斌
- 关键词：长QT综合征克隆真核表达载体
- 先天性QT延长综合征亚型JLN综合征的基因突变研究被引量：4
- 2004年
- 目的 对一先天性QT延长综合征亚型JLN综合征 (JLNS)家系进行基因突变检测 ,以期发现中国人特有的JLNS突变。方法 采用聚合酶链反应及直接测序法对一JLNS家系进行KCNQ1及KCNE1的基因检测。结果 在先证者及其姐姐的KCNQ1基因的第 1 5外显子发现一错义突变 :2 0 37(G→A)、G6 4 3S ,还有另一突变是KCNQ1基因外显子 2a的第 2 2 7位核苷酸C被T代替 ,其编码的苏氨酸被异亮氨酸所代替。而这两突变分别来自其表型正常的父母亲。结论 JLNS可由KCNQ1基因上复合的杂合突变所引起。在中国QT延长综合征患者中发现两个JLNS的新的突变。
- 杜戎杨钧国桂乐康彩练袁国会张守焰李伟任法鑫
- 关键词：KCNQ1基因先天性QT延长综合征错义突变先证者异亮氨酸
- 国人SCN5A基因新的同义突变位点被引量：7
- 2004年
- 目的研究中国人心原性猝死相关基因SCN5A突变位点。方法采用聚合酶链反应和DNA测序对1例RQT间期综合征(LQTs)和2例特发性J波患者SCN5A基因进行突变检测。结果①3例患者在国内、外已知的SCN5A突变位点上,均未发现有突变。②发现1个新的同义突变(T990C),位于钠通道α-亚基的DⅠ区段S5～S6胞外环上。结论这个新的同义突变可能通过影响门控性钠通道的跨膜电流而与恶性心律失常的发生相关。
- 任法鑫杨钧国李伟胡骏袁国会杜戎桂乐
- 关键词：SCN5A基因心原性猝死
- 先天性长QT综合征和Brugada综合征基因突变被引量：4
- 2005年
- 目的研究先天性长QT综合征(LQTS,包括JLNS和RWS)和Brugada综合征(BS)家系的基因突变情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)和直接测序法,对4个LQTS家系进行KCNQ1、KCNH2和KCNE1基因检测,对3个BS家系进行SCN5A基因检测。结果在1个LQTS家系中发现1个KCNQ1基因上错义突变940穴G→A雪穴G314S雪,在Jervell-Longe-Nielsen综合征(JLNS)家系的先证者及其姐姐KCNQ1基因的第15外显子发现单核苷酸多态性(SNPs)G643S,还发现1个突变:KCNQ1基因外显子2a的第227位核苷酸C被T代替,其编码的苏氨酸被异亮氨酸所代替。在1个BS家系中发现1个SCN5A基因上的突变N1774S。其余的LQTS家系及BS家系在以上已知基因中均未发现突变。结论发现和JLNS有关的1个SNPs和1个新突变,并发现1个与欧美人群相同的Romano-Ward综合征相关突变,在BS家系中发现1个新的错义突变,丰富了LQTS及BS离子通道突变的基因库资料。
- 杜戎任法鑫杨钧国袁国会张守焰康彩练李伟桂乐李靖
- 关键词：长QT综合征BRUGADA综合征基因突变SCN5A基因
