国家自然科学基金(81173371)
- 作品数：20 被引量：183H指数：9
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- 黄芩苷和木犀草苷在体外对流感病毒H1N1感染A549细胞中NF-κB信号通路的调控作用被引量：18
- 2016年
- 目的:探讨流感病毒H1N1体外感染诱导细胞NF-κB信号通路相关因子表达及黄芩苷和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的调控作用。方法:正常生长细胞接种100TCID50的病毒液;吸附2h后分别加入黄芩苷(3.96、0.99mg/L)、木犀草苷(25.0、12.5mg/L),并以奥司他韦(0.75mg/L)做阳性对照。采用基因芯片技术分析各组细胞差异表达炎性因子。以RT-PCR和Western blot法检测细胞NF-κB信号通路相关因子m RNA和蛋白的表达变化。结果:与正常细胞对照组比较,H1N1感染组差异表达基因IRAK1、RIPK1、TAB2、NFKB、IL1B、IL8、TNFA和COX-2明显上调;与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组基因NFKB、IL1B和TNFA明显下调,NFKBIA明显上调;黄芩苷高、低剂量组基因IRAK1、RIPK1、TAB2、NFKB、IL1B、IL8和TNFA明显下调,NFKBIA和TNFAIP3上调;木犀草苷高、低剂量组对差异表达基因RIPK1、IRAK1、TAB2、NFKB、IL1B、TNFA和COX-2明显下调,对NFKBIA上调作用。结论:流感病毒感染后活化NF-κB信号通路,引起炎性因子过度表达;黄芩苷和木犀草苷可以对活化通路的正负反馈进行调节,减轻病毒对宿主细胞的炎性损伤作用,发挥抗病毒作用。
- 刘晓婷顾立刚邓东沅于卓男王玥琦吴珺邱泽计
- 关键词：黄芩苷人肺腺癌A549细胞NF-ΚB信号通路基因芯片
- 疏风宣肺方和解表清里方干预流感病毒性肺炎小鼠细胞凋亡的研究被引量：18
- 2013年
- 目的病毒感染宿主细胞后,细胞凋亡天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白(caspase)途径激活限制病毒复制,但甲型流感病毒感染引起的细胞凋亡的分子机制尚不完全清楚。探讨流感病毒性肺炎小鼠肺组织细胞凋亡相关的基因及2种不同抗流感病毒方药的治疗作用。方法制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,随机分为空白组、肺炎模型组、奥司他韦对照组、疏风宣肺方高、中、低剂量组,解表清里方高、中、低剂量组。提取各组小鼠肺组织总RNA,采用基因组芯片筛选出与凋亡密切相关的差异表达基因,并用荧光定量PCR对天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白基因进行验证。结果肺炎模型组肺组织中差异表达基因casp-3、casp-8、casp-9、Fas、FasL、TNF、TNFrasf1a、Tradd、IL1a、IL1b、IL1r1、IL1r2、casp-7明显上调,与空白组比较差异有统计学意义。疏风宣肺方中剂量组差异表达基因casp-8、casp-7、Fas、FasL、TNF、TNFrasf1a、Tradd、IL1a、IL1b、IL1r1、IL1r2明显下调。疏风宣肺方低剂量组下调上述基因的作用强于解表清里方低剂量组,疏风宣肺方中剂量组治疗效果优于解表清里方中剂量组。疏风宣肺方低剂量组与解表清里方中剂量组对casp-3、-8、-9表达有显著抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。不同剂量疏风宣肺方的治疗效果与解表清里方比较如下:疏风宣肺方低剂量组>疏风宣肺方中剂量组>解表清里方中剂量组>解表清里方低剂量组。结论疏风宣肺方对细胞凋亡调控基因的调控作用强于解表清里方,上调casp-3、-8、-9表达,对抗流感病毒感染后的细胞凋亡较强,对甲型流感病毒性肺炎小鼠治疗作用优于解表清里方。
- 卢娜娜刘琪顾立刚周旭澎吴珺邱泽计张洪春晁恩祥
- 关键词：细胞凋亡
- 疏风宣肺和解表清里方药体内外对流感病毒的影响被引量：3
- 2015年
- 目的:通过疏风宣肺和解表清里两方药对流感病毒影响的体内外实验研究,探讨两方药对甲型流感病毒的抑制作用。方法:小鼠滴鼻感染流感病毒亚甲型鼠肺适应株FM1,灌胃给予疏风宣肺和解表清里两方药,观察两方药对小鼠死亡率和生存时间的影响;将两种方药作用于感染甲型流感病毒(H1N1)的肺肿瘤细胞(A549),观察两种方药对甲型流感病毒体外的抑制作用。结果:体内实验中,疏中组、疏小组和解小组明显降低病毒感染小鼠死亡率,并延长小鼠平均生存时间,并且与病毒对照组有明显差异(P<0.01,P<0.05),体外实验中两方药对流感病毒感染也有明显的保护作用(P<0.05,P<0.01)。结论:疏风宣肺方和解表清里两方药在体内外均具有良好的病毒抑制作用。
- 张沂刘晓婷顾立刚葛世杰吴珺邱泽计张洪春晁恩祥
- 关键词：疏风宣肺流感病毒体外
- 黄芩苷体外抗流感病毒作用的研究被引量：23
- 2015年
- [目的]通过观察黄芩苷对甲型流感病毒（H1N1）感染人肺癌细胞株（A549细胞株）的作用,探讨其在体外抗甲型流感病毒的作用。[方法]通过细胞病变效应（CPE）观察黄芩苷对病毒致细胞病变作用的影响,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测药物对人肺癌细胞株A549的最大无毒浓度（TC0）和半数中毒浓度（TC50）。检测药物不同给药方式和作用时间的吸光度,比较各组抗病毒有效率,找出黄芩苷最佳抗病毒作用方式。采用Probit回归计算最佳作用方式时其对病毒感染的半数抑制浓度（IC50）以及治疗指数（TI）。[结果]在7.920～0.495 mg/L范围内的黄芩苷作用24～48 h,对流感病毒所致的细胞病变作用有明显的抑制作用,细胞存活率明显高于病毒感染组。其中,抗病毒生物合成组（Ⅲ）在给药后48 h,其抗病毒有效率最高,浓度为3.960 mg/L组的细胞存活率最高,抗病毒有效率达89.107%。计算该条件下黄芩苷IC50为1.399 mg/L,TI为22.608。[结论]黄芩苷在一定浓度下有抗病毒作用,主要是通过抑制病毒在感染的A459细胞内生物合成而发挥抗病毒作用。
- 刘晓婷张沂顾立刚吴珺邱泽计王玥琦
- 关键词：黄芩苷抗流感病毒体外A549H1N1
- 疏风宣肺方和解表清里方对流感病毒H1N1感染人肺腺癌上皮细胞A549中TLR3/7信号通路作用的研究被引量：3
- 2015年
- 目的:研究疏风宣肺方和解表清里方体外对人肺腺癌上皮细胞A549中TLR3/7信号通路的影响。方法:利用基因芯片技术研究甲型流感病毒H1N1感染A549细胞后TLR3/7信号通路中基因转录的变化。采用荧光定量PCR和Western blotting法检测各组细胞中的Toll样受体3(Toll-like receptor3,TLR3)、Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、激活核因子Kappa B(nuclear factor-Kappa B,NF-κB)的mRNA及蛋白表达的变化。结果:在TLR3/7相关信号传导通路中,与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因Tlr3、Tlr7、Myd88、Nfbk1、Mapk8、Mapk13、Ifna1、Ifnβ1明显上调,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组对差异表达基因Tlr3、Tlr7、Myd88、Nfbk1、Mapk8、Mapk13、Ifna1、Ifnβ1明显下调。qRT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组TLR3/7、My D88、NF-κB的mRNA表达均显著升高(P<0.01)。与H1N1感染组比较,疏风宣肺组的TLR3/7、My D88、NF-κB的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),解表清里方对TLR3/7、NF-κB的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01)。同时,疏风宣肺组治疗效果优于解表清里组。Western blotting结果显示,H1N1感染组TLR3/7、NF-κB蛋白较正常组显著升高(P<0.05)。与H1N1感染组比较,两种方药的TLR3/7、NF-κB表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:疏风宣肺方和解表清里方可以抑制流感病毒H1N1所诱导的TLR3/7信号通路活化,下调活性NF-κB的转录活性,发挥抗流感病毒的作用。
- 葛世杰卢娜娜刘晓婷张沂顾立刚吴珺邱泽计张洪春晁恩祥
- 关键词：人肺腺癌A549细胞
- 疏风宣肺解毒方药对流感病毒性肺炎小鼠Janus激酶信号转导与转录激活因子通路的影响被引量：6
- 2016年
- 目的：观察疏风宣肺解毒方对流感病毒性肺炎小鼠肺组织Janus激酶信号转导与转录激活因子（JAK-STAT）通路的调控作用。方法将60只小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、达菲对照组和疏风宣肺方高、中、低剂量组，每组10只。应用0.05 mL的4LD50流感病毒肺适应株FM1滴鼻感染小鼠，建立小鼠流感病毒性肺炎模型；正常组以0.05 mL生理盐水滴鼻。制模成功2 h后，正常组、模型组灌服蒸馏水；达菲对照组灌服达菲（磷酸奥司他韦）2.5 g·mL-1·d-1；疏风宣肺方高、中、低剂量组分别灌服疏风宣肺解毒方药（由菊花、桑叶、杏仁、桔梗、连翘、柴胡等组成，颗粒剂），按照人与小鼠体表面积换算给药剂量，以加倍量为高剂量，折半量为低剂量，每日1次，每次0.2 mL。连续给药4 d后取小鼠肺组织，采用基因芯片技术检测小鼠JAK-STAT通路相关差异基因的表达，筛选差异表达基因的标准为：上调基因P＜0.05，且log2比值＞1，下调基因P＜0.05，且log2比值＜-1。应用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）测定肺组织Janus激酶（JAK）、γ干扰素（IFN-γ）的mRNA表达水平。结果与正常组比较，模型组差异表达基因STAT5〔log2（正常组/模型组）＝2.32〕、白细胞介素-4受体亚单位〔IL4RA，log2（正常组/模型组）＝4.77〕、白细胞介素-12受体〔IL12R， log2（正常组/模型组）＝1.58〕、 JAK〔log2（正常组/模型组）＝2.41〕均明显上调，干扰素（IFN）明显下调〔log2（正常组/模型组）＝-1.45〕；与模型组比较，达菲对照组〔log2（达菲对照组/模型组）＝1.51〕、方药各组〔log2（方药低剂量组/模型组）＝1.46，log2（方药中剂量组/模型组）＝1.72，log2（方药高剂量组/模型组）＝1.40〕差异表达基因IFN明显上调，STAT5〔log2（达菲对照组/模型组）＝-2.06，log2（方药低剂量组/模型组）�
- 刘琪王建国马彦平元海军杨琬芳顾立刚凌莎莎智鹏祥露
- 关键词：流感病毒基因芯片
- 木犀草素体外对H_1N_1感染A549作用的研究被引量：20
- 2017年
- 目的:观察木犀草素体外对感染甲型流感病毒(H_1N_1)的人肺癌细胞株(A549细胞株)的效果,探讨木犀草素在体外环境中对H_1N_1感染A549细胞的作用。方法:采用细胞病变效应(CPE)预估木犀草素抗病毒活性指数,计算出最大无毒浓度(TC0)、半数毒性浓度(TC50);检测不同时间和作用方式时木犀草素的吸光度,找出木犀草素抗病毒最佳作用方式,并计算出半数抑制浓度(IC50)以及治疗指数(TI)。结果:木犀草素的半数中毒浓度为39.81μg·m L^(-1),最大无毒浓度为25.00μg·m L^(-1);浓度在12.50~25.00μg·m L^(-1),木犀草素作用48~60 h,对H_1N_1所致的细胞病变作用有明显的抑制作用。病毒感染后2 h加入25.00μg·m L^(-1)浓度的木犀草素,抗病毒有效率最高为(87.00±1.71)%。计算该条件下木犀草素半数抑制浓度为11.282μg·m L^(-1),治疗指数为3.528。结论:木犀草素在一定条件下具有抗H_1N_1的作用。
- 邓东沅顾立刚刘晓婷于卓男吴珺邱泽计王玥琦
- 关键词：木犀草素体外A549H1N1
- 流感病毒H1N1感染A549细胞诱导凋亡及黄芩苷干预作用的研究被引量：21
- 2015年
- 目的研究黄芩苷对流感病毒H1N1感染A549细胞诱导的凋亡干预作用,探讨黄芩苷抗流感病毒感染的作用机制。方法采用基因芯片技术研究流感病毒感染细胞后细胞内凋亡信号通路中相关基因转录的变化。同时,采用荧光定量PCR检测各组细胞中天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白-8(caspase-8)和caspase-3的mRNA表达的变化。Western blot法检测各组细胞中的相关蛋白的变化。结果利用基因芯片技术,通过KEGG pathway分析涉及细胞凋亡信号传导途径。与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因Casp3、Casp7、Casp8、Casp10、TRAIL、MYD88、IL1A、和IL1B明显上调;与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组对差异表达基因Casp3、Casp4和Casp8明显下调;黄芩苷高剂量组对差异表达基因Casp3、Casp4、Casp6和Casp8明显下调;黄芩苷低剂量组除上述差异表达基因外,还明显下调了IL1RAP和Cn。qRT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组caspase-3和-8的mRNA表达均明显升高。与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组、黄芩苷高低剂量组的caspase-3和-8的mRNA表达均明显降低(P<0.01);并且,黄芩苷低剂量组的治疗效果优于高剂量组;该结果和基因芯片表达的结果基本相符。结论流感病毒体外感染细胞A549后诱导凋亡,黄芩苷能通过调控天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白家族介导凋亡通路的相关基因表达,对病毒感染诱导的细胞凋亡有干预作用,从而发挥抗病毒作用。
- 刘晓婷张沂顾立刚吴珺邱泽计于卓男王玥琦
- 关键词：黄芩苷基因芯片
- 流感病毒性肺炎小鼠自然杀伤细胞毒性相关信号转导通路差异基因表达及两种不同治法中药方剂的调控作用研究被引量：9
- 2013年
- 目的观察疏风宣肺方和解表清里方对流感病毒性肺炎小鼠自然杀伤细胞（NK细胞）毒性相关信号转导通路差异基因表达的调控作用。方法将90只ICR小鼠按随机数字表法分为对照（N）组、模型（M）组、奥司他韦（C）组以及中药疏风宣肺方高、中、低剂量（SH、SM、SL）组和解表清里方高、中、低剂量（JH、JM、JL）组，每组10只。采用流感病毒亚甲型鼠肺适应株FM1滴鼻感染方法制备流感病毒性肺炎模型；N组以0．05m1等渗盐水滴鼻。于制模后2h，C组给予奥司他韦11．375mg·kg-1·d-1灌胃；SH、SM、SL组给予疏风宣肺方（主要药物金银花、连翘、板蓝根等）3．76、1．88、0．94g.kg-1·d-1灌胃；JH、JM、JL组给予解表清里方（主要药物麻黄、石膏、生甘草等）4．36、2．18、1．09g·kg-1.d-1灌胃；N组及M组则灌胃等量生理盐水；各组均0．2mud，连用4d。提取肺组织总RNA，采用基因芯片筛选出NK细胞毒性信号转导通路相关的差异表达基因，以I表示信号强度；并采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹试验（Weslernblotting）对部分基因进行验证。结果在NK细胞毒性相关信号转导通路中，M组较N组上调差异基因43个。用药治疗后，SM组下调差异表达基因36个，JM组下调差异表达基因29个，SL组下调差异表达基因22个，JH组下调差异表达基因21个，SH组下调差异表达基因20个，儿组下调差异表达基因10个；SH、SL、JH、JM、JI组表达下调的基因均包括在SM组的表达谱中，表明中剂量疏风宣肺方调控NK细胞毒性作用最显著。荧光定量PCR和Westernblotting测定结果显示，与M组比较，疏风宣肺方与解表清里方各剂量组对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的mRNA及蛋白表达均有显著抑制作用，疏风宣肺方和解表清里方均以中剂量组最低（TNF—αmRNA：1．07±0．19、1．19±0．14比3．20±0．56，均P〈0�
- 卢娜娜刘琪顾立刚周旭澎吴珺邱泽计张洪春晁恩祥张沂
- 关键词：流感病毒性肺炎小鼠
- 疏风宣肺和解表清里方药对流感病毒性肺炎小鼠Toll样受体通路影响的研究被引量：11
- 2014年
- 目的 观察疏风宣肺、解表清里方对流感病毒亚甲型肺适应株FM1感染小鼠肺组织细胞Toll样受体（TLR）信号转导通路的影响.方法 制备小鼠甲型流感病毒性肺炎模型,按随机数字表法分为对照组（C）,模型组（M）,达菲组（D）,疏风宣肺方高、中、低剂量组（SH、SM、SL）,解表清里方高、中、低剂量组（JH、JM、JL）,每组12只.制模后2h,对照组、模型组均灌胃蒸馏水,达菲组灌胃达菲2.5 g·mL^-1·d^-1,不同剂量方药组分别灌胃疏风宣肺方颗粒剂3.76、1.88、0.94 g·kg^-1·d^-1和解表清里方颗粒剂4.37、2.18、1.09 g·kg^-1·d^-1,各组均0.2 mL/d,连用4d.提取肺组织总RNA,采用基因组芯片筛选出与TLR通路相关的差异表达基因,并用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）对部分基因进行验证.结果 与对照组比较,模型组差异表达基因TLR7、MYD88、CCL5、IFNB1、IL6、IL12a、NFKBIA、IKBKB明显上调.与模型组比较,疏风宣肺方中、低剂量组和解表清里方中剂量组差异表达基因TLR3、TLR7、MYD88、CCL5、IFNB1、IL6、IL12a、NFKBIA、IKBKB明显下调[疏风宣肺方中剂量组log2（SM组/M组信号强度）分别为-1.24、-2.02、-1.36、-1.95、-0.63、-1.33、-3.50、-1.33、-1.33,疏风宣肺方低剂量组log2（SL组/M组信号强度）分别为-1.07、-2.43、-2.63、-2.30、-5.09、-3.19、-3.53、-1.95、-1.95;解表清里方中剂量组log2（JM组/M组信号强度）分别为-1.78、-0.55、-1.35、-1.47、-1.65、-2.03、-3.02、-1.57、-1.57],提示疏风宣肺方治疗效果比解表清里方好.RT-PCR结果显示,与模型组比较,疏风宣肺方高、中、低剂量组和解表清里方高、中剂量组及达菲组对TLR7、核转录因子-KB（NF-κB）、髓样分化抗原88（MyD88）的mRNA表达均有抑制作用,其中疏风宣肺方中、低剂量组（TLR7 mRNA：3.6±0.3、3.5±1.2比7.4±1.6; NF-κBmRNA：1.1±0.2、1.0±0.2比2.2±0.4;MyD88 mRNA：1.4±0.4、1.0±0.3比3.4±0.9
- 刘琪王建国马彦平顾立刚
- 关键词：流感病毒性肺炎TOLL样受体小鼠
