吉林省科技厅重点项目(20040401-5)
- 作品数：14 被引量：38H指数：3
- 相关作者：谭岩段秀梅刘力华方艳秋许淑芬更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院吉林大学第二医院吉林大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅重点项目吉林省科技厅国际合作项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- C-MYC癌基因与消化系统肿瘤关系的研究被引量：1
- 2005年
- 目的:研究消化系统肿瘤中的C-MYC基因扩增的情况。方法:用聚合酶链式反应(PCR)测定84例老年患者恶性肿瘤中的C-MYC基因,通过激光密度扫描仪对EB染色后的琼脂糖凝胶进行积分光密度分析。结果:正常组织无C-MYC扩增,C-MYC/N+L-MYC比值95%可信区间为0.0869～0.6257,胃癌组织C-MYC基因扩增阳性率为69.5%,直肠癌组织的C-MYC基因扩增阳性率为62.2%,肝癌组织C-MYC基因扩增阳性率为55.6%,145例肿瘤组织C-MYC扩增总阳性率为65.5%。结论:癌组织C-MYC扩增高于正常组织,在不同消化系统肿瘤组织中扩增程度不同,与细胞潜在的增殖能力成正相关,对消化系统肿瘤的发生、发展及预后,特别是指导临床基因治疗提供有用的资料。
- 卞隽方艳秋谭岩段秀梅许淑芬刘力华姜艳芳赵平伟
- 关键词：癌基因直肠癌肝癌
- 可溶性Fas与VEGF及TIMP-1表达在乳腺癌淋巴结转移中的相互关系被引量：2
- 2006年
- 目的通过对乳腺癌可溶性Fas浓度与血管内皮生长因子(VEGF)及金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)表达之间关系的分析,探讨患者血清中sFas浓度改变对乳腺癌细胞生长、浸润和转移的影响。方法通过S-P免疫组化法和ELISA法,分别检测乳腺癌细胞VEGF和TIMP-1表达及血清sFas浓度,结合VEGF、TIMP-1与乳腺癌临床病理参数,分析浸润、淋巴结转移乳腺癌中VEGF、TIMP-1表达失衡与血清sFas浓度之间的关系。结果①VEGF阳性表达与乳腺癌淋巴结转移呈显著相关,VEGF阳性的肿瘤有淋巴结转移率为56%,明显高于VEGF阳性的肿瘤无淋巴结转移率(7%)。随着乳腺癌TNM分期和组织学分级的进展,VEGF阳性表达率逐渐增加,呈正相关。TIMP-1阳性表达与肿瘤淋巴结转移明显相关。随着TNM分期和组织学分级的进展,TIMP-1阳性表达率逐渐降低,呈负相关。②VEGF阳性表达而TIMP-1阴性表达组发生乳腺癌浸润和淋巴结转移率及血清sFas浓度最高,VEGF阴性表达而TIMP-1阳性表达组发生淋巴结转移率及血清sFas浓度最低,两组比较差异有极显著意义。结论sFas与VEGF及TIMP-1表达之间存在着反馈机理以及相互激活的密切关系。sFas浓度可以间接地反映基质金属蛋白酶(MMPs)和VEGF的表达情况,sFas在乳腺癌中的浓度变化可以反映乳腺癌的生长、局部浸润和转移。
- 王心明陈云波贾明库许洪志刘梦虹
- 关键词：可溶性FAS血管内皮生长因子乳腺癌
- MAGE-1基因疫苗的构建及其免疫学活性的研究被引量：1
- 2005年
- 目的制备MAGE-1基因疫苗,观察该疫苗诱导小鼠脾脏的抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞CTL活性及产生特异性抗体的影响。方法应用基因重组技术,构建基因疫苗pcMAGE-1;转染HEK293细胞;RT-PCR及Western blot检测MAGE-1mRNA及蛋白的表达;pcMAGE-1免疫3次BALB/c小鼠,末次免疫后7日收集血清及脾细胞。流式细胞术检测血清中抗MA-GE-1多抗的产生,MTT法检测小鼠CTL杀伤活性。结果构建的pcMAGE-1转染HEK293细胞,RT-PCR表明在mRNA水平有MAGE-1的表达;Western blot显示表达产物46kD,与预期一致。基因疫苗免疫组小鼠血清MAGE-1抗体的产生增加,与SMMC-7721结合率显著高于对照组(P<0.05)。杀伤实验结果显示,免疫组小鼠脾细胞对SMMC-7721的杀伤率明显高于两个对照组(P<0.05)。结论成功地构建了MAGE-1基因疫苗,该疫苗能够有效地诱导特异性免疫应答。
- 太京华谭宪秋谭岩时阳刘力华方艳秋段秀梅姜艳芳
- 关键词：基因疫苗MAGE-1细胞亚群特异性抗体CTL
- 人肝细胞癌相关抗原661基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化被引量：1
- 2007年
- 目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白。方法:人肝细胞癌SMMC7721细胞基因组DNA经PCR扩增HCA661基因,克隆到pGEM-Teasy中进行酶切、PCR和测序鉴定;构建重组质粒pQE-HCA661,并转化大肠杆菌M15[pREP4],经IPTG诱导表达目的蛋白;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白后进行Western blot鉴定。结果:目的基因经酶切和PCR鉴定结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GeneBank登录的序列完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达约39kD的目的蛋白。Western blot鉴定结果显示,纯化重组蛋白能够分别与抗His单克隆抗体和抗HCA661多克隆抗体特异性结合。结论:本实验成功地构建了重组原核表达质粒pQE-HCA661,工程菌表达的重组HCA661带有6×His标签,并具有免疫原性,可以用于制备单克隆抗体,或用于检测患者血清中肝细胞癌抗体以预测肿瘤恶性程度。
- 李树蕾谭岩刘力华段秀梅方艳秋许淑芬
- 关键词：基因克隆原核表达蛋白纯化免疫原性
- Fas/FasL在乳腺疾病发生发展过程中作用的研究被引量：12
- 2007年
- 目的探讨Fas、Fas配体(FasL)在乳腺肿瘤的发生发展及肿瘤免疫逃逸及反击中的作用。方法应用免疫组织化学染色方法,对51例乳腺癌,20例乳腺不典型增生,32例乳腺纤维腺瘤,和36例正常乳腺组织进行Fas和FasL的检测以及和乳腺癌不同病理学参数之间的关系。同时对上述组织用TUNEL法检测Fas和FasL表达区不同细胞的凋亡情况。结果Fas阳性细胞数与FasL阳性细胞数在不同类型的乳腺组织中表达情况正相反,其结果有显著统计学意义;在不同类型的乳腺组织中细胞凋亡指数,乳腺纤维腺瘤和乳腺不典型增生中最高,乳腺癌次之,正常乳腺组织最低;Fas与FasL在不同类型的乳腺组织中的表达强度正相反,其结果有显著统计学意义;Fas、FasL的表达与乳腺癌大小、分期、转移、分化程度密切相关,与组织类型无关。结论Fas、FasL参与了乳腺疾病发生发展的全过程,且于乳腺癌临床病理参数密切相关。
- 刘晓红王心明王延龄
- 关键词：FASFASL乳腺肿瘤
- 过继免疫治疗对手术后肺癌患者外周血免疫细胞表型影响的研究被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨C IK过继免疫治疗对手术后肺癌患者免疫功能的影响。方法:采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血T细胞、B细胞和NK细胞表型。结果:肺癌患者CD3+、CD4+、CD4/CD8比值明显低于对照组并呈显著性差异,而CD8+细胞高于对照组(P<0.01)。经C IK治疗后CD3+、CD4+、CD3-/CD16+56+细胞和CD4/CD8比值都升高,其中CD4+、CD3-/CD16+56+细胞与治疗前比较呈显著性差异(P<0.05),而CD8+细胞与治疗前比较降低(P<0.05);CD19在治疗后稍有增高趋势,但无显著性差异。结论:C IK过继免疫治疗对肺癌患者免疫功能的恢复具有促进作用。
- 卞隽谭岩方艳秋姜艳芳许淑芬刘力华段秀梅
- 关键词：过继免疫治疗CIK肺癌免疫表型
- 可溶性Fas(sFas)对乳腺癌发生发展中的影响被引量：2
- 2006年
- 目的探讨sFas的产生机制及其作为乳腺癌早期诊断标志物的可行性。方法采用ELISA方法对sFas在不同乳腺疾病和正常乳腺组织中以及在不同病理类型乳腺癌中的浓度水平进行比较分析;采用ELISA方法和流式细胞技术对乳腺癌中血清sFas的浓度水平与Fas的表达和临床各病理学参数之间的关系进行比较分析。结果乳腺癌sFas浓度水平明显高于乳腺良性疾病及正常对照组,乳腺不典型增生中sFas水平又明显高于乳腺腺瘤及正常对照组,结果具有显著性差异;在不同病理类型乳腺癌中sFas水平无显著性差异;51例乳腺癌的患者的血清sFas水平在肿瘤大小、临床分期、肿瘤转移中结果有显著性差异,sFas浓度水平与Fas阳性表达呈显著负相关。结论sFas主要来源于肿瘤细胞;其浓度变化对术前或早期诊断有重要意义。
- 陈云波王心明姜瑛徐立
- 关键词：SFAS乳腺疾病诊断标志物细胞程序性死亡
- 基因佐剂结核杆菌HSP70增强HCA661基因疫苗免疫应答被引量：7
- 2008年
- 目的:评价结核分枝杆菌HSP70(Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70)羧基端作为基因佐剂对HCA661(Hepatocellular carcinoma associated antigens 661)基因疫苗免疫效果的影响。方法:将HCA661及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo中构建基因疫苗;将eGFP及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo,体外转染φA细胞,根据eGFP的表达评价重组质粒中靶基因的转录表达效率。基因疫苗免疫BALB/c小鼠,SABC、Western blot检测免疫血清中特异性HCA661抗体;流式细胞术、ELISA法检测免疫血清中特异性HCA661抗体水平。结果:重组质粒构建成功;80%φA细胞转染eGFP后呈现绿色荧光;单基因和融合基因疫苗组动物均产生了针对HCA661的特异性抗体,融合疫苗组诱导的抗体水平较单基因疫苗组显著增高,融合基因疫苗组未产生针对mtHSP70的抗体。结论:mtHSP70羧基端作为基因佐剂增强机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答。
- 李树蕾谭岩刘力华段秀梅方艳秋许淑芬车媛媛
- 关键词：融合基因疫苗基因佐剂
- 结核分支杆菌HSP70原核表达载体的构建和表达及蛋白纯化被引量：3
- 2006年
- 目的:构建结核分支杆菌HSP70原核表达载体并诱导其表达和纯化及鉴定目的蛋白。方法:利用PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增出Mtb HSP70 DNA序列,构建重组质粒pGEM-Mtb HSP70,经酶切、PCR和测序鉴定后,将Mtb HSP70基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-MtbHSP70,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析的方法纯化目的蛋白,Western blotting杂交鉴定纯化蛋白。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank中公布的结核杆菌Mtb HSP70基因序列一致。构建的原核表达载体PQE30-Mtb HSP70在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量约为70 400的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Western blotting,在相对分子质量约70 400处可见特异性着色带。结论:成功构建原核表达载体PQE30-Mtb HSP70,并成功诱导Mtb HSP70蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的Mtb HSP70蛋白。
- 史洪博段秀梅李树蕾许淑芬车媛媛刘小林刘力华姜艳芳方艳秋谭岩
- 关键词：分支杆菌结核热休克蛋白质70原核细胞
- CEA串连表位-HSP70融合基因疫苗诱导小鼠的表位特异性免疫应答被引量：1
- 2008年
- 目的:观察癌胚抗原(CEA)串联表位-HSP70融合基因疫苗诱导的免疫应答,为开发新型肿瘤特异性基因疫苗奠定基础。方法:在已经构建含有变异热休克蛋白(HSP)序列的基础上,插入重组CEA串联表位的编码片段获得CEA串联表位-HSP融合基因疫苗。3次肌肉注射免疫Balb/c小鼠,设立注射生理盐水的阴性对照组、注射氢氧化铝佐剂混悬CEA串联表位的阳性对照组及注射pCITriCEA625-667-mtHSP70的实验组。FCM分析脾脏T细胞亚群;体外培养脾细胞,ELISA检测培养上清中干扰素γ(IFNγ)的相对含量;同时测定小鼠血清CEA特异性抗体的滴度。结果:阴性对照组脾细胞中CD3+和CD4+T细胞分别为55.1%±6.1%和30.2%±4.1%;实验组脾细胞中CD3+和CD4+T细胞分别为78.7%±9.2%和48.9%±4.7%,两组比较差异有显著性(P<0.01)。其体外特异性抗原肽诱导的IFNγ分泌处于本底水平,可视为生理性参数,体外非特异性和特异性的IFNγ分泌分别增加3和6倍(P<0.01)。血清中CEA表位特异性抗体滴度阴性对照组为0,阳性对照组<1:500,而融合基因疫苗免疫组达到1:4000。结论:CEA串联表位-HSP融合基因疫苗在体内诱导以激发辅助性T细胞为特征的免疫应答。
- 安力彬刘力华方艳秋李丹段秀梅许淑芬李树蕾谭岩宋燕
- 关键词：热休克蛋白70
