重庆市自然科学基金(2007BB0266)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：龚建平李生伟刘作金李钺周世骥更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院重庆市涪陵中心医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBsAg-树突状细胞疫苗对肝移植后免疫抑制状态大鼠抗-HBs产生的影响
- 2010年
- 目的 观察乙型肝炎表面抗原（HBsAg）冲击的树突状细胞（DCs）疫苗对肝移植（LT）术后处于免疫抑制状态大鼠的抗HBs产生的影响。方法Lewis大鼠LT术后（BN大鼠为供体）给予大剂量他克莫司（FK506，2mg／kg），建立LT术后免疫抑制状态的动物模型，并随机分为两组。术后14d及28d，经腹腔注入HBsAgDCs疫苗者为HBsAg—DCs组（15只），连续观察12周，注入HBsAg疫苗200ul者为HBsAg组（15只）；未子免疫抑制的LT术后Lewis大鼠为对照组（5只）。切取肝脏组织行光、电镜检查；RT—PCR检测脾脏白细胞介素（IL）2、干扰素（IFN）YmRNA表达水平；酶联免疫吸附法检测血清IL-2、IFNy及抗HBs水平。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果大剂量FK506使HBsAgDCs组及HBsAg组动物处于高度免疫抑制状态，肝脏无排斥反应、IL2及IFNY表达水平明显低于对照组，t值为21．35～48．74，P值均〈0．05；HBsAg—DCs组在疫苗注射后1、2、3个月均能检测到高滴度的抗HBs，分别为（255．24±34．16）IU／L、（145．11±12．37）IU／L、（185．43±17．18）IU／L，明显高于HBsAg组（抗-HBs几乎为0），t值分别为45．24、47．69、58．38，P值均〈0．05。结论在LT术后处于免疫抑制状态的大鼠体内，HBsAg—DCs疫苗仍能诱导出高血清滴度的抗HBs。
- 李钺陈先锋刘作金龚建平李生伟
- 关键词：免疫抑制肝炎病毒乙型树突状细胞
- HBsAg冲击的树突状细胞疫苗的制备及免疫活性研究被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨利用HBsAg冲击树突状细胞(Dendritic cells,DC)制备HBsAg-树突状细胞疫苗(HBsAg-DC疫苗)的基本方法并检测其免疫活性。方法:收集Lewis大鼠骨髓细胞,加入含rGM-CSF(4ng/ml)及rIL-4(8ng/ml)的RPMI1640培养7d后,加入HBSAg(100μg/ml)再培育48h,即获得HBsAg-DC疫苗。倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测其表型;单向混合淋巴细胞反应评价HBsAg-DC疫苗的细胞免疫活性。结果:采用该方法可诱导扩增出较多数量和较高纯度DCs。HBsAg冲击DCs后,明显增强DCs的T细胞刺激活性。同种异体和自体之间T淋巴细胞增殖功能没有显著差异(P>0.05)。经HBsAg冲击后第3d(培养第10d)的DCs在异体T淋巴细胞增殖反应中能够诱导出很强的增殖应答反应;MTT比色法分析显示不同密度的DCs和HBsAg-DCs经丝裂霉素C处理后,均能明显刺激同种异体T细胞增殖,且该效应随着DCs和HBsAg-DCs数量的增加而逐渐增强(P<0.01);同密度的HBsAg-DCs比DCs的刺激作用更强,差异有显著性(P<0.01)。结论:本方法可以诱导扩增出较多数量和较高纯度DC,HBsAg-DC具有较强的抗原递呈能力。
- 李生伟李钺刘作金龚建平
- 关键词：疫苗乙型肝炎病毒树突状细胞
- 超声微泡包裹单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶自杀基因靶向治疗小鼠肝癌的效果被引量：1
- 2010年
- 目的观察超声微泡携单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶（HSV1-TK）基因在小鼠肝癌细胞H22移植瘤组织中的转染效果及联合更昔洛韦（CCV）后对肿瘤的抑瘤效应。方法建立小鼠肝癌（H22）皮下移植瘤模型40只，随机分成4组，分别经鼠尾静脉注射入等量磷酸盐缓冲液（A组）、HSV1-TK（B组）、HSV1-TK（C组）、HSV1-TK＋做泡（D组），每次注射200μl，每隔3d注射1次，共注射3次；对C组、D组小鼠分别给予1MHz、2W／cm^2、5min超声辐照。首次注射HSV1 TK48h后采用Western blot检测肿瘤组织中TK蛋白的表达情况，且各治疗组分别从腹腔注射GCV0．2ml（100mg·kg^-1·d^-1），连续注射14d。测肿瘤大小，计算抑瘤率，治疗结束后处死动物行病理学检查。数据采用重复测量资料的方差分析，两两比较采用LSD—t法。结果在超声引导下微泡包裹的HSV1-TK基因可以准确定位于肿瘤组织并靶向释放，在处理组中均有TK蛋白的表达，其中D组表达量明显高于其他各组（P〈0．05）。抑瘤率在A组、B组、C组、D组中分别为0、3．90％±1．80％、22．70％±2．86％、41．25％±3．20％（C组、D组与B组相比，P值均〈0．05；D组与C组相比，P〈0．05）。HE染色结果显示D组较A组的坏死病变程度明娃减轻。结论超声辐照可破坏包裹HSV1-TK基因的微泡以定位释放，既增加了肝癌基因治疗的靶向性，又提高了外源基因的转染效率，从而增强了自杀基因对小鼠肝癌的杀伤效果。
- 周世骥刘长安龚建平刘作金唐勇李生伟徐越艾志国
- 关键词：肝细胞基因HSV1-TK超声微泡
